乌饭树树叶黄酮及多糖抑菌活性的研究
乌饭树树叶黄酮及多糖抑菌活性的研究[20200408173950]
摘要
采用二倍稀释法和牛津杯法对乌饭树叶多糖及黄酮进行体外抑菌实验，并研究了乌饭树叶黄酮及多糖的最小抑菌浓度，探讨了pH对乌饭树叶黄酮及多糖抑菌活性的影响。实验结果表明：乌饭树叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等有明显的抑菌效果，抑菌圈直径分别16.5mm、17.3mm、14.2mm，对金黄色葡萄球菌抑菌作用最强。乌饭树树叶多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果，抑菌圈直径分别为15.6mm、14.8mm，而对枯草芽孢杆菌无明显抑菌效果；乌饭树叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为0.24mg/mL、0.12mg/mL、0.48mg/mL；乌饭树叶多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为0.68mg/mL、0.34mg/mL；在偏酸性的情况下，乌饭树树叶粗黄酮和粗多糖的抑菌效果较好。当pH为4时，乌饭树树叶粗黄酮的抑菌活性最好，当pH为6时，乌饭树叶粗多糖的抑菌活性最好。
*查看完整论文请 +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
关键字:乌饭树叶黄酮多糖抑菌活性最小抑菌浓度
目 录
1引言 1
1.1 乌饭树树叶（VBTL)的概况 1
1.2 黄酮的概述及研究进展 1
1.3 多糖的概述及研究进展 2
2材料与方法 3
2.1材料、试剂与仪器 3
2.2实验方法 3
2.2.1乌饭树叶黄酮的提取及初步纯化 3
2.2.2乌饭树叶多糖的提取及初步纯化 3
2.2.3 培养基的制备 3
2.2.4菌种培养与活化 4
2.2.5 菌悬液的制备 4
2.2.6 乌饭树叶黄酮及多糖的抑菌性能 杯碟法 4
2.2.7 乌饭树叶黄酮及多糖的最小抑菌浓度 固体平板培养基稀释法 4
2.2.8 pH对乌饭树叶黄酮及多糖抑菌活性的影响 5
3结果与分析 6
3.1对细菌抑菌实验结果 6
3.1.1乌饭树叶黄酮及多糖溶液的抑菌效果 6
3.1.2乌饭树叶黄酮及多糖的最小抑菌浓度（MIC） 6
3.1.3 pH对乌饭树树叶黄酮及多糖抑菌效果影响 7
3.2对真菌抑菌结果 8
4结论 9
参 考 文 献 10
1引言
1.1 乌饭树树叶（VBTL)的概况
乌饭树为杜鹃花科越桔属植物，又名牛筋、黑饭草、沙莲子、米饭花、南烛、乌饭草等，其根、叶、果均可入药，通常为落叶或常绿灌木，广泛生长在长江以南地区，通常分布在丘陵地带或者400-1400m海拔的山坡林中，是酸性土壤的指示性植物[1]。乌饭树叶提取物中所含化学物质比较复杂，主要以前花青素和槲皮素为代表的植物多酚类为主[2]，另外还有少量的维生素、糖、果胶、有机酸、蛋白质以及其它一些成分[3]。同时乌饭树叶中还含有6种脂肪酸类物种：棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸，其中亚麻酸含量最高达36.4%[4]。乌饭树叶中还含有大量的微量元素，其中含量比较高的有锌、铁、锰、钙、钾、铜、银[5]。
乌饭树有着非常悠久药用历史，在中医界普遍认为乌饭树叶性平、味淡，在它的叶汁中含有名贵的天然黑色素，其具有松弛血管、改善血液循环的功效，还可以预防动脉硬化、糖尿病等[6]，除此以外它还能治疗牙龈腐烂，其食用和药用价值很高，根据李时珍《本草纲目》记载：“南烛止泻除睡，强筋益气，利肠胃，补骨髓，明目乌发，久服，固精驻颜，轻身明目”[7]。
大量的酚羟基存在于植物多酚分子结构中，因此乌饭树叶才表现出强大的抑酶性和抑菌性，正是由于这种抑酶性和抑菌性从而使乌饭树叶提取物成为一种有待开发的天然食品防腐剂[8]。乌饭树叶提取物之所以有防腐的功效能，是因为依靠其所具有的抑酶性和抑菌性，能够强有力地杀死或抑制细菌和真菌等微生物在食品中生长和繁殖。乌饭树叶在民间被用作防腐剂已经有些历史了，用乌饭树叶煮过的饭的保质期会比普通米饭拥有更长的保质期，同时也具有良好的保健效果，超市里已经在出售乌饭树叶制成的乌饭树叶米，且销路很好，说明其已近被人们所接受。
乌饭树叶中所含的天然色素成分不仅可以用作各种保健品，同时也可以作为食品添加剂，同时乌饭树树叶中大量的黄酮和多糖并没有被充分的开发利用，因此，乌饭树叶无论是从保健食疗的角度，还是从药用的角度均具有较广阔的开发前景[9]。乌饭树在我国分布广泛，且蕴藏量很大，若能对其中的有效部位或有效成分进行提取、分离、并制成一定的剂型，使其从民间食用品上升到保健食品乃至药品，不仅可以扩大药用资源，而且会产生更大的社会及经济效益[10]。
1.2 黄酮的概述及研究进展
黄酮类化合物是一类多苯化合物，广泛存在具有C6—C3—C6基本结构，广泛存在于植物体的叶片、木质、树皮和果实中，属植物的次生代谢产物，因多呈黄色而称为类黄酮（flavonoid），目前已发现类黄酮5000多种，主要有黄酮、黄酮醇、黄烷酮、黄烷醇、黄烷双醇、二氢黄酮醇、花青素和异黄酮等[11]。
目前很多研究发现植物水提物有抑菌作用[12]。植物中的抑菌成分一般存在于叶子、花、花芽、球茎、根、果实或植物的其他部分。现已知植物中具有抑菌活性的主要成分是萜烯、黄酮类、乙醛、酸等，其中植物水提物中报道最多的是黄酮的抑菌作用[13]。随着社会的进步和科研水平的提高，国内外学者对黄酮的研究更加深入，黄酮对微生物的抑制和杀灭作用也逐渐引起了人们的广泛关注，使黄酮的研究进入了一个新的阶段。而乌饭树树叶中就含有丰富的黄酮，且目前国内外对于乌饭树树叶黄酮的研究较少，其也具有抑菌活性效果，本论文中所研究的乌饭树树叶黄酮抑菌活性对开发乌饭树叶天然防腐剂有一定的指导意义。
1.3 多糖的概述及研究进展
多糖是一种由自然界中的醛糖和（或）酮糖通过糖苷键而连接在一起的聚合物，多糖是一切生物有机体不可或缺的成分，它维持着生命的种种生理机能，近年来，植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已经作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现，各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已经相继被发现，多糖的结构非常的复杂，这是因为它许多不同单糖残基、不同的连接位置和不同类型的糖苷键，能够形成具有不同的构象、不同的相对分子质量，以及链内和链间氢键的二级结构。目前对多糖的研究开发包含了多糖的分离、纯化、结构测定、活性测定及结构修饰[14]。
随着人们深入研究多糖，发现多糖拥有着很多生物活性效用。而乌饭树树叶中同样含有着多糖，本论文也着重研究乌饭树树叶多糖的抑菌活性。
2材料与方法
2.1材料、试剂与仪器
乌饭树叶（无锡宜兴）
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉、酿酒酵母(菌种为微生物实验室提供)
超声-微波协同萃取仪（CW-2000 中国·上海新拓分析仪器科技有限公司）精密天平（PGC-753e 艾德姆衡器）数显恒温水浴锅（HH-2 金坛市杰瑞尔电器有限公司）1000克摇摆式高速中药粉碎机（HK-20B 广州市旭朗机械设备有限公司）可见分光光度计（722型 上海菁华科技仪器有限公司）旋转蒸发器（RE-52A 上海亚荣生化仪器厂）循环水式多用真空泵（SHB-B95型 郑州长城科工贸有限公司）立式压力蒸汽灭菌锅（LDZX-75KBS 上海申安医疗器械厂）不锈钢胆电热恒温培养箱（DHP-90 上海索普机械有限公司）
2.2实验方法
2.2.1乌饭树叶黄酮的提取及初步纯化
精密分别秤取20g经过粉碎的乌饭树叶，以固液比1:40加入800mL蒸馏水在60℃的恒温水浴锅中水提2h，得到乌饭树叶初提液，再进行抽虑，除去滤渣，将全部滤液进行反复旋转蒸发浓缩至100mL左右，用95%的乙醇沉淀多糖、蛋白质等一些水溶性物质，再进行离心，将得到的上清液经过旋转蒸发除去乙醇后得到的物质即为乌饭树叶水溶性粗黄酮的提取液，通过AB-8型大孔树脂对乌饭树叶粗黄酮提取液进行精制，条件：pH为5.05左右，溶液浓度为0.68~1.33mg/mL，吸附流速为3mL/min[9]。
2.2.2乌饭树叶多糖的提取及初步纯化
乌饭树树叶水溶性粗多糖的提取液用2mol/L盐酸调节pH至3，然后放置过夜，在3000r/min下离心20min，弃去沉淀，冷冻干燥，得到初步纯化的乌饭树叶多糖[10]。
摘要
采用二倍稀释法和牛津杯法对乌饭树叶多糖及黄酮进行体外抑菌实验，并研究了乌饭树叶黄酮及多糖的最小抑菌浓度，探讨了pH对乌饭树叶黄酮及多糖抑菌活性的影响。实验结果表明：乌饭树叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等有明显的抑菌效果，抑菌圈直径分别16.5mm、17.3mm、14.2mm，对金黄色葡萄球菌抑菌作用最强。乌饭树树叶多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果，抑菌圈直径分别为15.6mm、14.8mm，而对枯草芽孢杆菌无明显抑菌效果；乌饭树叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为0.24mg/mL、0.12mg/mL、0.48mg/mL；乌饭树叶多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为0.68mg/mL、0.34mg/mL；在偏酸性的情况下，乌饭树树叶粗黄酮和粗多糖的抑菌效果较好。当pH为4时，乌饭树树叶粗黄酮的抑菌活性最好，当pH为6时，乌饭树叶粗多糖的抑菌活性最好。
*查看完整论文请 +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
关键字:乌饭树叶黄酮多糖抑菌活性最小抑菌浓度
目 录
1引言 1
1.1 乌饭树树叶（VBTL)的概况 1
1.2 黄酮的概述及研究进展 1
1.3 多糖的概述及研究进展 2
2材料与方法 3
2.1材料、试剂与仪器 3
2.2实验方法 3
2.2.1乌饭树叶黄酮的提取及初步纯化 3
2.2.2乌饭树叶多糖的提取及初步纯化 3
2.2.3 培养基的制备 3
2.2.4菌种培养与活化 4
2.2.5 菌悬液的制备 4
2.2.6 乌饭树叶黄酮及多糖的抑菌性能 杯碟法 4
2.2.7 乌饭树叶黄酮及多糖的最小抑菌浓度 固体平板培养基稀释法 4
2.2.8 pH对乌饭树叶黄酮及多糖抑菌活性的影响 5
3结果与分析 6
3.1对细菌抑菌实验结果 6
3.1.1乌饭树叶黄酮及多糖溶液的抑菌效果 6
3.1.2乌饭树叶黄酮及多糖的最小抑菌浓度（MIC） 6
3.1.3 pH对乌饭树树叶黄酮及多糖抑菌效果影响 7
3.2对真菌抑菌结果 8
4结论 9
参 考 文 献 10
1引言
1.1 乌饭树树叶（VBTL)的概况
乌饭树为杜鹃花科越桔属植物，又名牛筋、黑饭草、沙莲子、米饭花、南烛、乌饭草等，其根、叶、果均可入药，通常为落叶或常绿灌木，广泛生长在长江以南地区，通常分布在丘陵地带或者400-1400m海拔的山坡林中，是酸性土壤的指示性植物[1]。乌饭树叶提取物中所含化学物质比较复杂，主要以前花青素和槲皮素为代表的植物多酚类为主[2]，另外还有少量的维生素、糖、果胶、有机酸、蛋白质以及其它一些成分[3]。同时乌饭树叶中还含有6种脂肪酸类物种：棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸，其中亚麻酸含量最高达36.4%[4]。乌饭树叶中还含有大量的微量元素，其中含量比较高的有锌、铁、锰、钙、钾、铜、银[5]。
乌饭树有着非常悠久药用历史，在中医界普遍认为乌饭树叶性平、味淡，在它的叶汁中含有名贵的天然黑色素，其具有松弛血管、改善血液循环的功效，还可以预防动脉硬化、糖尿病等[6]，除此以外它还能治疗牙龈腐烂，其食用和药用价值很高，根据李时珍《本草纲目》记载：“南烛止泻除睡，强筋益气，利肠胃，补骨髓，明目乌发，久服，固精驻颜，轻身明目”[7]。
大量的酚羟基存在于植物多酚分子结构中，因此乌饭树叶才表现出强大的抑酶性和抑菌性，正是由于这种抑酶性和抑菌性从而使乌饭树叶提取物成为一种有待开发的天然食品防腐剂[8]。乌饭树叶提取物之所以有防腐的功效能，是因为依靠其所具有的抑酶性和抑菌性，能够强有力地杀死或抑制细菌和真菌等微生物在食品中生长和繁殖。乌饭树叶在民间被用作防腐剂已经有些历史了，用乌饭树叶煮过的饭的保质期会比普通米饭拥有更长的保质期，同时也具有良好的保健效果，超市里已经在出售乌饭树叶制成的乌饭树叶米，且销路很好，说明其已近被人们所接受。
乌饭树叶中所含的天然色素成分不仅可以用作各种保健品，同时也可以作为食品添加剂，同时乌饭树树叶中大量的黄酮和多糖并没有被充分的开发利用，因此，乌饭树叶无论是从保健食疗的角度，还是从药用的角度均具有较广阔的开发前景[9]。乌饭树在我国分布广泛，且蕴藏量很大，若能对其中的有效部位或有效成分进行提取、分离、并制成一定的剂型，使其从民间食用品上升到保健食品乃至药品，不仅可以扩大药用资源，而且会产生更大的社会及经济效益[10]。
1.2 黄酮的概述及研究进展
黄酮类化合物是一类多苯化合物，广泛存在具有C6—C3—C6基本结构，广泛存在于植物体的叶片、木质、树皮和果实中，属植物的次生代谢产物，因多呈黄色而称为类黄酮（flavonoid），目前已发现类黄酮5000多种，主要有黄酮、黄酮醇、黄烷酮、黄烷醇、黄烷双醇、二氢黄酮醇、花青素和异黄酮等[11]。
目前很多研究发现植物水提物有抑菌作用[12]。植物中的抑菌成分一般存在于叶子、花、花芽、球茎、根、果实或植物的其他部分。现已知植物中具有抑菌活性的主要成分是萜烯、黄酮类、乙醛、酸等，其中植物水提物中报道最多的是黄酮的抑菌作用[13]。随着社会的进步和科研水平的提高，国内外学者对黄酮的研究更加深入，黄酮对微生物的抑制和杀灭作用也逐渐引起了人们的广泛关注，使黄酮的研究进入了一个新的阶段。而乌饭树树叶中就含有丰富的黄酮，且目前国内外对于乌饭树树叶黄酮的研究较少，其也具有抑菌活性效果，本论文中所研究的乌饭树树叶黄酮抑菌活性对开发乌饭树叶天然防腐剂有一定的指导意义。
1.3 多糖的概述及研究进展
多糖是一种由自然界中的醛糖和（或）酮糖通过糖苷键而连接在一起的聚合物，多糖是一切生物有机体不可或缺的成分，它维持着生命的种种生理机能，近年来，植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已经作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现，各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已经相继被发现，多糖的结构非常的复杂，这是因为它许多不同单糖残基、不同的连接位置和不同类型的糖苷键，能够形成具有不同的构象、不同的相对分子质量，以及链内和链间氢键的二级结构。目前对多糖的研究开发包含了多糖的分离、纯化、结构测定、活性测定及结构修饰[14]。
随着人们深入研究多糖，发现多糖拥有着很多生物活性效用。而乌饭树树叶中同样含有着多糖，本论文也着重研究乌饭树树叶多糖的抑菌活性。
2材料与方法
2.1材料、试剂与仪器
乌饭树叶（无锡宜兴）
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉、酿酒酵母(菌种为微生物实验室提供)
超声-微波协同萃取仪（CW-2000 中国·上海新拓分析仪器科技有限公司）精密天平（PGC-753e 艾德姆衡器）数显恒温水浴锅（HH-2 金坛市杰瑞尔电器有限公司）1000克摇摆式高速中药粉碎机（HK-20B 广州市旭朗机械设备有限公司）可见分光光度计（722型 上海菁华科技仪器有限公司）旋转蒸发器（RE-52A 上海亚荣生化仪器厂）循环水式多用真空泵（SHB-B95型 郑州长城科工贸有限公司）立式压力蒸汽灭菌锅（LDZX-75KBS 上海申安医疗器械厂）不锈钢胆电热恒温培养箱（DHP-90 上海索普机械有限公司）
2.2实验方法
2.2.1乌饭树叶黄酮的提取及初步纯化
精密分别秤取20g经过粉碎的乌饭树叶，以固液比1:40加入800mL蒸馏水在60℃的恒温水浴锅中水提2h，得到乌饭树叶初提液，再进行抽虑，除去滤渣，将全部滤液进行反复旋转蒸发浓缩至100mL左右，用95%的乙醇沉淀多糖、蛋白质等一些水溶性物质，再进行离心，将得到的上清液经过旋转蒸发除去乙醇后得到的物质即为乌饭树叶水溶性粗黄酮的提取液，通过AB-8型大孔树脂对乌饭树叶粗黄酮提取液进行精制，条件：pH为5.05左右，溶液浓度为0.68~1.33mg/mL，吸附流速为3mL/min[9]。
2.2.2乌饭树叶多糖的提取及初步纯化
乌饭树树叶水溶性粗多糖的提取液用2mol/L盐酸调节pH至3，然后放置过夜，在3000r/min下离心20min，弃去沉淀，冷冻干燥，得到初步纯化的乌饭树叶多糖[10]。
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