蛋白多酚复合体抗氧化性质研究
为促进姜黄素在功能性食品行业和医药中的应用，本文分别用卵白蛋白和猪血浆蛋白对其进行包埋，并研究终pH和离子强度对复合物抗氧化性能的影响。首先测定不同浓度姜黄素与蛋白结合后复合物的包埋率，确定最佳包埋用姜黄素浓度；再利用ABTS自由基清除法,对游离姜黄素、同浓度姜黄素复合物，以及不同终pH和不同离子强度条件下复合物的抗氧化性能分别进行表征。结果表明，最佳姜黄素浓度为0.2mg/mL；游离姜黄素与复合物的抗氧化性无显著差异；复合物抗氧化性能随终pH降低呈下降趋势；使用卵白蛋白进行包埋时，离子强度增加复合物抗氧化性增强，使用猪血浆蛋白包埋时，离子强度对复合物抗氧化性能无影响。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.2 实验设备 2
1.3 方法 2
1.3.1 包埋2
1.3.2 包埋率的测定2
1.3.3 ABTS自由基清除能力测定3
2 结果与分析3
2.1 不同浓度姜黄素分别与卵白蛋白、猪血浆蛋白结合后的包埋率3
2.2 包埋对姜黄素抗氧化活性的影响4
2.3 不同终pH条件下复合物清除ABTS自由基的能力5
2.4 不同离子强度条件下复合物清除ABTS自由基的能力7
3 讨论9
致谢10
参考文献10
蛋白多酚复合体抗氧化性质研究
引言
姜黄素是一种具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等作用[1]的脂溶性植物多酚，但姜黄素在水中溶解度低，严重限制了其在医药和食品工业中的应用。常利用分子自组装技术使姜黄素与大分子蛋白结合形成纳米级复合物的方法(即蛋白质包埋)，来提高其水溶性、稳定性和生物利用率，推动姜黄素在食品药品行业中的应用。基于天然生物大分子的纳米输送系统因具有生物相容性高、安全无毒等特点已引起研究者的广泛关注[2]，目前已出现以酪蛋白胶束[3]、大豆分离蛋白[4]等天然蛋白质包埋姜黄素的报道。本文将研究同样具有包埋姜黄素可能性的卵白蛋白和猪血浆蛋白。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
卵白蛋白（OVA）是鸡蛋清中含量最高的蛋白，属球蛋白，共有385 个氨基酸残基，其中疏水性氨基酸占50%以上。每个分子含有1个二硫键和4个巯基，巯基均位于OVA的疏水核心部分[5]。OVA具有3个色氨酸（Trp），其中Trp 194位于OVA的疏水核心内部，Trp 160暴露于溶剂中，而Trp 275则部分暴露于溶剂中[6]。加热条件下，卵白蛋白会出现部分伸展，位于内部的疏水氨基酸将暴露于溶液中，增大其表面疏水性，同时位于疏水核心的巯基也将暴露于溶液中，有助于卵白蛋白与脂溶性小分子的相互作用[7]。血浆中最主要的固体成分是猪血浆蛋白，由于猪血浆蛋白具有较好的凝胶特性、乳化特性、保水特性等功能特性，常用作食品添加剂。因此可以利用猪血浆蛋白的乳化特性，制备血浆蛋白姜黄素复合物，以提高姜黄素水溶性、稳定性和生物利用率，进而研究影响蛋白姜黄素复合物抗氧化性的因素。
至于包埋对姜黄素抗氧化性是否会产生影响，Kang Pan[8]等人的研究成果给出了提示。他们利用酪蛋白酸钙包埋姜黄素，研究游离姜黄素与姜黄素蛋白复合物的ABTS和ABTS自由基清除率，结果显示游离姜黄素和包埋姜黄素抗氧化性没有显著差异，表明蛋白质包埋没有影响姜黄素的抗氧化活性。
目前缺少对于影响姜黄素蛋白复合物抗氧化性因素的研究。现有文献中，Zhenshun Li[9] 等人研究了通过溶菌酶和羧甲基纤维素的自组装封装姜黄素的简单方法。实验结果显示，与具有较高取代度的羧甲基纤维素结合可以保持姜黄素在巴氏灭菌和中性pH下的生物活性。然而该实验并未涉及本文将研究的离子强度、终pH对姜黄素蛋白复合物抗氧化性的影响。
当前，姜黄多作为药物出现在日常生活中，而与它相关的保健产品的开发还比较少，且大多只限于动物试验，缺乏临床试验的验证。如今国内外对姜黄素的研究多集中在抗氧化、抗炎、抗癌及抑菌等功效上，这对于日后姜黄素保健品的开发有重要意义，因此姜黄素作为保健食品具有较好的开发前景。此外，由于姜黄素具有很强的抗氧化性，不仅能抑制酪氨酸酶的作用，而且可清除体内的羟基自由基和氧自由基，因此可作为健康安全的美白剂。通过制备姜黄素与大分子蛋白的复合物，并研究影响复合物抗氧化性的因素，可促进姜黄素在化妆品行业的开发应用[10]。
1 材料与方法
1．1 实验材料
姜黄素：购于sigma公司；卵白蛋白粉、猪血浆蛋白粉：购于宝迪集团；总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS法）：碧云天生物技术研究所；三氯甲烷（AR）：上海凌峰化学试剂有限公司；无水乙醇（AR）：国药集团化学试剂有限公司；
1．2 实验设备
磁力搅拌器 德国IKA集团
MXF涡旋振荡器 北京DRAGONLAB
实验室pH计 瑞士METTLER TOLEDO
AVANTI J26S 高速冷冻离心机 美国BECKMAN COULTER 公司
M2e多功能酶标仪 美国MD公司
HY5回旋振荡器 国华电器有限公司
1．3 方法
1．3．1 包埋
参考Kang Pan[8]等人的方法。在室温下，分别将5mg/mL的卵白蛋白粉、猪血浆蛋白粉加入PBS中，并在磁力搅拌器上搅拌溶解1h，于冷库中过夜。之后用4mol/L NaOH将蛋白溶液调节至pH=12，孵育30 min。再将不同浓度的姜黄素与蛋白溶液在pH12条件下混合，于磁力搅拌器上在500rpm避光搅拌30 min，之后用4 mol/L HCl将该混合物酸化至pH=7。
1．3．2 包埋率的测定
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.2 实验设备 2
1.3 方法 2
1.3.1 包埋2
1.3.2 包埋率的测定2
1.3.3 ABTS自由基清除能力测定3
2 结果与分析3
2.1 不同浓度姜黄素分别与卵白蛋白、猪血浆蛋白结合后的包埋率3
2.2 包埋对姜黄素抗氧化活性的影响4
2.3 不同终pH条件下复合物清除ABTS自由基的能力5
2.4 不同离子强度条件下复合物清除ABTS自由基的能力7
3 讨论9
致谢10
参考文献10
蛋白多酚复合体抗氧化性质研究
引言
姜黄素是一种具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等作用[1]的脂溶性植物多酚，但姜黄素在水中溶解度低，严重限制了其在医药和食品工业中的应用。常利用分子自组装技术使姜黄素与大分子蛋白结合形成纳米级复合物的方法(即蛋白质包埋)，来提高其水溶性、稳定性和生物利用率，推动姜黄素在食品药品行业中的应用。基于天然生物大分子的纳米输送系统因具有生物相容性高、安全无毒等特点已引起研究者的广泛关注[2]，目前已出现以酪蛋白胶束[3]、大豆分离蛋白[4]等天然蛋白质包埋姜黄素的报道。本文将研究同样具有包埋姜黄素可能性的卵白蛋白和猪血浆蛋白。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
卵白蛋白（OVA）是鸡蛋清中含量最高的蛋白，属球蛋白，共有385 个氨基酸残基，其中疏水性氨基酸占50%以上。每个分子含有1个二硫键和4个巯基，巯基均位于OVA的疏水核心部分[5]。OVA具有3个色氨酸（Trp），其中Trp 194位于OVA的疏水核心内部，Trp 160暴露于溶剂中，而Trp 275则部分暴露于溶剂中[6]。加热条件下，卵白蛋白会出现部分伸展，位于内部的疏水氨基酸将暴露于溶液中，增大其表面疏水性，同时位于疏水核心的巯基也将暴露于溶液中，有助于卵白蛋白与脂溶性小分子的相互作用[7]。血浆中最主要的固体成分是猪血浆蛋白，由于猪血浆蛋白具有较好的凝胶特性、乳化特性、保水特性等功能特性，常用作食品添加剂。因此可以利用猪血浆蛋白的乳化特性，制备血浆蛋白姜黄素复合物，以提高姜黄素水溶性、稳定性和生物利用率，进而研究影响蛋白姜黄素复合物抗氧化性的因素。
至于包埋对姜黄素抗氧化性是否会产生影响，Kang Pan[8]等人的研究成果给出了提示。他们利用酪蛋白酸钙包埋姜黄素，研究游离姜黄素与姜黄素蛋白复合物的ABTS和ABTS自由基清除率，结果显示游离姜黄素和包埋姜黄素抗氧化性没有显著差异，表明蛋白质包埋没有影响姜黄素的抗氧化活性。
目前缺少对于影响姜黄素蛋白复合物抗氧化性因素的研究。现有文献中，Zhenshun Li[9] 等人研究了通过溶菌酶和羧甲基纤维素的自组装封装姜黄素的简单方法。实验结果显示，与具有较高取代度的羧甲基纤维素结合可以保持姜黄素在巴氏灭菌和中性pH下的生物活性。然而该实验并未涉及本文将研究的离子强度、终pH对姜黄素蛋白复合物抗氧化性的影响。
当前，姜黄多作为药物出现在日常生活中，而与它相关的保健产品的开发还比较少，且大多只限于动物试验，缺乏临床试验的验证。如今国内外对姜黄素的研究多集中在抗氧化、抗炎、抗癌及抑菌等功效上，这对于日后姜黄素保健品的开发有重要意义，因此姜黄素作为保健食品具有较好的开发前景。此外，由于姜黄素具有很强的抗氧化性，不仅能抑制酪氨酸酶的作用，而且可清除体内的羟基自由基和氧自由基，因此可作为健康安全的美白剂。通过制备姜黄素与大分子蛋白的复合物，并研究影响复合物抗氧化性的因素，可促进姜黄素在化妆品行业的开发应用[10]。
1 材料与方法
1．1 实验材料
姜黄素：购于sigma公司；卵白蛋白粉、猪血浆蛋白粉：购于宝迪集团；总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS法）：碧云天生物技术研究所；三氯甲烷（AR）：上海凌峰化学试剂有限公司；无水乙醇（AR）：国药集团化学试剂有限公司；
1．2 实验设备
磁力搅拌器 德国IKA集团
MXF涡旋振荡器 北京DRAGONLAB
实验室pH计 瑞士METTLER TOLEDO
AVANTI J26S 高速冷冻离心机 美国BECKMAN COULTER 公司
M2e多功能酶标仪 美国MD公司
HY5回旋振荡器 国华电器有限公司
1．3 方法
1．3．1 包埋
参考Kang Pan[8]等人的方法。在室温下，分别将5mg/mL的卵白蛋白粉、猪血浆蛋白粉加入PBS中，并在磁力搅拌器上搅拌溶解1h，于冷库中过夜。之后用4mol/L NaOH将蛋白溶液调节至pH=12，孵育30 min。再将不同浓度的姜黄素与蛋白溶液在pH12条件下混合，于磁力搅拌器上在500rpm避光搅拌30 min，之后用4 mol/L HCl将该混合物酸化至pH=7。
1．3．2 包埋率的测定
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