超声法提取黄芩中总黄酮的工艺优化研究
摘 要目的从黄芩中完成总黄酮提取，选择确定提取工艺，并将最佳提取工艺找到，分析黄芩资源利用概况，促进黄芩的开发利用，奠定黄芩未来开发利用基础。方法以紫外分光光度法为依据进行黄芩中总黄酮含量检测，将芦丁当成纯品获取，单因素实验主要采用4种因素展开，以此对黄酮提取率受4种因素的影响进行了解，对比4种因素的实际影响效果。利用单因素实验将有关结果获得，且在正交实验中应用，优化所有因素，将提取工艺条件获得，完成最佳工艺条件确定。展开正交分析实验，将最佳提取条件最终获取，提取次数、提取时间、溶剂量、提取溶剂即本次设计的4个因素。结果提取所受4个因素的影响结果由小到大依次是溶剂倍数提取次数<提取次数<提取时间<溶剂。结论采用提取次数2次时、提取时间3h、溶剂倍数40倍、溶剂70%乙醇时，黄芩内总黄酮提取率2.295%，提取效果最佳。
Key words: Scutellaria baicalensis;Flavonoids;Orthogonal test 目 录
1 绪论 1
1.1 黄芩介绍 1
1.2 黄芩的化学成分 1
1.2.1 挥发油 1
1.2.2 多糖 1
1.2.3 黄酮类化合物 1
1.2.4 其他化学成分 2
1.3 黄芩的药理作用研究 2
1.3. 1 抗病毒、抗菌 2
1.3.2 清除自由基 2
1.3.3抗肿瘤 2
1.3.4 解热镇痛 2
1.3.5 增强免疫能力 3
1.3.6 保肝 3
1.3.7 其他药理作用 3
1.4 黄芩临床应用 3
1.4.1 治疗小儿急性呼吸道感染 3
1.4.2 治疗慢性气管炎 3
1.4.3 治疗急性菌痢 3
1.4.4 治疗钩端螺旋体病 4
1.4.5 治疗传染性肝炎 4
1.4.6治疗肾炎、肾盂肾炎 4
1.4.7治疗高血压病 5
1.5 黄酮类成分的提取方法 5
1.5.1 煎煮法 5
1.5.2 回流提取法 5
1.5 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
.3 超声波辅助提取法 5
1.6 研究目的和意义 6
2 实验 7
2.1 实验试剂 7
2.2 主要仪器 7
2.3 总黄酮含量测定方法 7
2.3.1 制备对照品溶液 7
2.3.2 制备供试品溶液 7
2.3.3选择检测波长 8
2.3.4考察线性关系 8
2.4 方法学验证 8
2.4.1精密度实验 8
2.4.2 重复性实验 9
2.4.3 稳定性实验 9
2.5 黄芩中总黄酮提取条件优化 9
2.5.1 黄酮得率所受溶剂的干扰 9
2.5.2 溶剂量对黄酮得率的影响 10
2.5.3 提取时间对黄酮得率的影响 10
2.5.4 提取次数对黄酮得率的影响 11
2.5.5 正交实验条件优化 11
结 论 14
参考文献 15
致 谢 17
1 绪论
1.1 黄芩介绍
黄芩本质上属于唇形科植物Scutellaria BaicalensisGeorgi（黄芩）的干燥根，西南黄芩S.amoena Wrightt、甘肃黄芩S.rehderiana Diels、黄芩S。BaicalensisGeorgi等均为其原植物，全国大部分省区均有种植，主产区通常包括冀、晋、甘、鲁、陕[1]。黄芩味苦性寒，归心、肺、肝、大肠经，止血安胎、清热燥湿、泻火解毒，普遍应用于临床实践[2]。近年来，国内外在开发，研究黄芩药理作用方面，开展了的许多工作。现代药理学证实，黄芩中有着多种的生物活性成分，但黄酮类化合物依然是主体[3]。各国理论界深入研究了黄芩生物活性，结果证实抗肿瘤、抗炎、降血糖等均为黄酮类化合物的生物活性[4]
1.2 黄芩的化学成分
黄芩中有氨基酸、黄酮类、微量元素等各种各样的化学成分，但有效份量主要是黄酮类。现有技术已经可以将黄芩素、黄芩苷、5,7,4三羟基8甲氧基黄酮等四十余种黄酮类成分鉴定出来[5]。
1.2.1 挥发油
基于黄芩根部实验分析测试，我国理论界完成了相对含量超过1%的十九个挥发性成分鉴定，挥发性成分占比排名前两位者依次是苯二酸类化合物、β广藿香烯，异戊二烯排名第三位，抗氧化剂BHA排名第四位，排名最后一位是α/β愈创木烯及乙酰苯[6]。
1.2.2 多糖
单糖连接的多糖是黄芩内多糖的主体。分析结果证实，黄芪内多糖的含量与加工方法密切相关。有学者指出，油炸黄芪的多糖含量最高。反过来，它是葡萄酒sa，生黄芩，酒蒸黄芪，叶黄素，木炭黄芩[7]。不仅如此，黄芩的种类和来源对其多糖含量有影响。
1.2.3 黄酮类化合物
截止目前，已有120多种黄酮类化合物被研究人员从各种黄芩内提取成功，而黄芩及其制剂质控指标主要指的是黄芩的特征化学成分，比如包括汉黄芩苷、黄芩素、黄芩苷等[8]。迄今为止，微波辅助提取法、超临界流体萃取法、常规溶剂提取法等黄酮类化合物提取技术发展已基本完善[8]。分析上述各种提取工艺探索结果表明，效率低，目标成分容易被破坏，实验效率低等是传统提取方法的缺点[9]。超声提取法以乙醇为提取溶剂采用超声振荡的方法时提取效率较高。
1.2.4 其他化学成分
分析证实，黄芩内不但含有多糖、挥发油、黄酮类化合物、苯甲酸、黄芩酶、氨基酸、淀粉等多种化学成分，而且富含各种微量元素，比如镉、铅、锰、铜、锌、铁、二萜苷类等及等 [10]。
1.3 黄芩的药理作用研究
1.3. 1 抗病毒、抗菌
黄芩具有相对较大的抗菌范围，黄芩素、苄基青霉素等均为其抗菌主体成分，且能对皮肤、指甲等部位滋生真菌进行有效抑制；特别在黄芩苷浓度如果小于细胞毒浓条件下还会对Env蛋白、T细胞和HIV病毒产生抑制，可以有效阻止HIV1的复制，因此其也就此有可能成为抗HIV药物的主成分之一[11]。
1.3.2 清除自由基
黄芩内活性成分主要有两种，其一为黄芩素，其二为黄芩苷。其对羟自由基、烷烃基清除比较有利，能将生物大分子（有氧化作用）破坏，对线粒体脂与卵磷脂质代谢产生抑制。膜脂的流动性会被过氧化作用降低;它还有助于防止对人类成纤维细胞（如超氧阴离子和氢过氧化物酶）的损害，并防止缺血再灌注[12]。
Key words: Scutellaria baicalensis;Flavonoids;Orthogonal test 目 录
1 绪论 1
1.1 黄芩介绍 1
1.2 黄芩的化学成分 1
1.2.1 挥发油 1
1.2.2 多糖 1
1.2.3 黄酮类化合物 1
1.2.4 其他化学成分 2
1.3 黄芩的药理作用研究 2
1.3. 1 抗病毒、抗菌 2
1.3.2 清除自由基 2
1.3.3抗肿瘤 2
1.3.4 解热镇痛 2
1.3.5 增强免疫能力 3
1.3.6 保肝 3
1.3.7 其他药理作用 3
1.4 黄芩临床应用 3
1.4.1 治疗小儿急性呼吸道感染 3
1.4.2 治疗慢性气管炎 3
1.4.3 治疗急性菌痢 3
1.4.4 治疗钩端螺旋体病 4
1.4.5 治疗传染性肝炎 4
1.4.6治疗肾炎、肾盂肾炎 4
1.4.7治疗高血压病 5
1.5 黄酮类成分的提取方法 5
1.5.1 煎煮法 5
1.5.2 回流提取法 5
1.5 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
.3 超声波辅助提取法 5
1.6 研究目的和意义 6
2 实验 7
2.1 实验试剂 7
2.2 主要仪器 7
2.3 总黄酮含量测定方法 7
2.3.1 制备对照品溶液 7
2.3.2 制备供试品溶液 7
2.3.3选择检测波长 8
2.3.4考察线性关系 8
2.4 方法学验证 8
2.4.1精密度实验 8
2.4.2 重复性实验 9
2.4.3 稳定性实验 9
2.5 黄芩中总黄酮提取条件优化 9
2.5.1 黄酮得率所受溶剂的干扰 9
2.5.2 溶剂量对黄酮得率的影响 10
2.5.3 提取时间对黄酮得率的影响 10
2.5.4 提取次数对黄酮得率的影响 11
2.5.5 正交实验条件优化 11
结 论 14
参考文献 15
致 谢 17
1 绪论
1.1 黄芩介绍
黄芩本质上属于唇形科植物Scutellaria BaicalensisGeorgi（黄芩）的干燥根，西南黄芩S.amoena Wrightt、甘肃黄芩S.rehderiana Diels、黄芩S。BaicalensisGeorgi等均为其原植物，全国大部分省区均有种植，主产区通常包括冀、晋、甘、鲁、陕[1]。黄芩味苦性寒，归心、肺、肝、大肠经，止血安胎、清热燥湿、泻火解毒，普遍应用于临床实践[2]。近年来，国内外在开发，研究黄芩药理作用方面，开展了的许多工作。现代药理学证实，黄芩中有着多种的生物活性成分，但黄酮类化合物依然是主体[3]。各国理论界深入研究了黄芩生物活性，结果证实抗肿瘤、抗炎、降血糖等均为黄酮类化合物的生物活性[4]
1.2 黄芩的化学成分
黄芩中有氨基酸、黄酮类、微量元素等各种各样的化学成分，但有效份量主要是黄酮类。现有技术已经可以将黄芩素、黄芩苷、5,7,4三羟基8甲氧基黄酮等四十余种黄酮类成分鉴定出来[5]。
1.2.1 挥发油
基于黄芩根部实验分析测试，我国理论界完成了相对含量超过1%的十九个挥发性成分鉴定，挥发性成分占比排名前两位者依次是苯二酸类化合物、β广藿香烯，异戊二烯排名第三位，抗氧化剂BHA排名第四位，排名最后一位是α/β愈创木烯及乙酰苯[6]。
1.2.2 多糖
单糖连接的多糖是黄芩内多糖的主体。分析结果证实，黄芪内多糖的含量与加工方法密切相关。有学者指出，油炸黄芪的多糖含量最高。反过来，它是葡萄酒sa，生黄芩，酒蒸黄芪，叶黄素，木炭黄芩[7]。不仅如此，黄芩的种类和来源对其多糖含量有影响。
1.2.3 黄酮类化合物
截止目前，已有120多种黄酮类化合物被研究人员从各种黄芩内提取成功，而黄芩及其制剂质控指标主要指的是黄芩的特征化学成分，比如包括汉黄芩苷、黄芩素、黄芩苷等[8]。迄今为止，微波辅助提取法、超临界流体萃取法、常规溶剂提取法等黄酮类化合物提取技术发展已基本完善[8]。分析上述各种提取工艺探索结果表明，效率低，目标成分容易被破坏，实验效率低等是传统提取方法的缺点[9]。超声提取法以乙醇为提取溶剂采用超声振荡的方法时提取效率较高。
1.2.4 其他化学成分
分析证实，黄芩内不但含有多糖、挥发油、黄酮类化合物、苯甲酸、黄芩酶、氨基酸、淀粉等多种化学成分，而且富含各种微量元素，比如镉、铅、锰、铜、锌、铁、二萜苷类等及等 [10]。
1.3 黄芩的药理作用研究
1.3. 1 抗病毒、抗菌
黄芩具有相对较大的抗菌范围，黄芩素、苄基青霉素等均为其抗菌主体成分，且能对皮肤、指甲等部位滋生真菌进行有效抑制；特别在黄芩苷浓度如果小于细胞毒浓条件下还会对Env蛋白、T细胞和HIV病毒产生抑制，可以有效阻止HIV1的复制，因此其也就此有可能成为抗HIV药物的主成分之一[11]。
1.3.2 清除自由基
黄芩内活性成分主要有两种，其一为黄芩素，其二为黄芩苷。其对羟自由基、烷烃基清除比较有利，能将生物大分子（有氧化作用）破坏，对线粒体脂与卵磷脂质代谢产生抑制。膜脂的流动性会被过氧化作用降低;它还有助于防止对人类成纤维细胞（如超氧阴离子和氢过氧化物酶）的损害，并防止缺血再灌注[12]。
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