人参花多糖体外抗肿瘤活性的研究
人参花多糖体外抗肿瘤活性的研究[20200509190256]
摘要：人参是我国名贵的中药材，多糖是人参中主要有效活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、防衰老等多种功效。本文选取对数期生长的胃癌腺细胞、人乳腺癌细胞、宫颈癌细胞中性粒细胞、胃癌上皮细胞为实验材料，用具有浓度梯度的人参花多糖溶液去培养上述肿瘤细胞，再利用MTT法测出细胞数并得出抑瘤率。分析数据结果得出抑瘤率与人参花多糖浓度关系以及人参花多糖浓度对不同中肿瘤细胞作用结果的相关性和差异性。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
关键字:人参花多糖；抗肿瘤活性；抑癌率
目录
摘要 1
关键字 1
Abstract 1
Key Words 1
引言 1
1材料与方法 2
1.1实验材料 2
1.1.1 人参花多糖 2
1.1.2 实验细胞 2
1.1.3 试剂： 2
1.1.4 仪器： 3
1.1.5 试剂的配制 3
1.2 实验方法 3
1.2.1 细胞的复苏及传代 3
1.2.3 细胞计数 4
1.2.4 MTT法研究人参花多糖对肿瘤细胞增殖的影响 4
2实验结果与分析 5
2.1不同浓度人参花多糖对HGC细胞增殖的影响 5
2.2不同浓度人参花多糖对MCF细胞增殖的影响 5
2.3不同浓度人参花多糖对HELA细胞增殖的影响 6
2.4不同浓度人参花多糖对AMM细胞增殖的影响 7
2.5不同浓度人参花多糖对BGC细胞增殖的影响 7
3 讨论 8
3.1 人参花多糖对各肿瘤细胞总体抑制率比较 8
3.2 不同浓度的人参花多糖对各种肿瘤细胞增殖的相似性与差异性 8
3.3 多糖提取方法的不同对各肿瘤细胞增殖的影响 8
致谢 9
参考文献 9
人参花多糖体外抗肿瘤活性的研究
引言
引言
人参是五加科Araliaceae植物，其药用历史悠久，中医理论认为人参有“主补五脏、安精神、定魂魄、除邪气、明目益智、久服轻身延年”的功效[1]。近年来，随着中药的研究进入细胞 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
、亚细胞和分子水平，人参的各个成分也被分离纯化出来进行独立的药理学研究。研究表明，人参中主要含有人参皂甙、人参多糖、挥发油、脂肪酸、多种维生素、氨基酸及微量元素等有效活性成分[2]-[3]。人参多糖是人参的主要活性物质之一，而且实验和临床治疗实践证明，人参制剂毒性低，对生物有机体基本没有明显毒性，随着对人参多糖研究的进一步深入，可以预测其将是一种很有应用前景的天然药物。
人参多糖作用具体有以下几种：
①免疫调节作用：人参多糖能够增强机体的特异性免疫和非特异性免疫功能。在给小鼠注射人参多糖后，小鼠的脾脏和胸腺重量有明显增加，而且免疫细胞数量和活性有不同程度的增加[4]。多方实验结果表明，人参多糖可以提高正常小鼠淋巴细胞的增殖能力、增强巨噬细胞的吞噬能力、细胞活性及生成各种细胞因子的能力、提高NK细胞毒作用[5]。
②降血糖作用：人参多糖的降血糖机制主要是提高了体内胰岛素含量，并且它能增强线粒体氧化磷酸化的作用以及提高琥珀酸脱氢酶和细胞色素氧化酶的活性,从而加速了糖的有氧氧化代谢进程[6]。
③抗肿瘤作用：日本研究人员分离人参多糖后得到了具有抗补体活性的多糖GR系列，经过进一步研究发现，GR系列多糖均能抑制小鼠体内固体移植瘤S180的增殖[7]。而且，王本祥等人在研究人参多糖时发现，人参多糖对正常小鼠和荷瘤小鼠机体免疫功能有增强和激活的作用，还有抑制癌细胞生长，有直接或间接地抗肿瘤活性[8]。
④抗辐射作用：电离辐射可以刺激机体产生自由基，脂质过氧化而造成对细胞、酶类及核酸等生物大分子的损害作用。并且能损伤机体的淋巴和造血功能从而引起败血症等后果。人参多糖能够增加受辐射小鼠体内过氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶的蛋白表达和酶活力，使血红素加氧酶和非蛋白巯基化合物恢复正常，减少辐射引起的活性氧自由基对机体的损伤[9]-[10]。而且研究发现，人参多糖可通过对造血系统的保护、抗自由基作用而减轻辐射损伤[11]。
⑤自Harman提出衰老的自由基学说问世以来，许多学者开始投入到这个研究中，自由基学说也因此被引入到人参多糖的研究中。2010年，王寅秀等人用煎煮法提取了人参根和茎叶中的粗多糖，并分离出来酸性多糖和中性多糖，并且用DPPH法测定人参多糖的抗氧化活性，测定结果表明，人参多糖对有机自由基DPPH有一定的清除能力，而且总粗多糖、中性多糖与酸性多糖对DPPH自由基的清除能力与多糖的含量有关，含量越高，清除能力越强。
1 材料与方法
1.1实验材料
1.1.1 人参花多糖
人参花多糖种类有七种，分别是通过碱提、水提两种以及通过柱层析方法提取的五种多糖。
1.1.2 实验细胞
HGC：胃癌腺细胞 大学细胞房冻存株
MCF：人乳腺癌细胞 大学细胞房冻存株
HELA：宫颈癌细胞 大学细胞房冻存株
AMM：中性粒细胞 大学细胞房冻存株
BGC：胃癌上皮细胞 大学细胞房冻存株
1.1.3 试剂：
新生牛血清 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
浙江天杭生物科技有限公司
胎牛血清（FBS） 浙江天杭生物科技有限公司
DMEM Life technologries公司
MTT Solarbio公司
胰蛋白酶 GIBCO公司
DMSO Amresco公司
台盼蓝 Biosource公司
1.1.4 仪器：
二氧化碳培养箱 Thermo forma公司
台式离心机 Thermo forma公司
光学显微镜 OLYMPAS公司
酶标仪 BIO-TEK公司
立式压力蒸汽灭菌器 上海申安医疗器械
分析天平 Shimadzu Corporation公司
冰箱 青岛海尔股份有限公司
洁净工作台 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司
液氮罐 Thermo scientific公司
96孔板 COST-AR公司
1.1.5 试剂的配制
碱提 水提 0 0.1 0.2 0.3 0.5
摘要：人参是我国名贵的中药材，多糖是人参中主要有效活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、防衰老等多种功效。本文选取对数期生长的胃癌腺细胞、人乳腺癌细胞、宫颈癌细胞中性粒细胞、胃癌上皮细胞为实验材料，用具有浓度梯度的人参花多糖溶液去培养上述肿瘤细胞，再利用MTT法测出细胞数并得出抑瘤率。分析数据结果得出抑瘤率与人参花多糖浓度关系以及人参花多糖浓度对不同中肿瘤细胞作用结果的相关性和差异性。
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关键字:人参花多糖；抗肿瘤活性；抑癌率
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摘要 1
关键字 1
Abstract 1
Key Words 1
引言 1
1材料与方法 2
1.1实验材料 2
1.1.1 人参花多糖 2
1.1.2 实验细胞 2
1.1.3 试剂： 2
1.1.4 仪器： 3
1.1.5 试剂的配制 3
1.2 实验方法 3
1.2.1 细胞的复苏及传代 3
1.2.3 细胞计数 4
1.2.4 MTT法研究人参花多糖对肿瘤细胞增殖的影响 4
2实验结果与分析 5
2.1不同浓度人参花多糖对HGC细胞增殖的影响 5
2.2不同浓度人参花多糖对MCF细胞增殖的影响 5
2.3不同浓度人参花多糖对HELA细胞增殖的影响 6
2.4不同浓度人参花多糖对AMM细胞增殖的影响 7
2.5不同浓度人参花多糖对BGC细胞增殖的影响 7
3 讨论 8
3.1 人参花多糖对各肿瘤细胞总体抑制率比较 8
3.2 不同浓度的人参花多糖对各种肿瘤细胞增殖的相似性与差异性 8
3.3 多糖提取方法的不同对各肿瘤细胞增殖的影响 8
致谢 9
参考文献 9
人参花多糖体外抗肿瘤活性的研究
引言
引言
人参是五加科Araliaceae植物，其药用历史悠久，中医理论认为人参有“主补五脏、安精神、定魂魄、除邪气、明目益智、久服轻身延年”的功效[1]。近年来，随着中药的研究进入细胞 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
、亚细胞和分子水平，人参的各个成分也被分离纯化出来进行独立的药理学研究。研究表明，人参中主要含有人参皂甙、人参多糖、挥发油、脂肪酸、多种维生素、氨基酸及微量元素等有效活性成分[2]-[3]。人参多糖是人参的主要活性物质之一，而且实验和临床治疗实践证明，人参制剂毒性低，对生物有机体基本没有明显毒性，随着对人参多糖研究的进一步深入，可以预测其将是一种很有应用前景的天然药物。
人参多糖作用具体有以下几种：
①免疫调节作用：人参多糖能够增强机体的特异性免疫和非特异性免疫功能。在给小鼠注射人参多糖后，小鼠的脾脏和胸腺重量有明显增加，而且免疫细胞数量和活性有不同程度的增加[4]。多方实验结果表明，人参多糖可以提高正常小鼠淋巴细胞的增殖能力、增强巨噬细胞的吞噬能力、细胞活性及生成各种细胞因子的能力、提高NK细胞毒作用[5]。
②降血糖作用：人参多糖的降血糖机制主要是提高了体内胰岛素含量，并且它能增强线粒体氧化磷酸化的作用以及提高琥珀酸脱氢酶和细胞色素氧化酶的活性,从而加速了糖的有氧氧化代谢进程[6]。
③抗肿瘤作用：日本研究人员分离人参多糖后得到了具有抗补体活性的多糖GR系列，经过进一步研究发现，GR系列多糖均能抑制小鼠体内固体移植瘤S180的增殖[7]。而且，王本祥等人在研究人参多糖时发现，人参多糖对正常小鼠和荷瘤小鼠机体免疫功能有增强和激活的作用，还有抑制癌细胞生长，有直接或间接地抗肿瘤活性[8]。
④抗辐射作用：电离辐射可以刺激机体产生自由基，脂质过氧化而造成对细胞、酶类及核酸等生物大分子的损害作用。并且能损伤机体的淋巴和造血功能从而引起败血症等后果。人参多糖能够增加受辐射小鼠体内过氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶的蛋白表达和酶活力，使血红素加氧酶和非蛋白巯基化合物恢复正常，减少辐射引起的活性氧自由基对机体的损伤[9]-[10]。而且研究发现，人参多糖可通过对造血系统的保护、抗自由基作用而减轻辐射损伤[11]。
⑤自Harman提出衰老的自由基学说问世以来，许多学者开始投入到这个研究中，自由基学说也因此被引入到人参多糖的研究中。2010年，王寅秀等人用煎煮法提取了人参根和茎叶中的粗多糖，并分离出来酸性多糖和中性多糖，并且用DPPH法测定人参多糖的抗氧化活性，测定结果表明，人参多糖对有机自由基DPPH有一定的清除能力，而且总粗多糖、中性多糖与酸性多糖对DPPH自由基的清除能力与多糖的含量有关，含量越高，清除能力越强。
1 材料与方法
1.1实验材料
1.1.1 人参花多糖
人参花多糖种类有七种，分别是通过碱提、水提两种以及通过柱层析方法提取的五种多糖。
1.1.2 实验细胞
HGC：胃癌腺细胞 大学细胞房冻存株
MCF：人乳腺癌细胞 大学细胞房冻存株
HELA：宫颈癌细胞 大学细胞房冻存株
AMM：中性粒细胞 大学细胞房冻存株
BGC：胃癌上皮细胞 大学细胞房冻存株
1.1.3 试剂：
新生牛血清 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
浙江天杭生物科技有限公司
胎牛血清（FBS） 浙江天杭生物科技有限公司
DMEM Life technologries公司
MTT Solarbio公司
胰蛋白酶 GIBCO公司
DMSO Amresco公司
台盼蓝 Biosource公司
1.1.4 仪器：
二氧化碳培养箱 Thermo forma公司
台式离心机 Thermo forma公司
光学显微镜 OLYMPAS公司
酶标仪 BIO-TEK公司
立式压力蒸汽灭菌器 上海申安医疗器械
分析天平 Shimadzu Corporation公司
冰箱 青岛海尔股份有限公司
洁净工作台 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司
液氮罐 Thermo scientific公司
96孔板 COST-AR公司
1.1.5 试剂的配制
碱提 水提 0 0.1 0.2 0.3 0.5
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