亚硝酸盐降解菌的筛选及其降解特性的研究
亚硝酸盐降解菌的筛选及其降解特性的研究[20200509190249]
摘要：本文从两种泡菜中分离至28株乳酸菌，并在此基础上对各菌株在MRS液体培养基中降解亚硝酸盐的能力进行了比较分析。通过初筛优选出15株亚硝酸盐降解能力较高的菌株，再通过在MRS磷酸盐缓冲培养基中的复筛，排除酸性末端对亚硝酸盐降解的干扰，优选出两株降解亚硝酸盐能力较高的菌株1-1，9SH。为了进一步了解不同条件对两个菌株降解亚硝酸盐的影响，对影响其降解亚硝酸盐的条件(温度，起始pH，盐的浓度)进行了初步的研究，得出如下结果：①菌株1-1降解亚硝酸盐的最适温度范围为25℃～35℃，30℃时最高；最适pH范围为5.5-6.5，5．5时最高；最适盐度范围为1%-5%，1%时最高。②菌株9SH降解亚硝酸盐的最适温度范围为25℃～35℃，30℃时最高；最适pH范围为5.5-6.5，5.5时最高；最适盐度范围为1%-5%，最适盐度为2%。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
关键字:乳酸菌；亚硝酸盐；降解；发酵；泡菜
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料、试剂及培养基2
1.2 仪器 2
1.3 乳酸菌的分离纯化2
1.4 降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选2
1.5 乳酸菌降解亚硝酸盐特性的研究3
1.5.1生长曲线的测定 3
1.5.2温度对亚硝酸盐降解影响的测定3
1.5.3盐的浓度对亚硝酸盐降解影响的测定3
1.5.4 pH对亚硝酸盐降解影响的测定3
2 结果与分析3
2.1 菌株分离纯化及初步鉴定结果 3
2.1.1四川泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的初筛3
2.1.2四川泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的复筛3
2.1.3自制泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的初筛4
2.1.4自制泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的复筛4
2.2 不同培养条件对亚硝酸盐降解的影响 4
2.2.1生长曲线测定5
2.2.2温度对亚硝酸盐降解的影响5
2.2.3盐的浓度对亚硝酸盐降解的影响6
2.2.4 pH对亚硝酸盐降解的影响7
3 总结与讨论8
3.1降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选 8
3.2影响乳酸菌降解亚硝酸盐的几个因素8
3.3 乳酸菌降解亚硝酸盐法的优势 8
致谢9
参考文献 9
亚硝酸盐降解菌的筛选及其降解特性的研究
食品质量与安全101 吴 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
金生
引言
引言
亚硝酸盐氮作为氮循环的中间产物可与仲胺类生成强致癌性的亚硝胺类物质，长期摄入可诱发消化道系统癌变，亚硝酸盐还可使血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去携氧能力，产生正铁血红肮症，严重者可致死。我国大部分地区的亚硝酸盐污染已相当严重[1]。因此，如何消除亚硝酸盐的危害己引起科学界的极大关注。
亚硝酸盐的致癌作用及其对人类环境的危害，日益引起人们的注意。所以，寻求有效的降解亚硝酸盐的途径，具有一定的意义。
许多研究表明乳酸菌具有降解亚硝酸盐的性能。张庆芳[2]等对乳酸菌降解亚硝酸盐的机理进行了研究。认为其机理为：乳酸菌对亚硝酸盐的降解分为酶降解和酸降解两个阶段。在发酵前期，培养液pH>4．5时，乳酸菌对亚硝酸盐降解以酶降解为主；发酵后期，亚硝酸盐的降解主要以酸降解为主。但在其研究中很难排除酸性末端对亚硝酸盐降解的干扰。
本文采用磷酸盐缓冲培养基对分离自两种泡菜中的乳酸菌的亚硝酸盐降解能力进行比较，由于缓冲盐类的作用，使乳酸菌在降解亚硝酸盐的过程中，基本不受酸性末端对亚硝酸盐降解的影响，从而可以较为容易的筛选出具有较高降解亚硝酸盐能力的优良菌株。
1 材料、试剂、培养基、仪器及方法
1．1 材料、试剂与培养基
1．1．1 材料
本试验使用材料泡菜为四川泡菜及自制泡菜（购于南京苏果超市）。
1．1．2 试剂
蛋白胨；牛肉膏；酵母粉；葡萄糖；吐温—80；琼脂；柠檬酸二铵；乙酸钠；硫酸镁；硫酸锰；磷酸氢二钾；乙酸；盐酸萘乙二胺；对氨基苯磺酸；浓盐酸；乙酸锌；琼脂。
1．1．3培养基
MRS液；固体培养基：胰蛋白陈10g，牛肉膏l0g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，KH2P04 2g，乙酸钠5g，吐温-80 1mL，硫酸镁0.5 g，硫酸锰0.29g，水1000mL，pH6.5，(固体培养基中补加2％琼脂)，121℃25min灭菌。
1．2 仪器
生化培养箱 SHP．150 上海精宏设备有限公司
可见分光光度计 721 上海菁华科技仪器有限公司
离心机 TGL．16G 上海安亭科学仪器厂
水浴锅 HH．S11．2 上海跃进医疗器械厂
微波炉 WP800T 佛山格兰仕微波炉电器有限公司
1．3 乳酸菌的分离纯化
分别称取四川泡菜和自制泡菜1g，分别于无菌条件下加入到9mL无菌水中，混匀。取前述混匀液按十倍稀释法进行稀释，形成10-1-10-9系列梯度，放置4℃冰箱备用。
采用常规平板稀释法[3]，选择前述梯度稀释液中适宜的稀释浓度，取0．1mL于培养皿中，后加入55℃左右的固体培养基，摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基，以隔绝氧气，于30℃培养箱中培养72h。挑取各培养基中溶钙圈较大，变黄区 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
域较广的单菌落，进一步划线分离，同时每一步纯化都要镜检观察，直到镜下菌体一致为止，之后将纯化菌株划线4℃冰箱保存。
1．4 降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选
降解亚硝酸盐乳酸菌的初筛：将前述初步认定为乳酸菌的菌株，于MRS液体培养基中活化三代。后取种龄为18h的种子，按1‰接种量接种于200mL含125ug/m NaN02，pH 6.0的MRS液体培养基中，30℃厌氧培养。隔12h取样，检测NaN02含量，同时做不接种空白对照。
降解亚硝酸盐乳酸菌的复筛：将初筛得到的菌株经活化后，取种龄18h的种子，按1‰接种量接种于200mL含125ug/ml NaN02，pH 6.0的MRS液体培养基中，30℃厌氧培养。隔12h取样，检测NaN02含量，同时做不接种空白对照。
测定空白对照组的OD550的值为C1，接种乳酸菌后的OD550的值为C2。降解率的计算公式为：降解率=(C1-C2)/C1。
1．5 乳酸菌降解亚硝酸盐特性的研究
1．5．1生长曲线的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰接种量接入MRS液中，放置30℃条件下培养，定时取一定量的菌液，稀释到适宜倍数，检测OD600吸光值，并记录结果。
1．5．2温度对亚硝酸盐降解影响的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰接种量接入MRS液中，分别置于20℃，25℃，30℃，35℃，40℃，培养箱中培养。于12h和16h定时取样，检测NaN02含量。同时做不接种空白对照。
1．5．3盐的浓度对亚硝酸盐降解影响的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰接种量接入分别含1％，2％，3％，4％，5％，6％，7%的NaCl的MRS液中，30℃培养，于12h和16h定时取样，检测NaN02含量。同时做不接种空白对照。
1．5．4pH对亚硝酸盐降解影响的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰的接种量接入PH分别4，4.5，5，5.5,6.0,6.5的MRS溶液中，30℃培养，于12h和16h定时取样，检测NaN02含量。同时做不接种空白对照。
摘要：本文从两种泡菜中分离至28株乳酸菌，并在此基础上对各菌株在MRS液体培养基中降解亚硝酸盐的能力进行了比较分析。通过初筛优选出15株亚硝酸盐降解能力较高的菌株，再通过在MRS磷酸盐缓冲培养基中的复筛，排除酸性末端对亚硝酸盐降解的干扰，优选出两株降解亚硝酸盐能力较高的菌株1-1，9SH。为了进一步了解不同条件对两个菌株降解亚硝酸盐的影响，对影响其降解亚硝酸盐的条件(温度，起始pH，盐的浓度)进行了初步的研究，得出如下结果：①菌株1-1降解亚硝酸盐的最适温度范围为25℃～35℃，30℃时最高；最适pH范围为5.5-6.5，5．5时最高；最适盐度范围为1%-5%，1%时最高。②菌株9SH降解亚硝酸盐的最适温度范围为25℃～35℃，30℃时最高；最适pH范围为5.5-6.5，5.5时最高；最适盐度范围为1%-5%，最适盐度为2%。
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关键字:乳酸菌；亚硝酸盐；降解；发酵；泡菜
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料、试剂及培养基2
1.2 仪器 2
1.3 乳酸菌的分离纯化2
1.4 降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选2
1.5 乳酸菌降解亚硝酸盐特性的研究3
1.5.1生长曲线的测定 3
1.5.2温度对亚硝酸盐降解影响的测定3
1.5.3盐的浓度对亚硝酸盐降解影响的测定3
1.5.4 pH对亚硝酸盐降解影响的测定3
2 结果与分析3
2.1 菌株分离纯化及初步鉴定结果 3
2.1.1四川泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的初筛3
2.1.2四川泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的复筛3
2.1.3自制泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的初筛4
2.1.4自制泡菜降解亚硝酸盐乳酸菌的复筛4
2.2 不同培养条件对亚硝酸盐降解的影响 4
2.2.1生长曲线测定5
2.2.2温度对亚硝酸盐降解的影响5
2.2.3盐的浓度对亚硝酸盐降解的影响6
2.2.4 pH对亚硝酸盐降解的影响7
3 总结与讨论8
3.1降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选 8
3.2影响乳酸菌降解亚硝酸盐的几个因素8
3.3 乳酸菌降解亚硝酸盐法的优势 8
致谢9
参考文献 9
亚硝酸盐降解菌的筛选及其降解特性的研究
食品质量与安全101 吴 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
金生
引言
引言
亚硝酸盐氮作为氮循环的中间产物可与仲胺类生成强致癌性的亚硝胺类物质，长期摄入可诱发消化道系统癌变，亚硝酸盐还可使血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去携氧能力，产生正铁血红肮症，严重者可致死。我国大部分地区的亚硝酸盐污染已相当严重[1]。因此，如何消除亚硝酸盐的危害己引起科学界的极大关注。
亚硝酸盐的致癌作用及其对人类环境的危害，日益引起人们的注意。所以，寻求有效的降解亚硝酸盐的途径，具有一定的意义。
许多研究表明乳酸菌具有降解亚硝酸盐的性能。张庆芳[2]等对乳酸菌降解亚硝酸盐的机理进行了研究。认为其机理为：乳酸菌对亚硝酸盐的降解分为酶降解和酸降解两个阶段。在发酵前期，培养液pH>4．5时，乳酸菌对亚硝酸盐降解以酶降解为主；发酵后期，亚硝酸盐的降解主要以酸降解为主。但在其研究中很难排除酸性末端对亚硝酸盐降解的干扰。
本文采用磷酸盐缓冲培养基对分离自两种泡菜中的乳酸菌的亚硝酸盐降解能力进行比较，由于缓冲盐类的作用，使乳酸菌在降解亚硝酸盐的过程中，基本不受酸性末端对亚硝酸盐降解的影响，从而可以较为容易的筛选出具有较高降解亚硝酸盐能力的优良菌株。
1 材料、试剂、培养基、仪器及方法
1．1 材料、试剂与培养基
1．1．1 材料
本试验使用材料泡菜为四川泡菜及自制泡菜（购于南京苏果超市）。
1．1．2 试剂
蛋白胨；牛肉膏；酵母粉；葡萄糖；吐温—80；琼脂；柠檬酸二铵；乙酸钠；硫酸镁；硫酸锰；磷酸氢二钾；乙酸；盐酸萘乙二胺；对氨基苯磺酸；浓盐酸；乙酸锌；琼脂。
1．1．3培养基
MRS液；固体培养基：胰蛋白陈10g，牛肉膏l0g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，KH2P04 2g，乙酸钠5g，吐温-80 1mL，硫酸镁0.5 g，硫酸锰0.29g，水1000mL，pH6.5，(固体培养基中补加2％琼脂)，121℃25min灭菌。
1．2 仪器
生化培养箱 SHP．150 上海精宏设备有限公司
可见分光光度计 721 上海菁华科技仪器有限公司
离心机 TGL．16G 上海安亭科学仪器厂
水浴锅 HH．S11．2 上海跃进医疗器械厂
微波炉 WP800T 佛山格兰仕微波炉电器有限公司
1．3 乳酸菌的分离纯化
分别称取四川泡菜和自制泡菜1g，分别于无菌条件下加入到9mL无菌水中，混匀。取前述混匀液按十倍稀释法进行稀释，形成10-1-10-9系列梯度，放置4℃冰箱备用。
采用常规平板稀释法[3]，选择前述梯度稀释液中适宜的稀释浓度，取0．1mL于培养皿中，后加入55℃左右的固体培养基，摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基，以隔绝氧气，于30℃培养箱中培养72h。挑取各培养基中溶钙圈较大，变黄区 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
域较广的单菌落，进一步划线分离，同时每一步纯化都要镜检观察，直到镜下菌体一致为止，之后将纯化菌株划线4℃冰箱保存。
1．4 降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选
降解亚硝酸盐乳酸菌的初筛：将前述初步认定为乳酸菌的菌株，于MRS液体培养基中活化三代。后取种龄为18h的种子，按1‰接种量接种于200mL含125ug/m NaN02，pH 6.0的MRS液体培养基中，30℃厌氧培养。隔12h取样，检测NaN02含量，同时做不接种空白对照。
降解亚硝酸盐乳酸菌的复筛：将初筛得到的菌株经活化后，取种龄18h的种子，按1‰接种量接种于200mL含125ug/ml NaN02，pH 6.0的MRS液体培养基中，30℃厌氧培养。隔12h取样，检测NaN02含量，同时做不接种空白对照。
测定空白对照组的OD550的值为C1，接种乳酸菌后的OD550的值为C2。降解率的计算公式为：降解率=(C1-C2)/C1。
1．5 乳酸菌降解亚硝酸盐特性的研究
1．5．1生长曲线的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰接种量接入MRS液中，放置30℃条件下培养，定时取一定量的菌液，稀释到适宜倍数，检测OD600吸光值，并记录结果。
1．5．2温度对亚硝酸盐降解影响的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰接种量接入MRS液中，分别置于20℃，25℃，30℃，35℃，40℃，培养箱中培养。于12h和16h定时取样，检测NaN02含量。同时做不接种空白对照。
1．5．3盐的浓度对亚硝酸盐降解影响的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰接种量接入分别含1％，2％，3％，4％，5％，6％，7%的NaCl的MRS液中，30℃培养，于12h和16h定时取样，检测NaN02含量。同时做不接种空白对照。
1．5．4pH对亚硝酸盐降解影响的测定
将菌株9SH，1-1活化三代，取18h种龄的种子，按1‰的接种量接入PH分别4，4.5，5，5.5,6.0,6.5的MRS溶液中，30℃培养，于12h和16h定时取样，检测NaN02含量。同时做不接种空白对照。
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