不同品种猪乳的游离寡糖结构研究
寡糖是乳中一类重要的营养物质，对新生儿的生长发育有不可替代的作用。猪乳和人乳对胃肠道发育有着相似的营养作用，目前对人乳寡糖与肠道健康关系的研究已较为广泛，而对猪乳寡糖的研究则有待深入。本课题对长白、大白和梅山三个品种的猪乳寡糖进行研究，利用HPLC对各种寡糖进行分离，收集单峰后进行质谱检测，对其结构进行分析的同时也一定程度上对质谱条件进行了最优选择。结果表明三个不同品种的猪乳中寡糖种类上并无很大差异，含量上有所不同，本实验分离鉴定出30余种乳寡糖，其中中性寡糖居多。本实验对于猪乳寡糖种类及结构的研究对保障仔猪肠道营养健康有着不容小觑的意义。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1 材料与方法2
1.1 样品的采集2
1.2 试剂与仪器2
1.2.1 试剂2
1.2.2 仪器2
1.3 试验方法3
1.3.1 猪乳寡糖的结构分析技术路线3
1.3.2 猪乳寡糖的分离纯化3
1.3.3 寡糖的荧光标记3
1.3.4 高效液相色谱的分离检测4
1.3.5 质谱检测5
1.4 统计分析5
2 结果与分析5
2.1 高效液相色谱检测结果6
2.2 质谱检测结果6
2.2.1 质谱仪器校正结果6
2.2.2质谱条件最优选择结果7
2.2.3样品质谱检测结果 11
3 讨论及结论13
致谢14
参考文献15
不同品种猪乳的游离寡糖结构研究
引言
猪肉是我国人民日常食用最多的一种动物性食品，我国的养猪业历史悠久，伴随着科技水平和人们生活水平的不断提高，近年来养猪生产体系获得了长足的发展，养猪业也成为国民经济重要的支柱产业。仔猪生产是养猪业中最为关键的阶段，影响到猪的整个生长阶段，而猪乳又是仔猪生长发育的基础，被认为是仔猪的完美食物[12]，在生产上仔猪需要早期断乳，但是仔猪在断乳期由于病原微生物的侵袭等因素常出现肠道紊乱的情况，多表 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
现为腹泻，严重的可导致死亡[3]。对于猪乳寡糖的研究，在一定程度上能了解猪乳寡糖保障仔猪肠道的作用机制，对养猪业中饲料的营养调控技术也有着不容小觑的意义[3,4]。
目前对于猪乳的研究常涉及蛋白质及其他免疫活性物质，鲜有对乳中糖类物质进行研究。事实上乳中糖类物质结构复杂，种类繁多，也是猪乳中重要的活性因子。伴随着近年来对寡糖的益生、抵御有害病菌的侵袭、改善机体免疫力等作用的发现[3,5]，对寡糖的研究逐渐成为热点，对乳中寡糖的研究也越来越多。
现今对乳寡糖的研究较多的集中于人乳寡糖和牛乳寡糖，且已被证实有多种对胃肠道有益的功能[68]，而对猪乳寡糖的研究还比较滞后。仔猪早期断奶会引发断奶综合症，主要表现为肠道损伤，膳食营养对胃肠道的生长和功能有重要的作用，因此胃肠道生长发育是仔猪护理养殖过程中必不可少的一部分，已有研究表明猪乳中功能性乳寡糖与猪仔肠道的健康有一定关联[59]。在养猪产业中，一些功能性寡糖如果寡糖、甘露寡糖等添加剂为主导的饲料调控技术已逐渐成熟运用[3,8]。
本实验选取长白、大白和梅山这三个不同品种的母猪，都是我国养猪业中重要的优良品种，在其产仔后一天收集初乳，进行猪乳寡糖的种类、结构的研究，在实验室已建立的寡糖分析技术的基础上，采用高效液相色谱检测的方法对猪乳中不同种类的寡糖进行分离检测，然后利用质谱检测对寡糖结构进行进一步解析，并根据猪乳中可能出现的寡糖种类选择了最合适的质谱检测条件，为后续对猪乳寡糖的研究奠定了基础。
1 材料与方法
样品的采集
本实验所用的猪乳均采集于江苏省康乐农牧集团股份有限公司中体格健康的母猪个体。选择长白、大白和梅山三个不同品种的母猪个体，在其分娩后第一天进行初乳采集。采集前对采样个体肌肉注射缩宫素20个单位，1020分钟后人工采集，采集结束立即用冰袋保存猪乳样品，并置于80 ℃冰箱中备用。
试剂与仪器
试剂
2氨基苯甲酰胺（2AB）购自天津希恩思生化科技有限公司；
色谱纯甲酸、色谱纯乙腈（ACN）、色谱纯氨水均购自德国默克公司；
分析纯三氯乙酸（TCA）、三氟乙酸（TFA）、甲醇和乙醇均购于南京试剂公司；
SupelcleanENVICarb预装柱、6氮杂2硫代胸腺嘧啶（ATT）、2,5二羟基苯甲酸（DHB）均购自sigma公司；
分析纯氰基硼氢化钠购于上海韶远科技有限公司；
Peptide Calib Standard质谱检测校正标品购自Bruker公司；
仪器
高速冷冻离心机HemaTGL.16R，珠海黑马医学仪器有限公司；
LGJ12冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司；
真空离心浓缩干燥机，太仓市华利达实验设备有限公司；
超纯水机，力新仪器(上海)有限公司；
立式超低温保存冰箱，中国海尔集团；
振荡培养箱ZQZYCT，上海知楚仪器；
涡旋振荡仪，北京大龙公司；
分析电子天平，上海良平仪器仪表有限公司；
干式隔膜真空泵，日本东京理化公司；
Shimadzu Nexera超高压液相色谱仪、配LC30AD泵、RF20Axs荧光检测器、SIL,30AC自动进样器、LCsolution工作站等均为日本Shimadzu公司产品；亲水性液相色谱柱HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)购自Waters公司；
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1 材料与方法2
1.1 样品的采集2
1.2 试剂与仪器2
1.2.1 试剂2
1.2.2 仪器2
1.3 试验方法3
1.3.1 猪乳寡糖的结构分析技术路线3
1.3.2 猪乳寡糖的分离纯化3
1.3.3 寡糖的荧光标记3
1.3.4 高效液相色谱的分离检测4
1.3.5 质谱检测5
1.4 统计分析5
2 结果与分析5
2.1 高效液相色谱检测结果6
2.2 质谱检测结果6
2.2.1 质谱仪器校正结果6
2.2.2质谱条件最优选择结果7
2.2.3样品质谱检测结果 11
3 讨论及结论13
致谢14
参考文献15
不同品种猪乳的游离寡糖结构研究
引言
猪肉是我国人民日常食用最多的一种动物性食品，我国的养猪业历史悠久，伴随着科技水平和人们生活水平的不断提高，近年来养猪生产体系获得了长足的发展，养猪业也成为国民经济重要的支柱产业。仔猪生产是养猪业中最为关键的阶段，影响到猪的整个生长阶段，而猪乳又是仔猪生长发育的基础，被认为是仔猪的完美食物[12]，在生产上仔猪需要早期断乳，但是仔猪在断乳期由于病原微生物的侵袭等因素常出现肠道紊乱的情况，多表 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
现为腹泻，严重的可导致死亡[3]。对于猪乳寡糖的研究，在一定程度上能了解猪乳寡糖保障仔猪肠道的作用机制，对养猪业中饲料的营养调控技术也有着不容小觑的意义[3,4]。
目前对于猪乳的研究常涉及蛋白质及其他免疫活性物质，鲜有对乳中糖类物质进行研究。事实上乳中糖类物质结构复杂，种类繁多，也是猪乳中重要的活性因子。伴随着近年来对寡糖的益生、抵御有害病菌的侵袭、改善机体免疫力等作用的发现[3,5]，对寡糖的研究逐渐成为热点，对乳中寡糖的研究也越来越多。
现今对乳寡糖的研究较多的集中于人乳寡糖和牛乳寡糖，且已被证实有多种对胃肠道有益的功能[68]，而对猪乳寡糖的研究还比较滞后。仔猪早期断奶会引发断奶综合症，主要表现为肠道损伤，膳食营养对胃肠道的生长和功能有重要的作用，因此胃肠道生长发育是仔猪护理养殖过程中必不可少的一部分，已有研究表明猪乳中功能性乳寡糖与猪仔肠道的健康有一定关联[59]。在养猪产业中，一些功能性寡糖如果寡糖、甘露寡糖等添加剂为主导的饲料调控技术已逐渐成熟运用[3,8]。
本实验选取长白、大白和梅山这三个不同品种的母猪，都是我国养猪业中重要的优良品种，在其产仔后一天收集初乳，进行猪乳寡糖的种类、结构的研究，在实验室已建立的寡糖分析技术的基础上，采用高效液相色谱检测的方法对猪乳中不同种类的寡糖进行分离检测，然后利用质谱检测对寡糖结构进行进一步解析，并根据猪乳中可能出现的寡糖种类选择了最合适的质谱检测条件，为后续对猪乳寡糖的研究奠定了基础。
1 材料与方法
样品的采集
本实验所用的猪乳均采集于江苏省康乐农牧集团股份有限公司中体格健康的母猪个体。选择长白、大白和梅山三个不同品种的母猪个体，在其分娩后第一天进行初乳采集。采集前对采样个体肌肉注射缩宫素20个单位，1020分钟后人工采集，采集结束立即用冰袋保存猪乳样品，并置于80 ℃冰箱中备用。
试剂与仪器
试剂
2氨基苯甲酰胺（2AB）购自天津希恩思生化科技有限公司；
色谱纯甲酸、色谱纯乙腈（ACN）、色谱纯氨水均购自德国默克公司；
分析纯三氯乙酸（TCA）、三氟乙酸（TFA）、甲醇和乙醇均购于南京试剂公司；
SupelcleanENVICarb预装柱、6氮杂2硫代胸腺嘧啶（ATT）、2,5二羟基苯甲酸（DHB）均购自sigma公司；
分析纯氰基硼氢化钠购于上海韶远科技有限公司；
Peptide Calib Standard质谱检测校正标品购自Bruker公司；
仪器
高速冷冻离心机HemaTGL.16R，珠海黑马医学仪器有限公司；
LGJ12冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司；
真空离心浓缩干燥机，太仓市华利达实验设备有限公司；
超纯水机，力新仪器(上海)有限公司；
立式超低温保存冰箱，中国海尔集团；
振荡培养箱ZQZYCT，上海知楚仪器；
涡旋振荡仪，北京大龙公司；
分析电子天平，上海良平仪器仪表有限公司；
干式隔膜真空泵，日本东京理化公司；
Shimadzu Nexera超高压液相色谱仪、配LC30AD泵、RF20Axs荧光检测器、SIL,30AC自动进样器、LCsolution工作站等均为日本Shimadzu公司产品；亲水性液相色谱柱HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)购自Waters公司；
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