结合型石榴多酚提取工艺研究
摘要：对石榴中结合型多酚的提取条件进行了研究，在单因素实验的基础上，通过响应曲面法优化了最佳酸解条件。 响应曲面法采用Box-Behnken试验设计，得到酸解结合酚的最佳提取参数：盐酸浓度6.05 mol/L，酸解温度41.32 ℃，酸解时间2.01 h，液料比20，在此试验条件下，结合酚的含量为30.01±0.055 μmol GAE/g。该研究结果为深入研究石榴中的结合酚提供了参考依据。
目录
引言 3
1 材料 4
1．1原料 4
1．2试剂 4
1．3主要仪器 4
2方法 4
2．1标准曲线的绘制 4
2．1．1溶液的配制 4
2．1．2多酚含量的测定 4
2．2多酚抗氧化性的测定 4
2．2．1 DPPH溶液的配制 4
2．2．2 抗氧化性的测定 4
2.3多酚的提取 5
2．4游离型多酚类化合物提取溶剂的选择 5
2．5结合型多酚类化合物提取溶剂的选择 5
2．6酸、碱水解方法的选择 5
2．7酸解条件的单因素实验 5
2．8酸解条件的响应曲面实验 5
2．9验证实验 6
3 结果与分析 6
3．1标准曲线的建立 6
3．2提取溶剂及水解方法的优化 7
3．3结合酚提取单因素优化实验 7
3．3．1盐酸浓度的优化 7
3．3．2料液比的优化 8
3．3．3酸解温度的优化 9
3．3．4酸解时间的优化 10
3.4多酚抗氧化性的分析 10
3．5响应曲面优化实验 10
3．5．1响应曲面试验方案及结果的分析 10
3．5．2响应曲面结果的方差分析 11
3．5．3各因素对提取效果的影响分析 12
3．5．4双因素对提取效果的影响分析 12
3．6结合酚提取参数优化及验证试验 15
4 结论 15
4.1单因素试验结论 15
4.2
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
响应曲面试验结论 15
5 展望 15
致谢 16
参考文献 16
结合型石榴多酚提取条件的优化研究
食品质量与安全 李梁宵
引言
引言
石榴为石榴科、石榴属落叶灌木或小乔木，既耐干旱又耐瘠薄，且好管理，因此在我国种植范围较广[1]。我国石榴品种多样、类型繁多，主要作为水果食用，深受消费者的喜爱，具有广阔的市场前景。石榴中含有多种生物活性成分如多酚类、黄酮类、脂肪酸、生物碱等，这些活性成分具有抗氧化、抑菌、防癌抑癌等作用。其中多酚类物质是主要的抗氧化活性成分，由一个苯环连接一个或多个羟基而形成[2]。多酚的抗氧化活性主要体现在清除自由基和抑制脂质氧化。多酚检测表明，多酚的抗氧化活性与多酚含量有关，黄琴[3]等通过实验得到石斛多酚提取物的含量与DPPH自由基清除率的相关性较强，相关系数为0.902。
大量研究表明，多酚抗氧化性不仅与多酚在食品中的数量相关，而且与其在食品基质中的存在形态密切相关[4]。多酚存在形态甚至影响其定量分析[5]。多酚以游离态和结合态两种形态存在于石榴皮中，目前的研究大多集中在游离态多酚的提取及其生物活性评价方面，而没有考虑到结合酚的研究，因此大大低估了总酚的含量。与游离酚提取方法不同的是，结合酚的提取多采用先通过水解方法使结合态多酚游离出来，再通过溶剂提取的方法提取结合酚。
本研究以石榴皮为原料，通过溶剂提取法除去游离酚，提取残渣经过酸水解，提取其中的结合酚，采用单因素与相应曲面相结合的方法优化了提取结合酚的工艺参数，以期为石榴皮的综合利用与深加工提供理论依据。
1 材料
1．1原料
由新鲜石榴皮粉碎、过80目筛得到的石榴皮粉
1．2试剂
上海申博化工有限公司：环己烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、正丁醇、无水乙醇；南京化学试剂有限公司：盐酸（分析纯）、无水Na2CO3（分析纯）；没食子酸标准品（相对分子质量为170.12）国药集团化学试剂有限公司；DPPH标准品；FolinCiocalteu试剂 北京索莱宝科技有限公司。
1．3主要仪器
电子天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；磁力搅拌器 金坛市大地自动化仪器厂；上海爱朗仪器有限公司：水流抽气机、旋转蒸发仪；水浴锅 上海红星仪器有限公司；高速离心机 Beckman coulter有限公司；紫外可见分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司
2方法
2．1标准曲线的绘制
2．1．1溶液的配制
（1）没食子酸溶液Ⅰ：取25 mg没食子酸加25 mL去离子水
（2）没食子酸溶液Ⅱ:取5 mg样品Ⅰ加50 mL去离子水
（3）7%Na2CO3溶液：取7 g碳酸钠，用50 mL去离子水溶解，定容至100 ml
2．1．2多酚含量的测定
准确吸取0.4、1.2mL没食子酸溶液Ⅱ，0、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL没食子酸溶液Ⅰ于不同的茄型瓶中，加入去离子水稀释到2 mL.然后吸取以上试样各100 uL，加入400 uL去离子水，100 uL FolinCiocalteu试剂静置6 min，再加入1 mL 7 %的Na2CO3溶液，0.8 mL去离子水，混匀后反应90 min，在760 nm波长处测定样品溶液吸光度，重复3次。得没食子酸浓度(X)与吸光值(Y)之间的直线方程。
2．2多酚抗氧化性的测定
2．2．1 DPPH溶液的配制
准确称取0.0197g DPPH，加无水乙醇定容到250 mL,得到浓度为2×104 mol/L的DPPH溶液，避光保存。
2．2．2 抗氧化性的测定
0.2 mL样品加0.2 mLDPPH溶液，摇匀后避光静置30 min，于517 nm条件下测得吸光度A1，；空白用0.2 mL无水乙醇代替；0.2 mL样品加0.2 mL无水乙醇，摇匀后避光静置30 min，于517 nm条件下测得吸光度AJ；0.2mL无水乙醇加0.2 mLDPPH溶液，摇匀后避光静置30 min，于517 nm条件下测定吸光度AC，每个样品平行3次[6]。多酚的抗氧化能力表现为对DPPH自由基清除能力。
目录
引言 3
1 材料 4
1．1原料 4
1．2试剂 4
1．3主要仪器 4
2方法 4
2．1标准曲线的绘制 4
2．1．1溶液的配制 4
2．1．2多酚含量的测定 4
2．2多酚抗氧化性的测定 4
2．2．1 DPPH溶液的配制 4
2．2．2 抗氧化性的测定 4
2.3多酚的提取 5
2．4游离型多酚类化合物提取溶剂的选择 5
2．5结合型多酚类化合物提取溶剂的选择 5
2．6酸、碱水解方法的选择 5
2．7酸解条件的单因素实验 5
2．8酸解条件的响应曲面实验 5
2．9验证实验 6
3 结果与分析 6
3．1标准曲线的建立 6
3．2提取溶剂及水解方法的优化 7
3．3结合酚提取单因素优化实验 7
3．3．1盐酸浓度的优化 7
3．3．2料液比的优化 8
3．3．3酸解温度的优化 9
3．3．4酸解时间的优化 10
3.4多酚抗氧化性的分析 10
3．5响应曲面优化实验 10
3．5．1响应曲面试验方案及结果的分析 10
3．5．2响应曲面结果的方差分析 11
3．5．3各因素对提取效果的影响分析 12
3．5．4双因素对提取效果的影响分析 12
3．6结合酚提取参数优化及验证试验 15
4 结论 15
4.1单因素试验结论 15
4.2
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
响应曲面试验结论 15
5 展望 15
致谢 16
参考文献 16
结合型石榴多酚提取条件的优化研究
食品质量与安全 李梁宵
引言
引言
石榴为石榴科、石榴属落叶灌木或小乔木，既耐干旱又耐瘠薄，且好管理，因此在我国种植范围较广[1]。我国石榴品种多样、类型繁多，主要作为水果食用，深受消费者的喜爱，具有广阔的市场前景。石榴中含有多种生物活性成分如多酚类、黄酮类、脂肪酸、生物碱等，这些活性成分具有抗氧化、抑菌、防癌抑癌等作用。其中多酚类物质是主要的抗氧化活性成分，由一个苯环连接一个或多个羟基而形成[2]。多酚的抗氧化活性主要体现在清除自由基和抑制脂质氧化。多酚检测表明，多酚的抗氧化活性与多酚含量有关，黄琴[3]等通过实验得到石斛多酚提取物的含量与DPPH自由基清除率的相关性较强，相关系数为0.902。
大量研究表明，多酚抗氧化性不仅与多酚在食品中的数量相关，而且与其在食品基质中的存在形态密切相关[4]。多酚存在形态甚至影响其定量分析[5]。多酚以游离态和结合态两种形态存在于石榴皮中，目前的研究大多集中在游离态多酚的提取及其生物活性评价方面，而没有考虑到结合酚的研究，因此大大低估了总酚的含量。与游离酚提取方法不同的是，结合酚的提取多采用先通过水解方法使结合态多酚游离出来，再通过溶剂提取的方法提取结合酚。
本研究以石榴皮为原料，通过溶剂提取法除去游离酚，提取残渣经过酸水解，提取其中的结合酚，采用单因素与相应曲面相结合的方法优化了提取结合酚的工艺参数，以期为石榴皮的综合利用与深加工提供理论依据。
1 材料
1．1原料
由新鲜石榴皮粉碎、过80目筛得到的石榴皮粉
1．2试剂
上海申博化工有限公司：环己烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、正丁醇、无水乙醇；南京化学试剂有限公司：盐酸（分析纯）、无水Na2CO3（分析纯）；没食子酸标准品（相对分子质量为170.12）国药集团化学试剂有限公司；DPPH标准品；FolinCiocalteu试剂 北京索莱宝科技有限公司。
1．3主要仪器
电子天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；磁力搅拌器 金坛市大地自动化仪器厂；上海爱朗仪器有限公司：水流抽气机、旋转蒸发仪；水浴锅 上海红星仪器有限公司；高速离心机 Beckman coulter有限公司；紫外可见分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司
2方法
2．1标准曲线的绘制
2．1．1溶液的配制
（1）没食子酸溶液Ⅰ：取25 mg没食子酸加25 mL去离子水
（2）没食子酸溶液Ⅱ:取5 mg样品Ⅰ加50 mL去离子水
（3）7%Na2CO3溶液：取7 g碳酸钠，用50 mL去离子水溶解，定容至100 ml
2．1．2多酚含量的测定
准确吸取0.4、1.2mL没食子酸溶液Ⅱ，0、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL没食子酸溶液Ⅰ于不同的茄型瓶中，加入去离子水稀释到2 mL.然后吸取以上试样各100 uL，加入400 uL去离子水，100 uL FolinCiocalteu试剂静置6 min，再加入1 mL 7 %的Na2CO3溶液，0.8 mL去离子水，混匀后反应90 min，在760 nm波长处测定样品溶液吸光度，重复3次。得没食子酸浓度(X)与吸光值(Y)之间的直线方程。
2．2多酚抗氧化性的测定
2．2．1 DPPH溶液的配制
准确称取0.0197g DPPH，加无水乙醇定容到250 mL,得到浓度为2×104 mol/L的DPPH溶液，避光保存。
2．2．2 抗氧化性的测定
0.2 mL样品加0.2 mLDPPH溶液，摇匀后避光静置30 min，于517 nm条件下测得吸光度A1，；空白用0.2 mL无水乙醇代替；0.2 mL样品加0.2 mL无水乙醇，摇匀后避光静置30 min，于517 nm条件下测得吸光度AJ；0.2mL无水乙醇加0.2 mLDPPH溶液，摇匀后避光静置30 min，于517 nm条件下测定吸光度AC，每个样品平行3次[6]。多酚的抗氧化能力表现为对DPPH自由基清除能力。
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