超声波酶法联合提取绞股蓝总皂苷的工艺研究
根据单因素试验，绞股蓝皂苷的超声辅助提取的过程中进行了优化。该处理通过，单一的酶方法，单一的超声法，超声波协同酶方法。而先酶解处理，绞股蓝中总皂苷的要比先超声后酶解的方法提取率更高，达到了7.5％。纤维素酶和单个超声方法的最高提取率分别是5.577％和5.239％，这表明酶解后超声波的处理具有较高的提取率相比其他几个方案而言。
目录
1. 引言 7
1.1研究背景 7
1.2研究目的及意义 7
1.3绞股蓝的药理作用 8
1.3.1抗肿瘤 8
1.3.2降血糖 8
1.3.3降血脂 9
1.4绞股蓝的植物学特征及资源状况 9
1.4.1绞股蓝植物学特征 9
1.4.2绞股蓝的资源状况 9
1.5绞股蓝皂苷提取工艺研究现状 10
1.5.1水提法 10
1.5.2有机溶剂提取法 11
1.5.3酶法 11
2. 材料与方法 12
2.1材料与仪器 12
2.2方法 12
2.2.1 酶法提取的单因素实验 12
2.2.2 酶法提取的正交试验 13
2.2.3 单一超声波提取 13
2.2.4超声波协同酶法提取 13
2.2.5 响应面试验设计 14
3. 结果与分析 15
3.1加酶量对绞股蓝皂苷提取率的影响 15
3.2溶剂p H对绞股蓝皂苷提取率的影响 15
3.3酶解温度对绞股蓝皂苷提取率的影响 16
3.4酶解反应时间对绞股蓝皂苷提取率的影响 16
3.5酶法提取的正交试验结果 17
3.6单一超声波法提取的试验结果 18
3.7超声波协同酶法提取的试验结果 18
3.7.1 超声波后酶解处理 18
3.7.2 先酶解后超声波处理 19
3.8响应面法试验结果与分析 19
3.9不同提取方法绞股蓝总皂苷提取率的比较 22
4. 结论 23
主要参考文献 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
24
致谢 26
1. 引言
1.1研究背景
绞股蓝（Gypena pentaphyllum）的总皂苷是它中的主要活性成分，由于其各种药理作用，已经发展成各种商品。因此，近年来，研究人员越来越重视绞股蓝总皂苷的提取工艺，为后续研究奠定了基础。有很多报道关于绞股蓝总皂苷的提取工艺，以及提取方法已经很多，如纤维酶提取，微波提取，有机溶剂提取，超声等方法。不过，即使有相同的提取工艺，相同参数的最终提取率也不一定相同。不同的人研究出来的数据不同，这可能和材料的产地，收获的季节以及仪器的型号有关。因此，本次研究采用同一批次的陕西平利所产的绞股蓝干叶，比较几个主要方法的绞股蓝的提取率，获得最佳的提取方案[1]。
1.2研究目的及意义
研究绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino）又名七叶参，是属葫芦目葫芦科植物，在中国绞股蓝主要分布在湖南、湖北、云南、广西等省，而生长在南方的绞股蓝其药用的含量比较高，以全草药食两用，味甘性凉，含由皂苷、黄酮、多糖等多种成分。其中以皂苷为主要的药用成分之一，民间称其为神奇的“不长寿药草”，具有益气健脾、化痰止咳、清热解毒之功效[2]。
绞股蓝茶对人体有良好的效益。取于嫩芽和龙须从绞股蓝的部分。汤是明确的，可以在46杯连续酿制而成。汤的颜色不降低，并且它已经从绞股蓝的增长点带来的营养保健功能。长期饮用不会有副作用的保健作用。所以，它在研究和保健食品和新药开发巨大的应用前景，是一种食用和可食用的植物新资源。
目前，提取绞股蓝皂苷的方法很多，但大多数实验都集中在单因素或多因素的正交优化上，对这些提取方法之间的协同效应没有大量的研究。 因此，本实验结合超声提取总皂苷和酶法提取总皂苷的优点，优化了绞股蓝，绞股蓝和提取工艺。主要研究酶解温度、超声波的功率、溶剂的pH值以及超声提取的时间对绞股蓝皂苷提取的效果。并用总皂苷的提取率为主要考察指标，在他们的单因素实验的基础上，绞股蓝皂苷的提取面提取方法是由响应面法分析研究[3]。
1.3绞股蓝的药理作用
1.3.1抗肿瘤
大量的体外实验已经显示，当绞股蓝皂苷的浓度为1?10mg / L时，对肺癌细胞系A549的抑制作用，Calul和九分之五百九十二的抑制作用比对宫颈癌HelaS3显著更高。因此，绞股骨蓝具有变化程度的抑制作用用于各种类型的肿瘤细胞。刘桦等人发现，不同的体外培养的实体癌细胞株，绞股蓝皂苷的抑制作用有着不同[4]。
卢青等和何洪胜等人，分别采用细胞毒性试验检测体外6种白血病细胞的敏感性和研究发现绞股蓝对细胞分裂率，死亡率和形态总皂苷的效果。实验结果分别表明，与常用的局部化疗药物相比，抑制作用于其他化疗药效果相当，但其高于长春新碱在体外对肿瘤的抑制作用；白血病细胞具有一定的结合作用，当绞股蓝皂苷浓度为60微克/ 毫升时。当绞股蓝青霉素的剂量为100毫克/毫升到400毫克/毫升，它具有对癌细胞具有很强的抑制作用。柔红霉素，阿糖胞苷和甲氨蝶呤体外抑制是等价的。绞股蓝总皂苷的剂量为300 mg/m L同时作用20小时，能完全让癌细胞的增值能力失去。该结果还表明，有绞股蓝的剂量和绞股蓝的抗肿瘤效果之间的线性关系。金梅等人。表明，用120μg/ mL的浓度的绞股蓝提取物可以减少癌细胞的DNA合成速率，绞股蓝具有最强的抗肿瘤作用。其杀灭率可达54 %87.5 %[5]。
目录
1. 引言 7
1.1研究背景 7
1.2研究目的及意义 7
1.3绞股蓝的药理作用 8
1.3.1抗肿瘤 8
1.3.2降血糖 8
1.3.3降血脂 9
1.4绞股蓝的植物学特征及资源状况 9
1.4.1绞股蓝植物学特征 9
1.4.2绞股蓝的资源状况 9
1.5绞股蓝皂苷提取工艺研究现状 10
1.5.1水提法 10
1.5.2有机溶剂提取法 11
1.5.3酶法 11
2. 材料与方法 12
2.1材料与仪器 12
2.2方法 12
2.2.1 酶法提取的单因素实验 12
2.2.2 酶法提取的正交试验 13
2.2.3 单一超声波提取 13
2.2.4超声波协同酶法提取 13
2.2.5 响应面试验设计 14
3. 结果与分析 15
3.1加酶量对绞股蓝皂苷提取率的影响 15
3.2溶剂p H对绞股蓝皂苷提取率的影响 15
3.3酶解温度对绞股蓝皂苷提取率的影响 16
3.4酶解反应时间对绞股蓝皂苷提取率的影响 16
3.5酶法提取的正交试验结果 17
3.6单一超声波法提取的试验结果 18
3.7超声波协同酶法提取的试验结果 18
3.7.1 超声波后酶解处理 18
3.7.2 先酶解后超声波处理 19
3.8响应面法试验结果与分析 19
3.9不同提取方法绞股蓝总皂苷提取率的比较 22
4. 结论 23
主要参考文献 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
24
致谢 26
1. 引言
1.1研究背景
绞股蓝（Gypena pentaphyllum）的总皂苷是它中的主要活性成分，由于其各种药理作用，已经发展成各种商品。因此，近年来，研究人员越来越重视绞股蓝总皂苷的提取工艺，为后续研究奠定了基础。有很多报道关于绞股蓝总皂苷的提取工艺，以及提取方法已经很多，如纤维酶提取，微波提取，有机溶剂提取，超声等方法。不过，即使有相同的提取工艺，相同参数的最终提取率也不一定相同。不同的人研究出来的数据不同，这可能和材料的产地，收获的季节以及仪器的型号有关。因此，本次研究采用同一批次的陕西平利所产的绞股蓝干叶，比较几个主要方法的绞股蓝的提取率，获得最佳的提取方案[1]。
1.2研究目的及意义
研究绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino）又名七叶参，是属葫芦目葫芦科植物，在中国绞股蓝主要分布在湖南、湖北、云南、广西等省，而生长在南方的绞股蓝其药用的含量比较高，以全草药食两用，味甘性凉，含由皂苷、黄酮、多糖等多种成分。其中以皂苷为主要的药用成分之一，民间称其为神奇的“不长寿药草”，具有益气健脾、化痰止咳、清热解毒之功效[2]。
绞股蓝茶对人体有良好的效益。取于嫩芽和龙须从绞股蓝的部分。汤是明确的，可以在46杯连续酿制而成。汤的颜色不降低，并且它已经从绞股蓝的增长点带来的营养保健功能。长期饮用不会有副作用的保健作用。所以，它在研究和保健食品和新药开发巨大的应用前景，是一种食用和可食用的植物新资源。
目前，提取绞股蓝皂苷的方法很多，但大多数实验都集中在单因素或多因素的正交优化上，对这些提取方法之间的协同效应没有大量的研究。 因此，本实验结合超声提取总皂苷和酶法提取总皂苷的优点，优化了绞股蓝，绞股蓝和提取工艺。主要研究酶解温度、超声波的功率、溶剂的pH值以及超声提取的时间对绞股蓝皂苷提取的效果。并用总皂苷的提取率为主要考察指标，在他们的单因素实验的基础上，绞股蓝皂苷的提取面提取方法是由响应面法分析研究[3]。
1.3绞股蓝的药理作用
1.3.1抗肿瘤
大量的体外实验已经显示，当绞股蓝皂苷的浓度为1?10mg / L时，对肺癌细胞系A549的抑制作用，Calul和九分之五百九十二的抑制作用比对宫颈癌HelaS3显著更高。因此，绞股骨蓝具有变化程度的抑制作用用于各种类型的肿瘤细胞。刘桦等人发现，不同的体外培养的实体癌细胞株，绞股蓝皂苷的抑制作用有着不同[4]。
卢青等和何洪胜等人，分别采用细胞毒性试验检测体外6种白血病细胞的敏感性和研究发现绞股蓝对细胞分裂率，死亡率和形态总皂苷的效果。实验结果分别表明，与常用的局部化疗药物相比，抑制作用于其他化疗药效果相当，但其高于长春新碱在体外对肿瘤的抑制作用；白血病细胞具有一定的结合作用，当绞股蓝皂苷浓度为60微克/ 毫升时。当绞股蓝青霉素的剂量为100毫克/毫升到400毫克/毫升，它具有对癌细胞具有很强的抑制作用。柔红霉素，阿糖胞苷和甲氨蝶呤体外抑制是等价的。绞股蓝总皂苷的剂量为300 mg/m L同时作用20小时，能完全让癌细胞的增值能力失去。该结果还表明，有绞股蓝的剂量和绞股蓝的抗肿瘤效果之间的线性关系。金梅等人。表明，用120μg/ mL的浓度的绞股蓝提取物可以减少癌细胞的DNA合成速率，绞股蓝具有最强的抗肿瘤作用。其杀灭率可达54 %87.5 %[5]。
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