白及种子悬浮培养成幼苗的快繁体系的优化
摘要：为探究白及种子悬浮培养的快繁体系的优化方案。采用悬浮培养技术，将白及种子接种到不同的悬浮培养基中，置于恒温25℃，光照2500lx，光照周期为10h/14h，相对湿度为55%～75%，摇数100r/min的环境中进行培养，观察并记录不同培养基下的白及种子的萌发时间和萌发状况。再设计不同浓度的MS培养基、NAA、6-BA和KT等4个影响因子的9种悬浮培养基配方，将原球茎移接到不同成分的成苗培养基上，分析各处理下白及幼苗的生长势，筛选出最优的处理方案。结果表明，白及种子悬浮培养萌发最优培养基是1/4MS + 1 mg·L-1 NAA；白及原球茎诱导成幼苗的最适培养基为土豆香蕉汁+1 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 KT。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试材料2
1.2 试验方法2
1.2.1 外植体灭菌2
1.2.2 白及种子的萌发试验2
1.2.3 白及原球茎培养成幼苗3
1.3 数据分析3
2 结果与分析3
2.1 不同的灭菌方法对白及种子污染率的影响3
2.2 白及种子悬浮培养萌发情况3
2.3 白及原球茎悬浮培养成苗的情况4
2.3.1 不同悬浮培养基下的白及原球茎成苗的情况分析4
2.3.2 不同添加剂对的白及原球茎成苗的影响4
2.3.3 不同植物激素对的白及原球茎成苗的影响5
3 讨论5
3.1 白及种子悬浮培养萌发试验5
3.1.1 白及种子的灭菌方法5
3.1.2 MS含量和NAA浓度对白及种子萌发的影响5
3.2 不同培养基配方对白及原球茎成苗的影响6
3.2.1 不同的添加剂对白及原球茎成苗的影响6
3.2.2 不同的植物激素对白及原球茎成苗的影响6
4 总结7
致谢7
参考文献7
白及种子
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
悬浮培养成幼苗的快繁体系的优化
引言
中药材白及的植物基源来自兰科白及属植物白及（Bletilla striata Rchb. F.）的干燥块茎，别名又叫做白芨，白鸡儿等。白及性味苦、甘、涩，微寒，归肺、肝、胃经。它具有收敛止血，消肿生肌等功效，用于咳血吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂等；现用于治疗肺结核咳血，溃疡病出血等疾病[1]。目前随着对白及的药理实验研究的深入，发现白及还具有抗菌、抗癌、抗肿瘤等药理作用[23]。除了医药方面，白及还在园林、化妆品、食品、工业等领域得到了广泛的应用。作为地生兰的白及，因其花色多样，花形奇特，适合室内观赏，近年在国内外花卉市场上受到追捧。
白及体内提取出的一种水溶性多糖——白及胶，它具有的特殊粘性，使它可作为昂贵香烟和书画的粘合剂，胃镜的保护剂，断须野山参的修复剂，护肤美容的保湿剂等应用于工业、食品和化妆品领域。因其应用范围广，白及的市场需求逐步扩大，但是白及种子的自然萌发率极低，繁殖困难，制约了白及的产量，造成白及市场的供不应求，价格只高不低。所以利用人工繁育来提高白及产量，缓解紧张的市场势在必行。目前在生产上主要以分株繁殖为主作为人工繁育的方法，但这种方法的繁殖系数较低，生长周期较长，难以适应农业化生产的需求。而目前在生产上，利用组织培养技术对白及种子进行快速繁殖，不仅可以提高白及的繁殖系数，还缩短了繁殖周期。在植物组织培养过程中，固体培养基是最常使用的一种培养基，但随着组培技术的不断成熟，研究发现对于某些植物而言，例如白及种子这种种子多且细小的材料，采用液体培养的方式会比固体培养基的效果更佳，生长状况更优。且随着植物悬浮培养技术的发展，白及种子的悬浮培养技术已成为可能，它不仅繁殖速度快，周期短，实验操作便捷，节省了人力物力，还可人工控制培养条件，管理方便。
1 材料与方法
1．1 实验材料与仪器
供试材料为白及成熟蒴果（蒴果采自大别山区野生白及），经大学中药系讲师汤兴利鉴定为兰科植物白及(Bletilla striata（Thunb.）Reichb. f.)的干燥成熟蒴果。
次氯酸钠溶液（西陇化工股份有限公司）、蔗糖（西陇化工股份有限公司）、无水乙醇（中山市上源化工有限公司）、肌醇（国药集团化学试剂有限公司）、6苄氨基嘌呤、6糠氨基嘌呤和α萘乙酸（均为上海宇涵生物科技有限公司）。以上均为分析纯。
FA1104分析天平（上海精密科学仪器有限公司）、HS1300U超净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）、HV85全自动高压灭菌锅（日本Hirayama公司）、HY8(A) 大容量振荡器（江苏盛蓝仪器有限公司）。
1．2 试验方法
1．1．1 外植体灭菌 先用洗衣粉水轻刷白及蒴果的表面，尽量减少果壳破裂的可能，再用无菌水冲洗5~8 min，用吸水纸轻轻擦干。在超净工作台内，用解剖刀切开蒴果的一头，将种子抖落在灭过菌的空瓶子中，采用两种处理方法：①75%无水乙醇浸泡30s后用在2% NaClO中浸泡8min滤出，用无菌水冲洗56次；②75%无水乙醇浸泡15s后在84消毒液消毒5min后滤出，无菌水冲洗56次。期间不停摇动，使其灭菌彻底。
1．2．2 白及种子的萌发试验 为了避免接种的白及种子数量不一样，减少实验误差，将种子悬浮于无菌水中，将悬浮液稀释到种子浓度约为50粒/50μL后，用移液枪吸取300μL的种子悬浮液，注入每瓶液体悬浮培养基中。根据下表1中的配方配置9组液体悬浮培养基，每组10个重复。置于恒温25℃，光照2500lx，光照周期为10h/14h，相对湿度为55%～75% ，摇数100r/min的摇床中。记录它们的萌发时间，观察15d、30d和45d时各处理白及种子发芽情况，根据白及发芽速度和一致性分为5级评价标准。
1．2．3 白及原球茎培养成幼苗 按照上表2的配方配置9组液体悬浮培养基，每组十个重复。并将原球茎接入成苗悬浮培养基中。30天后测量并记录50株烂叶株数、20株总重和苗高，总结各个组的幼苗生长势。
1．3 数据分析 实验数据采用SPSS 20.0软件进行统计分析。
2 结果与分析
2．1 不同的灭菌方法对白及种子污染率的影响
白及种子接种7d后观察不同灭菌处理下白及种子液体悬浮培养基的污染情况，统计各组污染的个数并计算污染率的百分比。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试材料2
1.2 试验方法2
1.2.1 外植体灭菌2
1.2.2 白及种子的萌发试验2
1.2.3 白及原球茎培养成幼苗3
1.3 数据分析3
2 结果与分析3
2.1 不同的灭菌方法对白及种子污染率的影响3
2.2 白及种子悬浮培养萌发情况3
2.3 白及原球茎悬浮培养成苗的情况4
2.3.1 不同悬浮培养基下的白及原球茎成苗的情况分析4
2.3.2 不同添加剂对的白及原球茎成苗的影响4
2.3.3 不同植物激素对的白及原球茎成苗的影响5
3 讨论5
3.1 白及种子悬浮培养萌发试验5
3.1.1 白及种子的灭菌方法5
3.1.2 MS含量和NAA浓度对白及种子萌发的影响5
3.2 不同培养基配方对白及原球茎成苗的影响6
3.2.1 不同的添加剂对白及原球茎成苗的影响6
3.2.2 不同的植物激素对白及原球茎成苗的影响6
4 总结7
致谢7
参考文献7
白及种子
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
悬浮培养成幼苗的快繁体系的优化
引言
中药材白及的植物基源来自兰科白及属植物白及（Bletilla striata Rchb. F.）的干燥块茎，别名又叫做白芨，白鸡儿等。白及性味苦、甘、涩，微寒，归肺、肝、胃经。它具有收敛止血，消肿生肌等功效，用于咳血吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂等；现用于治疗肺结核咳血，溃疡病出血等疾病[1]。目前随着对白及的药理实验研究的深入，发现白及还具有抗菌、抗癌、抗肿瘤等药理作用[23]。除了医药方面，白及还在园林、化妆品、食品、工业等领域得到了广泛的应用。作为地生兰的白及，因其花色多样，花形奇特，适合室内观赏，近年在国内外花卉市场上受到追捧。
白及体内提取出的一种水溶性多糖——白及胶，它具有的特殊粘性，使它可作为昂贵香烟和书画的粘合剂，胃镜的保护剂，断须野山参的修复剂，护肤美容的保湿剂等应用于工业、食品和化妆品领域。因其应用范围广，白及的市场需求逐步扩大，但是白及种子的自然萌发率极低，繁殖困难，制约了白及的产量，造成白及市场的供不应求，价格只高不低。所以利用人工繁育来提高白及产量，缓解紧张的市场势在必行。目前在生产上主要以分株繁殖为主作为人工繁育的方法，但这种方法的繁殖系数较低，生长周期较长，难以适应农业化生产的需求。而目前在生产上，利用组织培养技术对白及种子进行快速繁殖，不仅可以提高白及的繁殖系数，还缩短了繁殖周期。在植物组织培养过程中，固体培养基是最常使用的一种培养基，但随着组培技术的不断成熟，研究发现对于某些植物而言，例如白及种子这种种子多且细小的材料，采用液体培养的方式会比固体培养基的效果更佳，生长状况更优。且随着植物悬浮培养技术的发展，白及种子的悬浮培养技术已成为可能，它不仅繁殖速度快，周期短，实验操作便捷，节省了人力物力，还可人工控制培养条件，管理方便。
1 材料与方法
1．1 实验材料与仪器
供试材料为白及成熟蒴果（蒴果采自大别山区野生白及），经大学中药系讲师汤兴利鉴定为兰科植物白及(Bletilla striata（Thunb.）Reichb. f.)的干燥成熟蒴果。
次氯酸钠溶液（西陇化工股份有限公司）、蔗糖（西陇化工股份有限公司）、无水乙醇（中山市上源化工有限公司）、肌醇（国药集团化学试剂有限公司）、6苄氨基嘌呤、6糠氨基嘌呤和α萘乙酸（均为上海宇涵生物科技有限公司）。以上均为分析纯。
FA1104分析天平（上海精密科学仪器有限公司）、HS1300U超净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）、HV85全自动高压灭菌锅（日本Hirayama公司）、HY8(A) 大容量振荡器（江苏盛蓝仪器有限公司）。
1．2 试验方法
1．1．1 外植体灭菌 先用洗衣粉水轻刷白及蒴果的表面，尽量减少果壳破裂的可能，再用无菌水冲洗5~8 min，用吸水纸轻轻擦干。在超净工作台内，用解剖刀切开蒴果的一头，将种子抖落在灭过菌的空瓶子中，采用两种处理方法：①75%无水乙醇浸泡30s后用在2% NaClO中浸泡8min滤出，用无菌水冲洗56次；②75%无水乙醇浸泡15s后在84消毒液消毒5min后滤出，无菌水冲洗56次。期间不停摇动，使其灭菌彻底。
1．2．2 白及种子的萌发试验 为了避免接种的白及种子数量不一样，减少实验误差，将种子悬浮于无菌水中，将悬浮液稀释到种子浓度约为50粒/50μL后，用移液枪吸取300μL的种子悬浮液，注入每瓶液体悬浮培养基中。根据下表1中的配方配置9组液体悬浮培养基，每组10个重复。置于恒温25℃，光照2500lx，光照周期为10h/14h，相对湿度为55%～75% ，摇数100r/min的摇床中。记录它们的萌发时间，观察15d、30d和45d时各处理白及种子发芽情况，根据白及发芽速度和一致性分为5级评价标准。
1．2．3 白及原球茎培养成幼苗 按照上表2的配方配置9组液体悬浮培养基，每组十个重复。并将原球茎接入成苗悬浮培养基中。30天后测量并记录50株烂叶株数、20株总重和苗高，总结各个组的幼苗生长势。
1．3 数据分析 实验数据采用SPSS 20.0软件进行统计分析。
2 结果与分析
2．1 不同的灭菌方法对白及种子污染率的影响
白及种子接种7d后观察不同灭菌处理下白及种子液体悬浮培养基的污染情况，统计各组污染的个数并计算污染率的百分比。
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