鸟贝多糖性质及抗氧化活性测试技术研究
目 录
1 引言 2
1.1鸟贝 2
1.2 鸟贝多糖的性质及抗氧化活性 2
1.3 多糖研究存在的问题 3
2 实验原料与设备 4
2.1 主要实验原料及试剂 4
2.2 仪器与设备 5
3 试验方法 5
3.1 操作流程 5
3.2 鸟贝粗多糖提取工艺 5
3.3 多糖性质 6
3.4 体外抗氧化活性的测定 8
4 结果与分析 10
4.1 总糖含量测定 10
4.2 蛋白质含量测定 10
4.3 糖醛酸含量测定 12
4.4 还原能力测定 12
4.5 金属鳌合能力的测定 14
4.6 羟自由基清除率测定 15
致 谢 18
参 考 文 献 19
1 引言
海洋与陆地不同，高盐、高压、低温、光照不足，这样特殊的环境影响着海洋生物，使得海洋生物体内的多糖与陆地体内的有很大的不同。而海洋贝类引起了国内外学者的兴趣，使得很多人把目光放在了海洋贝类[1]，研究贝类的结构和生物活性并运用到生活及医药方面。
海洋贝类的营养价值高，并且有着多种活性，如多糖、蛋白、多肽等。生物活性包括抗氧化活性、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗病毒等。人们对海洋贝类的研究仍处于初级阶段，一些海洋生物尚待研究。
本实验以鸟贝为原料，对鸟贝多糖进行提取制备、分离纯化，对多糖的结构和抗氧化活性进行测定。
1.1 鸟贝
1.1.1 鸟贝简介
鸟贝别称石垣贝，因为形状类似于鸟的头而称呼鸟 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
贝，科学家又称作鸟蛤。鸟贝是人们常见的一种海洋贝类，一般生活在海滩的泥沙下。新鲜的鸟贝外观非常好看，鸟贝壳是椭圆形的，其中壳上的点缀花纹成螺旋状，其中鸟贝的骨板弯曲程度很高但形状很小。鸟贝有两瓣的铰链，其中左瓣的中间有两个小小的扩散状齿，与右瓣中的一个小小的齿印相吻合。在铰链前面会有一到两个的册齿，在另一边有一个微微凸起的骨板连接着韧带。两个瓣的内部有着突出的槽。人们常用鸟贝作美食，因此很少有人研究鸟贝的性质。
1.1.2 鸟贝的营养价值
鸟贝是一种营养成分非常丰富的贝类，鸟贝的营养价值很高，适量食用能有健脑明目、润肠和胃、抗癌等功效。这主要是因为鸟贝中含有丰富的蛋白质、维生素以及钙、磷等对人体益处多多的营养元素。吃鸟贝不仅能满足你味蕾的需求，还能补充身体所需的营养物质，边吃美食边补益，一举两得！
1.2 鸟贝多糖的性质及抗氧化活性
1.2.1 鸟贝多糖
1.2.1.1 鸟贝多糖的研究现状
现在海洋生物的研究起始于二十世纪六十年代，随着对陆地植物多糖的研究，海洋生物多糖也引起了人么的注意。糖类是最基本的组成成分，对肿瘤有一定的抑制作用，毒副作用小、安全性高[2]。从海洋生物中研究多糖，有利于医学中药物的研究，而贝类多糖是存在贝类中一种具有活性的物质。我国关于鸟贝的研究仍旧停留在初级阶段。
1.2.1.2 多糖性质
多糖的活性取决于多糖的理化性质，对多糖结构进行解析的前提是对多糖的理化性质的测试与分析。性质只要包括蛋白质、总糖、糖醛酸、硫酸基、分子量等方面。测定鸟贝粗多糖及纯化组分的总糖（苯酚一硫酸法）、蛋白质（考马斯亮蓝法）、糖醛酸（硫酸一间经联苯法）、硫酸（氯化钡一明胶比色法），对鸟贝粗多糖及纯化组分的理化性质进行初步了解。
1.2.2 多糖的抗氧化活性
1.2.2.1 多糖的抗氧化活性
随着科学家对海洋多糖的深入研究，发现了多糖具有不同的生物活性，比如抗氧化、抗癌、、提高免疫、抗炎抗衰老和骨折愈合、抗病毒等方面。目前测定抗氧化活性的方法有很多，包括体内检测和体外检测。体外检测主要是检测样品对检测试剂中自由基的清除如羟自由基、DPPH、超氧阴离子自由基等，检测样品的还原能力反应样品的抗氧化活性；体内检测主要是通过测定小鼠肝脏、血清、脑等组织器官的抗氧化酶活性，如谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）含量[3]。
1.2.2.2 多糖抗氧化活性应用
目前已经有很多科学家研究出海洋贝类抗氧化活性对人体的保护作用。张俊玲报道栉孔扇贝裙边糖胺聚糖有对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL )所致血管内皮细胞的脂质过氧化物的损伤有保护作用。王海桃报道牡蛎糖胺聚糖有对正常血管内皮细胞对氧化损伤、促增殖作用的血管内皮细胞有保护作用，
多糖的抗氧化活性不仅应用于人体内部，还可以用于外部，可以作为化妆品中保湿剂的添加物，并且具有较强的抗氧化行，促进新陈代谢推迟皮肤衰老。
1.3 多糖研究存在的问题
海洋贝类体内多糖的种类和含量不仅与贝的种类大小有关，还与收获。一般在繁殖的季节，贝类所含的脂肪类物质比较多。所以我们为了实验得到的结果具有一定的准确度，应该选择 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
购买足够量的样品，干燥后经粉碎机粉碎成粉末，这样可以保真后续的实验中材料是抑制可靠的，避免了因为贝类含水量不同而产生的影响。
尽管现在已经有很多对贝类多糖的研究，并且取得了一定的成就，但是相比较蛋白质和核酸还是有一定的差距，科学家对多糖的研究还不够深入，时间也相较短。而且，海洋贝类中多糖的含量较低，分离提取的方法较多，但还没有找到较为好的方法，所以导致纯化多糖的提取比较困难，纯度也教低。多糖结构和功能的关系到目前为止尚未清除，大部分仍旧凭借推测很分析，没有十足的证明，有待人们的深入研究。而相比较蛋白石和核算结构的测定，多糖的结构测定就相对困难很多，因为多糖很难得到纯的，因此带来很多的麻烦[4]。
1.4 课题研究的背景及意义
多糖作为天然产物存在于各个植物、动物细胞膜和微生物细胞壁等有机体中。多糖是由各种单糖聚合而成的高分子化合物，分子量由几百到几千几千万不等，导致其分子量大结构复杂。多糖与细胞与细胞的识别、癌症的诊断与治疗、细胞间物质的运输、免疫功能的调节等有着密不可分的联系。多糖的研究大多采用生物高分子研究的新方法和技术，因此是的国多内外专家对多糖的研究成为一个新的热点。而近年来，随着更多的文章的发表，人们对多糖的结构也在进一步的深入，同时推进了多糖中生物活性的运用。医药界是多糖研究中最活跃的也是进展最迅速的领域，这就显示了未来广阔的药用前景。
本课题通过提取、纯化鸟贝中的多糖，采用化学检测、仪器分析、指标评价等方法对鸟贝多糖的性质和抗氧化活性进行检测。对多糖的活性和结构进行更深入的研究能够帮助人们更好地了解海洋贝类多糖的结构与活性的关系,使能更好地利用多糖这一天然资源。
2 实验原料与设备
2.1 主要实验原料及试剂
2.1.1 实验原料
鸟贝
3.3.1.3 检测样品
配制100 ug/ml的样品，取2 ml溶液按照顺序加入1.0 ml 6.0%苯酚溶液、5.0 ml浓硫酸冷却后静置20 min,用分光光度计在490 nm处测吸光度值。根据葡萄糖标准曲线计算样品中总糖的含量。
1 引言 2
1.1鸟贝 2
1.2 鸟贝多糖的性质及抗氧化活性 2
1.3 多糖研究存在的问题 3
2 实验原料与设备 4
2.1 主要实验原料及试剂 4
2.2 仪器与设备 5
3 试验方法 5
3.1 操作流程 5
3.2 鸟贝粗多糖提取工艺 5
3.3 多糖性质 6
3.4 体外抗氧化活性的测定 8
4 结果与分析 10
4.1 总糖含量测定 10
4.2 蛋白质含量测定 10
4.3 糖醛酸含量测定 12
4.4 还原能力测定 12
4.5 金属鳌合能力的测定 14
4.6 羟自由基清除率测定 15
致 谢 18
参 考 文 献 19
1 引言
海洋与陆地不同，高盐、高压、低温、光照不足，这样特殊的环境影响着海洋生物，使得海洋生物体内的多糖与陆地体内的有很大的不同。而海洋贝类引起了国内外学者的兴趣，使得很多人把目光放在了海洋贝类[1]，研究贝类的结构和生物活性并运用到生活及医药方面。
海洋贝类的营养价值高，并且有着多种活性，如多糖、蛋白、多肽等。生物活性包括抗氧化活性、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗病毒等。人们对海洋贝类的研究仍处于初级阶段，一些海洋生物尚待研究。
本实验以鸟贝为原料，对鸟贝多糖进行提取制备、分离纯化，对多糖的结构和抗氧化活性进行测定。
1.1 鸟贝
1.1.1 鸟贝简介
鸟贝别称石垣贝，因为形状类似于鸟的头而称呼鸟 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
贝，科学家又称作鸟蛤。鸟贝是人们常见的一种海洋贝类，一般生活在海滩的泥沙下。新鲜的鸟贝外观非常好看，鸟贝壳是椭圆形的，其中壳上的点缀花纹成螺旋状，其中鸟贝的骨板弯曲程度很高但形状很小。鸟贝有两瓣的铰链，其中左瓣的中间有两个小小的扩散状齿，与右瓣中的一个小小的齿印相吻合。在铰链前面会有一到两个的册齿，在另一边有一个微微凸起的骨板连接着韧带。两个瓣的内部有着突出的槽。人们常用鸟贝作美食，因此很少有人研究鸟贝的性质。
1.1.2 鸟贝的营养价值
鸟贝是一种营养成分非常丰富的贝类，鸟贝的营养价值很高，适量食用能有健脑明目、润肠和胃、抗癌等功效。这主要是因为鸟贝中含有丰富的蛋白质、维生素以及钙、磷等对人体益处多多的营养元素。吃鸟贝不仅能满足你味蕾的需求，还能补充身体所需的营养物质，边吃美食边补益，一举两得！
1.2 鸟贝多糖的性质及抗氧化活性
1.2.1 鸟贝多糖
1.2.1.1 鸟贝多糖的研究现状
现在海洋生物的研究起始于二十世纪六十年代，随着对陆地植物多糖的研究，海洋生物多糖也引起了人么的注意。糖类是最基本的组成成分，对肿瘤有一定的抑制作用，毒副作用小、安全性高[2]。从海洋生物中研究多糖，有利于医学中药物的研究，而贝类多糖是存在贝类中一种具有活性的物质。我国关于鸟贝的研究仍旧停留在初级阶段。
1.2.1.2 多糖性质
多糖的活性取决于多糖的理化性质，对多糖结构进行解析的前提是对多糖的理化性质的测试与分析。性质只要包括蛋白质、总糖、糖醛酸、硫酸基、分子量等方面。测定鸟贝粗多糖及纯化组分的总糖（苯酚一硫酸法）、蛋白质（考马斯亮蓝法）、糖醛酸（硫酸一间经联苯法）、硫酸（氯化钡一明胶比色法），对鸟贝粗多糖及纯化组分的理化性质进行初步了解。
1.2.2 多糖的抗氧化活性
1.2.2.1 多糖的抗氧化活性
随着科学家对海洋多糖的深入研究，发现了多糖具有不同的生物活性，比如抗氧化、抗癌、、提高免疫、抗炎抗衰老和骨折愈合、抗病毒等方面。目前测定抗氧化活性的方法有很多，包括体内检测和体外检测。体外检测主要是检测样品对检测试剂中自由基的清除如羟自由基、DPPH、超氧阴离子自由基等，检测样品的还原能力反应样品的抗氧化活性；体内检测主要是通过测定小鼠肝脏、血清、脑等组织器官的抗氧化酶活性，如谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）含量[3]。
1.2.2.2 多糖抗氧化活性应用
目前已经有很多科学家研究出海洋贝类抗氧化活性对人体的保护作用。张俊玲报道栉孔扇贝裙边糖胺聚糖有对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL )所致血管内皮细胞的脂质过氧化物的损伤有保护作用。王海桃报道牡蛎糖胺聚糖有对正常血管内皮细胞对氧化损伤、促增殖作用的血管内皮细胞有保护作用，
多糖的抗氧化活性不仅应用于人体内部，还可以用于外部，可以作为化妆品中保湿剂的添加物，并且具有较强的抗氧化行，促进新陈代谢推迟皮肤衰老。
1.3 多糖研究存在的问题
海洋贝类体内多糖的种类和含量不仅与贝的种类大小有关，还与收获。一般在繁殖的季节，贝类所含的脂肪类物质比较多。所以我们为了实验得到的结果具有一定的准确度，应该选择 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
购买足够量的样品，干燥后经粉碎机粉碎成粉末，这样可以保真后续的实验中材料是抑制可靠的，避免了因为贝类含水量不同而产生的影响。
尽管现在已经有很多对贝类多糖的研究，并且取得了一定的成就，但是相比较蛋白质和核酸还是有一定的差距，科学家对多糖的研究还不够深入，时间也相较短。而且，海洋贝类中多糖的含量较低，分离提取的方法较多，但还没有找到较为好的方法，所以导致纯化多糖的提取比较困难，纯度也教低。多糖结构和功能的关系到目前为止尚未清除，大部分仍旧凭借推测很分析，没有十足的证明，有待人们的深入研究。而相比较蛋白石和核算结构的测定，多糖的结构测定就相对困难很多，因为多糖很难得到纯的，因此带来很多的麻烦[4]。
1.4 课题研究的背景及意义
多糖作为天然产物存在于各个植物、动物细胞膜和微生物细胞壁等有机体中。多糖是由各种单糖聚合而成的高分子化合物，分子量由几百到几千几千万不等，导致其分子量大结构复杂。多糖与细胞与细胞的识别、癌症的诊断与治疗、细胞间物质的运输、免疫功能的调节等有着密不可分的联系。多糖的研究大多采用生物高分子研究的新方法和技术，因此是的国多内外专家对多糖的研究成为一个新的热点。而近年来，随着更多的文章的发表，人们对多糖的结构也在进一步的深入，同时推进了多糖中生物活性的运用。医药界是多糖研究中最活跃的也是进展最迅速的领域，这就显示了未来广阔的药用前景。
本课题通过提取、纯化鸟贝中的多糖，采用化学检测、仪器分析、指标评价等方法对鸟贝多糖的性质和抗氧化活性进行检测。对多糖的活性和结构进行更深入的研究能够帮助人们更好地了解海洋贝类多糖的结构与活性的关系,使能更好地利用多糖这一天然资源。
2 实验原料与设备
2.1 主要实验原料及试剂
2.1.1 实验原料
鸟贝
3.3.1.3 检测样品
配制100 ug/ml的样品，取2 ml溶液按照顺序加入1.0 ml 6.0%苯酚溶液、5.0 ml浓硫酸冷却后静置20 min,用分光光度计在490 nm处测吸光度值。根据葡萄糖标准曲线计算样品中总糖的含量。
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