蚂蟥冬眠过程中消化酶和非特异性免疫酶的研究
摘要：冬眠是蚂蟥对于温度降低常见的应激措施。冬眠对于蚂蟥在低温胁迫环境中生存有重要意义。冬眠过程中的蚂蟥其生长发育以及生理特性都会发生一系列的变化。鉴于认识这些变化对于我们掌握冬眠特性的重要性，本文将主要对冬眠中消化酶和非特异性免疫酶这一系列变化进行概述。结论：冬眠过程中蚂蟥消化酶有所变化，各消化酶随着冬眠程度加深活性显著下降(p<0.05)。冬眠过程中蚂蟥非特异性免疫酶有所变化，CAT活性是随着冬眠程度加深先降低后升高变化趋势，SOD活性呈先升高后降低再升高的变化趋势，ACP活性基本变化不大，AKP活性先降低再升高。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言（或绪论）2
1材料与方法3
1.1材料 3
1.2方法 3
1.2.1实验样品的制备3
1.2.2样品的蛋白酶活性测定3
1.2.3样品的淀粉酶活性测定3
1.2.4 样品的脂肪酶活性测定3
1.2.5 样品的超氧化物歧化酶活性测定3
1.2.6 样品的过氧化氢酶活性测定3
1.2.6 样品的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性测定3
2 结果与分析3
2.1冬眠过程中蚂蟥消化道淀粉酶活性4
2.2 冬眠过程中蚂蟥消化道脂肪酶活性4
2.3 冬眠过程中蚂蟥消化道蛋白酶活性4
2.4 冬眠过程中蚂蟥超氧化物歧化酶活性5
2.5 冬眠过程中蚂蟥过氧化氢酶活性5
2.6 冬眠过程中蚂蟥碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性6
3讨论6
3.1蚂蟥冬眠过程中消化酶水平变化分析6
3.1蚂蟥冬眠过程中非特异性免疫酶水平变化分析7
3.2 小结与展望7
致谢8
参考文献8
图1冬眠过程中蚂蟥消化道淀粉酶活性4
图2冬眠过程中蚂蟥消化道脂肪酶活性4
图3冬眠过程中蚂蟥消化道蛋白酶活性5
图4冬眠过程中蚂蟥超氧化物歧化酶活性5
图5冬眠过程中蚂蟥过氧化氢
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
酶活性6
图6冬眠过程中蚂蟥磷酸酶酶活性 6
蚂蟥冬眠过程中消化酶和非特异性免疫酶的研究
学生 施国伟
引言
蚂蟥(Whitmania Pigra Whitman)，《中华人民共和国药典》[1]2015年版收载的三种水蛭之一，又被称作宽体金线蛭，隶属于蛭纲(Hirudinea)无吻蛭目黄蛭科[2](Haemo pidae)。中医认为它有破血、逐瘀、通经的功能,其药用价值在西方也有一席之地。水蛭属高度特化的环节动物,目前已知全世界共有300多种,我国分布有62种[3]。
随着市场需求的激增和环境污染的加剧，导致蚂蟥等基源动物濒临灭绝，其人工养殖受到极大关注。但是，蚂蟥是变温动物，具有“冬眠”的习性，这极大程度影响蚂蟥养殖的生产效率和经济效益。相关酶活性实验前人已经做了大量实验。实验表明，在最适温度以下，酶活性随温度升高逐渐增加，超过最适温度，酶活性随温度升高逐渐降低[4]。国外相关结果也有表明，水产类动物消化酶的最适温度在30～60℃，数值分散，一般在40℃左右[5]。具体条件对于蚂蟥生理生长数据可能还和其个体规格有关，本文依然有着参考价值所在，将说明其冬眠状态下和正常生活状态下相关酶水平的变化，来阐述蚂蟥休眠期间相关的能量代谢途径，同时也为研究蚂蟥冬眠的机理提供思路。寻找调控蚂蟥休眠的内在因子、开展耐低温蚂蟥选育、制订蚂蟥越冬策略等工作提供理论依据，为蚂蟥更好的生长发育提供条件。
1 材料与方法
1.1 实验材料与仪器
成龄蚂蟥的经由大学中药研究所提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)的卵茧。
FA1104分析天平(上海精密科学仪器有限公司)、Alpha1506紫外可见分光光度计(上海谱光仪器有限公司)、HHS型水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)、离心机。
1.2 方法
1.2.1 实验样品的制备
将实验用蚂蟥不同处理分为5组，分别是将蚂蟥为25℃、10℃、4℃、4℃置于40天、深冬眠情况下4℃25℃复温12h处理。25℃为对照组，4℃为初冬眠组，4℃置于40天为深冬眠组，复温处理过后的为出冬眠组。
将不同处理阶段的成龄蚂蟥取出若干，取其消化道细胞，进行实验测定。
1.2.2 样品的蛋白酶活性测定
采用福林酚法[6]在37℃和已定的pH条件下，每分钟水解干酪素产生1μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。酶液蛋白含量采用考马斯亮蓝比色法测定。
1.2.3 样品的淀粉酶活性测定
采用3，5二硝基水杨酸比色法[6]在37℃的条件下，单位体积的酶量，每分钟水解淀粉生成1mg还原糖的产量为1个淀粉酶活力单位。
1.2.4 样品的脂肪酶活性测定
采用对棕榈酸硝基苯酯(pNPP)比色法[7]进行测定。
1.2.5 样品的超氧化物歧化酶测定
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase SOD)活性测定采用黄嘌呤氧化法(羟胺法) 进行测定。SOD活性定义为在37℃条件下，每毫克组织蛋白或每毫升血清与1mL反应液作用40min，SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U/mg prot或U/mL)。
1.2.6 样品的过氧化氢酶测定
过氧化氢酶(Catalase CAT)活性的测定采用钼酸铵法，其活性定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白中过氧化氢酶(CAT)每秒钟分解吸光度为0.50～0.55的底物中的过氧化氢相对量为一个过氧化氢酶的活力单位(U/mg prot)。
1.2.7 样品的酸性磷酸酶与碱性磷酸酶测定
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase AKP)和酸性磷酸酶(Acid phosphatase ACP)活性测定采用磷酸苯二钠法进行测定。碱性磷酸酶(AKP)活性定义为每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个活力单位(U/g prot)。酸性磷酸酶(ACP)活性定义为每克组织蛋白在37℃与基质作用30min产生1mg酚为1个活力单位(U/g prot)。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言（或绪论）2
1材料与方法3
1.1材料 3
1.2方法 3
1.2.1实验样品的制备3
1.2.2样品的蛋白酶活性测定3
1.2.3样品的淀粉酶活性测定3
1.2.4 样品的脂肪酶活性测定3
1.2.5 样品的超氧化物歧化酶活性测定3
1.2.6 样品的过氧化氢酶活性测定3
1.2.6 样品的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性测定3
2 结果与分析3
2.1冬眠过程中蚂蟥消化道淀粉酶活性4
2.2 冬眠过程中蚂蟥消化道脂肪酶活性4
2.3 冬眠过程中蚂蟥消化道蛋白酶活性4
2.4 冬眠过程中蚂蟥超氧化物歧化酶活性5
2.5 冬眠过程中蚂蟥过氧化氢酶活性5
2.6 冬眠过程中蚂蟥碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性6
3讨论6
3.1蚂蟥冬眠过程中消化酶水平变化分析6
3.1蚂蟥冬眠过程中非特异性免疫酶水平变化分析7
3.2 小结与展望7
致谢8
参考文献8
图1冬眠过程中蚂蟥消化道淀粉酶活性4
图2冬眠过程中蚂蟥消化道脂肪酶活性4
图3冬眠过程中蚂蟥消化道蛋白酶活性5
图4冬眠过程中蚂蟥超氧化物歧化酶活性5
图5冬眠过程中蚂蟥过氧化氢
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
酶活性6
图6冬眠过程中蚂蟥磷酸酶酶活性 6
蚂蟥冬眠过程中消化酶和非特异性免疫酶的研究
学生 施国伟
引言
蚂蟥(Whitmania Pigra Whitman)，《中华人民共和国药典》[1]2015年版收载的三种水蛭之一，又被称作宽体金线蛭，隶属于蛭纲(Hirudinea)无吻蛭目黄蛭科[2](Haemo pidae)。中医认为它有破血、逐瘀、通经的功能,其药用价值在西方也有一席之地。水蛭属高度特化的环节动物,目前已知全世界共有300多种,我国分布有62种[3]。
随着市场需求的激增和环境污染的加剧，导致蚂蟥等基源动物濒临灭绝，其人工养殖受到极大关注。但是，蚂蟥是变温动物，具有“冬眠”的习性，这极大程度影响蚂蟥养殖的生产效率和经济效益。相关酶活性实验前人已经做了大量实验。实验表明，在最适温度以下，酶活性随温度升高逐渐增加，超过最适温度，酶活性随温度升高逐渐降低[4]。国外相关结果也有表明，水产类动物消化酶的最适温度在30～60℃，数值分散，一般在40℃左右[5]。具体条件对于蚂蟥生理生长数据可能还和其个体规格有关，本文依然有着参考价值所在，将说明其冬眠状态下和正常生活状态下相关酶水平的变化，来阐述蚂蟥休眠期间相关的能量代谢途径，同时也为研究蚂蟥冬眠的机理提供思路。寻找调控蚂蟥休眠的内在因子、开展耐低温蚂蟥选育、制订蚂蟥越冬策略等工作提供理论依据，为蚂蟥更好的生长发育提供条件。
1 材料与方法
1.1 实验材料与仪器
成龄蚂蟥的经由大学中药研究所提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)的卵茧。
FA1104分析天平(上海精密科学仪器有限公司)、Alpha1506紫外可见分光光度计(上海谱光仪器有限公司)、HHS型水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)、离心机。
1.2 方法
1.2.1 实验样品的制备
将实验用蚂蟥不同处理分为5组，分别是将蚂蟥为25℃、10℃、4℃、4℃置于40天、深冬眠情况下4℃25℃复温12h处理。25℃为对照组，4℃为初冬眠组，4℃置于40天为深冬眠组，复温处理过后的为出冬眠组。
将不同处理阶段的成龄蚂蟥取出若干，取其消化道细胞，进行实验测定。
1.2.2 样品的蛋白酶活性测定
采用福林酚法[6]在37℃和已定的pH条件下，每分钟水解干酪素产生1μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。酶液蛋白含量采用考马斯亮蓝比色法测定。
1.2.3 样品的淀粉酶活性测定
采用3，5二硝基水杨酸比色法[6]在37℃的条件下，单位体积的酶量，每分钟水解淀粉生成1mg还原糖的产量为1个淀粉酶活力单位。
1.2.4 样品的脂肪酶活性测定
采用对棕榈酸硝基苯酯(pNPP)比色法[7]进行测定。
1.2.5 样品的超氧化物歧化酶测定
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase SOD)活性测定采用黄嘌呤氧化法(羟胺法) 进行测定。SOD活性定义为在37℃条件下，每毫克组织蛋白或每毫升血清与1mL反应液作用40min，SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U/mg prot或U/mL)。
1.2.6 样品的过氧化氢酶测定
过氧化氢酶(Catalase CAT)活性的测定采用钼酸铵法，其活性定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白中过氧化氢酶(CAT)每秒钟分解吸光度为0.50～0.55的底物中的过氧化氢相对量为一个过氧化氢酶的活力单位(U/mg prot)。
1.2.7 样品的酸性磷酸酶与碱性磷酸酶测定
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase AKP)和酸性磷酸酶(Acid phosphatase ACP)活性测定采用磷酸苯二钠法进行测定。碱性磷酸酶(AKP)活性定义为每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个活力单位(U/g prot)。酸性磷酸酶(ACP)活性定义为每克组织蛋白在37℃与基质作用30min产生1mg酚为1个活力单位(U/g prot)。
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