泡菜中产香微生物的分离鉴定
泡菜中产香微生物的分离鉴定[20200408175336]
摘 要
本研究采用孟加拉红培养基和PDA培养基，从四川泡菜汁中分离筛选到一株能够产生浓郁芳香的微生物。通过形态学、生理生化试验以及真核微生物ITS序列对该菌株进行鉴定。实验结果表明，该产香菌株为类酵母状地霉属真菌，其ITS序列与菌株Galactomyces geotrichum strain的同源性高达98.057%。
*查看完整论文请 +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
关键字:泡菜汁产香微生物筛选鉴定地霉属
目 录
1.前言 1
1.1泡菜简介 1
1.2国内外对泡菜中菌的研究 1
1.2.1植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum） 1
1.2.2干酪乳杆菌（Lactobacillus casein） 2
1.2.3短乳杆菌（Lactobacillus brevis） 2
1.2.4嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus） 2
1.2.5肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides） 2
1.3国内外对产香白地霉的研究 2
1.4课题研究背景 3
2.材料与方法 3
2.1材料 3
2.1.1试剂 3
2.1.2培养基 3
2.2实验方法 4
2.2.1菌种的富集、分离纯化 4
2.2.2 产香菌株在不同培养基上生长状况 5
2.2.3 形态观察 5
2.2.4生理生化实验 5
2.2.5 利用ITS序列鉴定菌株 6
3.结果与分析 7
3.1产香菌在不同培养基上的生长状况 7
3.2 产香菌形态观察结果 8
3.2.1菌落形态观察结果 8
3.2.2 菌体形态观察结果 8
3.3 生理生化试验 9
3.3.1糖发酵试验 9
3.3.2碳源同化试验 10
3.3.3氮源同化试验 10
3.3.4 产香菌的耐盐试验 11
3.3.5明胶液化试验 11
3.3.6其他各项生理生化试验 12
3.4 ITS测定结果 12
3.4.1 PCR产物的电泳检测结果 12
3.4.2产香菌株的ITS序列 12
3.4.3 菌株进化树分析 13
4.结论 14
参考文献 15
致谢 16
1.前言
1.1泡菜简介
泡菜是一种风味独特、开胃爽口、为广大消费者喜爱的特色食品。其制作过程简单方便，利用新鲜蔬菜将其洗净，沥干水分，浸泡于盐水中，密封发酵。在制作过程中新鲜蔬菜上的微生物利用无氧环境进行发酵，产生次级代谢物从而形成泡菜特有的风味物质【1】。中国是传统的泡菜生产国，泡菜种类多不胜数，它不仅味美爽口，而且含有维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、钙、铁、胡萝卜素、辣椒素、纤维素和蛋白质等多种丰富的营养成分。
1.2国内外对泡菜中菌的研究
泡菜生产过程主要依靠乳酸菌的发酵作用，一般自然发酵的泡菜主要是以异型乳酸菌发酵为主，发酵过程中产生乙醇、苯基乳酸等风味物质，是泡菜特有风味的主要形成产物；发酵过程中同时产生有机酸、过氧化氢和细菌素等物质，能够抑制其它杂菌的生长，保证泡菜的食用安全性；之后同型乳酸菌逐渐成为优势菌，并进一步降低环境的pH值，从而抑制有害杂菌的生长【2】。泡菜基本上成为了大众生活中不可或缺的调味品，而对于泡菜中菌种的研究，国内外已经做了大量的工作，从泡菜中分离筛选出了许多生产性能优良的菌种，如肠膜明串珠菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌等。同时对于泡菜中的致病菌，国内外科研者也做了很多的研究，由于在泡菜生产过程中，并没有采取特定的灭菌处理方式，而是采用自然发酵法，因此泡菜容易受到腐败菌和病原菌的污染，使泡菜产生腐败现象，从而对人体造成危害【3】。目前在泡菜生产或贮藏过程中发现的腐败致病菌有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌等【4】。
1.2.1植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）
植物乳杆菌是乳酸菌的一种，最佳生长温度为30-35℃，最佳pH为6.5左右，是一种厌氧或兼性厌氧菌【5】。植物乳杆菌本身是一种有益菌，常用作食品发酵的发酵剂，能通过胃道并定植于肠道，维持肠道内菌群平衡、促进营养物质吸收，对人体发挥有益作用。
另一方面，植物乳杆菌的代谢产物在工业上也有很大的用途。植物乳杆菌能大量的产酸，所产的酸性物质能降解重金属，因此在治理重金属污染方面有重要作用；另外植物乳杆菌在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素，而且乳酸杆菌素常作为一种生物防腐剂应用在工业上；再有植物乳杆菌能分泌黏液多糖，被称之为胞外多糖，是一种很好的增稠剂、乳化剂和稳定剂【6】。
1.2.2干酪乳杆菌（Lactobacillus casein）
与植物乳杆菌同属于乳杆菌属，也是一种健康的益生菌。干酪乳杆菌可以抑制和杀死食品中的腐败菌和致病菌，且不影响食物品质，甚至能够改善食品特性，对食品的防腐保鲜也起到积极作用，因此常作为发酵剂应用于牛奶、酸乳、豆奶、奶油和干酪等功能性食品中。
1.2.3短乳杆菌（Lactobacillus brevis）
短乳杆菌也是乳酸菌科中乳杆菌属的一种重要菌种, 具有高产酸、抑菌、解毒和提高机体免疫力等多种特性【7】 ，所以活性短乳杆菌常被作为主要功效成分应用于食品和药品中【8】。
1.2.4嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）
同属于乳杆菌属，与双歧乳杆和干酪乳杆菌并称为“健康三益菌”，具有调节肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物生长繁殖的作用。此外嗜酸乳杆菌能分泌抗生素类物质，如嗜酸乳菌素(acidolin)、嗜酸杆菌素(acidophilin)、乳酸菌素(Laetocidon)等， 这些抗生素类物质与肠道致病菌发生拮抗作用，从而抑制其他杂菌的生长。另外嗜酸乳杆菌也是一种良好的酸奶发酵剂，具有很好的营养保健功能，同时根据卫生部公告2011年第25号，嗜酸乳杆菌也是准许应用于婴幼儿食品的菌种。
1.2.5肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）
属于乳酸菌科明串珠菌属，常被用于发酵乳制品、青贮、泡菜和果酒。研究证实，肠膜明串珠菌具有高产酸、抗氧化和拮抗致病菌等能力[9]，更为重要的是它能促进肠道益生菌的生长。此外对肠膜明串珠菌的发酵产物研究也很深入，尤其是肠膜明串珠菌发酵蔗糖产生的葡聚糖粘质物应用更加广泛。在临床上葡聚糖粘质物是一种优良的血浆代用品,具有抗血栓、改善微循环的作用；在啤酒发酵中产生葡聚糖，生成柔和而醇厚的风味,能掩盖啤酒的苦涩味；此外葡聚糖还被作为天然的稳定剂和乳化剂应用在食品和饲料中；同时葡聚糖也是优良的抗龋剂 [10]。随着对肠膜明串珠菌的深入研究，肠膜明串珠菌还有望成为新型微生态制剂。
1.3国内外对产香白地霉的研究
产香白地霉也是一种常见的真菌，常在泡菜、土壤、烂菜、酒醅中分离得到。
在我国二十世纪七十年代研究者对白地霉安全性的研究不一，所以生长在泡菜中的白地霉被大部分的人认为是致病菌，对白地霉的研究也很局限。但是随着近几年来科学技术的发展，越来越多的技术应用于菌种的研究，从而对白地霉的认识也越来越多。有研究证明，产香白地霉菌株发酵产品具有较好的饮用安全性，可作为饮料供消费者引用【11】。是一种无毒无害的真菌。此外白地霉菌体内含有丰富的蛋白质，菌体可用来生产蛋白饲料【12】 ；菌体内还含有大量的核酸，也可用来提取核酸，并且制造核酸降解液。核酸降解液具有调节植物体内营养物质积累和分配的作用，它能促进生根和种子萌发，刺激果实生长,从而提高结实率和增加产量【13】。产香白地霉可用来进行香精和香料的生物合成，是通过微生物发酵技术，生成天然香料【14】。
摘 要
本研究采用孟加拉红培养基和PDA培养基，从四川泡菜汁中分离筛选到一株能够产生浓郁芳香的微生物。通过形态学、生理生化试验以及真核微生物ITS序列对该菌株进行鉴定。实验结果表明，该产香菌株为类酵母状地霉属真菌，其ITS序列与菌株Galactomyces geotrichum strain的同源性高达98.057%。
*查看完整论文请 +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
关键字:泡菜汁产香微生物筛选鉴定地霉属
目 录
1.前言 1
1.1泡菜简介 1
1.2国内外对泡菜中菌的研究 1
1.2.1植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum） 1
1.2.2干酪乳杆菌（Lactobacillus casein） 2
1.2.3短乳杆菌（Lactobacillus brevis） 2
1.2.4嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus） 2
1.2.5肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides） 2
1.3国内外对产香白地霉的研究 2
1.4课题研究背景 3
2.材料与方法 3
2.1材料 3
2.1.1试剂 3
2.1.2培养基 3
2.2实验方法 4
2.2.1菌种的富集、分离纯化 4
2.2.2 产香菌株在不同培养基上生长状况 5
2.2.3 形态观察 5
2.2.4生理生化实验 5
2.2.5 利用ITS序列鉴定菌株 6
3.结果与分析 7
3.1产香菌在不同培养基上的生长状况 7
3.2 产香菌形态观察结果 8
3.2.1菌落形态观察结果 8
3.2.2 菌体形态观察结果 8
3.3 生理生化试验 9
3.3.1糖发酵试验 9
3.3.2碳源同化试验 10
3.3.3氮源同化试验 10
3.3.4 产香菌的耐盐试验 11
3.3.5明胶液化试验 11
3.3.6其他各项生理生化试验 12
3.4 ITS测定结果 12
3.4.1 PCR产物的电泳检测结果 12
3.4.2产香菌株的ITS序列 12
3.4.3 菌株进化树分析 13
4.结论 14
参考文献 15
致谢 16
1.前言
1.1泡菜简介
泡菜是一种风味独特、开胃爽口、为广大消费者喜爱的特色食品。其制作过程简单方便，利用新鲜蔬菜将其洗净，沥干水分，浸泡于盐水中，密封发酵。在制作过程中新鲜蔬菜上的微生物利用无氧环境进行发酵，产生次级代谢物从而形成泡菜特有的风味物质【1】。中国是传统的泡菜生产国，泡菜种类多不胜数，它不仅味美爽口，而且含有维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、钙、铁、胡萝卜素、辣椒素、纤维素和蛋白质等多种丰富的营养成分。
1.2国内外对泡菜中菌的研究
泡菜生产过程主要依靠乳酸菌的发酵作用，一般自然发酵的泡菜主要是以异型乳酸菌发酵为主，发酵过程中产生乙醇、苯基乳酸等风味物质，是泡菜特有风味的主要形成产物；发酵过程中同时产生有机酸、过氧化氢和细菌素等物质，能够抑制其它杂菌的生长，保证泡菜的食用安全性；之后同型乳酸菌逐渐成为优势菌，并进一步降低环境的pH值，从而抑制有害杂菌的生长【2】。泡菜基本上成为了大众生活中不可或缺的调味品，而对于泡菜中菌种的研究，国内外已经做了大量的工作，从泡菜中分离筛选出了许多生产性能优良的菌种，如肠膜明串珠菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌等。同时对于泡菜中的致病菌，国内外科研者也做了很多的研究，由于在泡菜生产过程中，并没有采取特定的灭菌处理方式，而是采用自然发酵法，因此泡菜容易受到腐败菌和病原菌的污染，使泡菜产生腐败现象，从而对人体造成危害【3】。目前在泡菜生产或贮藏过程中发现的腐败致病菌有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌等【4】。
1.2.1植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）
植物乳杆菌是乳酸菌的一种，最佳生长温度为30-35℃，最佳pH为6.5左右，是一种厌氧或兼性厌氧菌【5】。植物乳杆菌本身是一种有益菌，常用作食品发酵的发酵剂，能通过胃道并定植于肠道，维持肠道内菌群平衡、促进营养物质吸收，对人体发挥有益作用。
另一方面，植物乳杆菌的代谢产物在工业上也有很大的用途。植物乳杆菌能大量的产酸，所产的酸性物质能降解重金属，因此在治理重金属污染方面有重要作用；另外植物乳杆菌在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素，而且乳酸杆菌素常作为一种生物防腐剂应用在工业上；再有植物乳杆菌能分泌黏液多糖，被称之为胞外多糖，是一种很好的增稠剂、乳化剂和稳定剂【6】。
1.2.2干酪乳杆菌（Lactobacillus casein）
与植物乳杆菌同属于乳杆菌属，也是一种健康的益生菌。干酪乳杆菌可以抑制和杀死食品中的腐败菌和致病菌，且不影响食物品质，甚至能够改善食品特性，对食品的防腐保鲜也起到积极作用，因此常作为发酵剂应用于牛奶、酸乳、豆奶、奶油和干酪等功能性食品中。
1.2.3短乳杆菌（Lactobacillus brevis）
短乳杆菌也是乳酸菌科中乳杆菌属的一种重要菌种, 具有高产酸、抑菌、解毒和提高机体免疫力等多种特性【7】 ，所以活性短乳杆菌常被作为主要功效成分应用于食品和药品中【8】。
1.2.4嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）
同属于乳杆菌属，与双歧乳杆和干酪乳杆菌并称为“健康三益菌”，具有调节肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物生长繁殖的作用。此外嗜酸乳杆菌能分泌抗生素类物质，如嗜酸乳菌素(acidolin)、嗜酸杆菌素(acidophilin)、乳酸菌素(Laetocidon)等， 这些抗生素类物质与肠道致病菌发生拮抗作用，从而抑制其他杂菌的生长。另外嗜酸乳杆菌也是一种良好的酸奶发酵剂，具有很好的营养保健功能，同时根据卫生部公告2011年第25号，嗜酸乳杆菌也是准许应用于婴幼儿食品的菌种。
1.2.5肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）
属于乳酸菌科明串珠菌属，常被用于发酵乳制品、青贮、泡菜和果酒。研究证实，肠膜明串珠菌具有高产酸、抗氧化和拮抗致病菌等能力[9]，更为重要的是它能促进肠道益生菌的生长。此外对肠膜明串珠菌的发酵产物研究也很深入，尤其是肠膜明串珠菌发酵蔗糖产生的葡聚糖粘质物应用更加广泛。在临床上葡聚糖粘质物是一种优良的血浆代用品,具有抗血栓、改善微循环的作用；在啤酒发酵中产生葡聚糖，生成柔和而醇厚的风味,能掩盖啤酒的苦涩味；此外葡聚糖还被作为天然的稳定剂和乳化剂应用在食品和饲料中；同时葡聚糖也是优良的抗龋剂 [10]。随着对肠膜明串珠菌的深入研究，肠膜明串珠菌还有望成为新型微生态制剂。
1.3国内外对产香白地霉的研究
产香白地霉也是一种常见的真菌，常在泡菜、土壤、烂菜、酒醅中分离得到。
在我国二十世纪七十年代研究者对白地霉安全性的研究不一，所以生长在泡菜中的白地霉被大部分的人认为是致病菌，对白地霉的研究也很局限。但是随着近几年来科学技术的发展，越来越多的技术应用于菌种的研究，从而对白地霉的认识也越来越多。有研究证明，产香白地霉菌株发酵产品具有较好的饮用安全性，可作为饮料供消费者引用【11】。是一种无毒无害的真菌。此外白地霉菌体内含有丰富的蛋白质，菌体可用来生产蛋白饲料【12】 ；菌体内还含有大量的核酸，也可用来提取核酸，并且制造核酸降解液。核酸降解液具有调节植物体内营养物质积累和分配的作用，它能促进生根和种子萌发，刺激果实生长,从而提高结实率和增加产量【13】。产香白地霉可用来进行香精和香料的生物合成，是通过微生物发酵技术，生成天然香料【14】。
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