响应面法优化活血丹黄酮提取工艺的研究

目录
摘要1
关键词1
引言1
1 材料2
1.1 试验材料2
1.2 仪器与试剂2
2 方法与结果2
2.1 溶液的制备与总黄酮含量测定方法2
2.2 木犀草苷的HPLC分析方法2
2.3 单因素试验2
2.3.1 超声时间2
2.3.2 超声次数3
2.3.3 超声温度4
2.3.4 乙醇浓度4
2.3.5 液料比5
2.4 响应面试验5
2.4.1 响应面设计5
2.4.2 响应曲面和等高线图分析7
2.4.3 验证试验10
3 讨论10
3.1 单因素对总黄酮和木犀草苷提取效果的影响10
3.2 响应面法优化总黄酮和木犀草苷提取方法10
致谢11
参考文献11
Abstract12
Key words12
响应面法优化活血丹黄酮提取工艺的研究
学 生 刘红梅
[摘 要] 目的：优化活血丹黄酮的超声提取工艺。方法：以单因素试验为基准，运用Box-Behnken 响应面法考察超声时间、乙醇浓度和液料比对提取的总黄酮含量和木犀草苷含量的影响，确定最佳的提取工艺。结果：活血丹中总黄酮、木犀草苷的最佳提取工艺条件为：超声温度为 50 ℃，乙醇浓度为 60% ，液料比为 80 mLg1，在这个提取工艺条件下，得到的总黄酮含量为6.6787 mgg1，木犀草苷含量为0.2375 mgg1，与两者的预测值6.6817 mgg1和0.2413 mgg1不存在显著性差异。结论：由响应面法优化得到的参数条件准确可靠，具有较好的使用价值，可为活血丹中黄酮类有效成分的提取提供比较可行的实验参考和依据。
[关键词] 活血丹；响应面法；黄酮，超声波提取
活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.为唇形科活血丹属的多年生草本植物，以干燥地上部分入药，药材名为连钱草，味辛、微苦，性微寒，入肝、肾、膀胱经[1]。功擅
 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥ 
清热解毒、活血通络、散瘀消肿、利尿排石等[23]。其主要化学成分有黄酮类及其苷类如木犀草苷、萜类如齐墩果酸、挥发油类如石竹烯、生物碱类如活血丹A、有机酸类如迷迭香酸等[48]。活血丹因具有广泛的药理作用如抗氧化、保肝利胆、降脂排石（植物甾醇为主要药效成分）、降血糖（黄酮类成分为主要的药效成分）、抗菌抗炎（挥发油为主要药效成分）、抗癌抗肿瘤（如槲皮素）、抗病毒且对回肠平滑肌有影响等而常被临床上运用，多被用于治疗结石症、热淋石淋、疮痈肿痛、湿热黄疸、腮腺炎、胆囊炎以及烧伤、跌打损伤等[9-11]。
对于活血丹中黄酮类物质提取的研究较多，如成建明[12]等采用L9(34)正交设计，以乙醇浓度、提取时间、提取次数和乙醇用量4个因素作为考察对象来研究对连钱草总黄酮含量和出膏率的影响，发现最佳的提取工艺是药材粉碎过2号筛后第1次加12倍量60%乙醇回流40 min，第2，3次分别加10倍量60%乙醇回流30 min。姜宁[13]等通过正交试验和中心复合设计试验，发现超声辅助法提取到的总黄酮含量较水浴法提取的总黄酮量高，且具有高效、准确率高的特点。而牟会荣[14]等研究发现响应面法较正交试验法，提取所得的黄酮含量高且生产能耗低。故本试验以活血丹为试验材料，以其总黄酮和木犀草苷含量为考察指标，用超声时间、超声温度、超声次数、乙醇浓度和液料比5项为自变量做单因素试验，并在此基础上，利用Box-Behnken响应面分析法来优化活血丹黄酮类成分的提取工艺，以期构建以黄酮类成分为目标的活血丹质量评价体系。
1 材料
1.1 试验材料
活血丹药材于2015年5月采于江苏南京紫金山，经郭巧生教授鉴定为唇形科活血丹属活血丹Glechoma longituba(Nakai) Kupr后，选择生长良好且无病虫害的植株进行除杂、清洗、自然干燥后，粉碎过60目筛，于阴凉干燥处贮藏，备用。
1.2 仪器与试剂
仪器：ARA520型电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；BSM220.4型电子天平（上海卓精电子科技有限公司）；PS60A型超声波清洗器（深圳洁康超声波清洗机有限公司）； SHZDⅢ型循环水真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；Alpha1506型紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司）；日本岛津LC20AT型液相色谱仪：包括SPD20A紫外可见光检测器，美国Rheodyne 7725i型手动进样器及N2000色谱工作站。
试剂：氯化铝，冰乙酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；无水醋酸钠（分析纯，西陇化工股份有限公司）；95%乙醇（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；乙腈：色谱纯（广东光华科技股份有限公司）。芦丁（批号Y05M6S1B20771）对照品购自上海源叶生物科技有限公司。木犀草苷（纯度98%，批号20130211）购于天津士兰科技有限公司。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备与总黄酮含量测定方法
2.1.1 供试品溶液的制备 根据课题组前期超声法提取活血丹中总黄酮试验结果，初步确定活血丹中黄酮类物质的超声提取工艺：称取少量活血丹干燥粉末于锥形瓶中，加入适宜浓度、一定体积的乙醇溶液，称定重量后进行超声使充分提取，取出静置一段时间使冷却至室温，称定补足重量，抽滤，即得活血丹提取液，备用。
2.1.2 活血丹中黄酮类物质的分析方法 取1 mL供试品溶液于25 mL容量瓶中，加入8 mL 1.5% AlCl3溶液和4 mL pH5.5的NaAcHAc缓冲液，并用提取用的乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，静置0.5 h，于425 nm检测波长下测定吸光值，并根据回归方程计算样品中总黄酮含量。
2.2 木犀草苷的HPLC分析方法
以乙腈（A）0.5%冰醋酸（B）为流动相进行梯度洗脱，洗脱程序见表1。色谱柱：迪马钻石plus C18，4.6×250 mm，5 μm；检测波长为350 nm；流速为0.6 mLmin1；进样量为20 μL。色谱图见图1。

版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/zyx/484.html