超声波酶法联合提取绞股蓝总皂苷的工艺研究1
本人签名 日期 摘 要 绞股蓝种子中的总皂苷具有多样的药理作用及临床价值。但目前没有一种很好的提取方式，使得该药物能广泛应用临床中，进而在各种疾病中广泛发挥其药理作用[1]。相较而言，超声波-酶法联合提取率较高，所以本研究通过实验确定超声波—酶法的最适宜条件，以最大化的提高总皂苷的提取率。超声波协同酶法对绞股蓝中总皂苷的提取有明显的促进作用,而在特定条件下，会达到最大值。加酶量0.4%、PH值5.0、酶解时间2h、酶解温度50℃、在功率为190W的超声波作用20min的情况下，先酶解后超声波处理为提取绞股蓝中总皂苷的最佳方案。
目 录
1 绪 论 1
2内容与方法 2
2.1研究内容 2
2.2研究方法 2
2.2.1材 料 2
2.2.2实验仪器 2
2.3试验方法 2
2.3.1总皂苷的提取和测定 2
2.3.2提取工艺 2
2.4资料分析 3
2.5数据质量 3
3结果 4
3.1单一酶法提取 4
3.1.1 加酶量 4
3.1.2 pH值 4
3.1.3 酶解时间 5
3.1.4 酶解温度 5
3.1.5综合单因素试验 6
3.2单一超声波法提取 6
4讨论 8
参考文献 9
致 谢 11
1 绪论
绞股蓝中提取的皂苷具有很高的临床药用价值，有着“南方人参”的美誉［2］。但是目前缺少一种有效的方法能更大程度上的提高绞股蓝中总皂苷的提取率，本实验采用超声波酶法联合提取绞股蓝种子中的总皂苷，对加酶量、PH值、酶解时间和温度进行单因素实验，然后通过Boxbenhnken响应面设计，选取最优工艺。
2内容与方法
2.1研究内容
以绞股蓝种子为原料，为优化绞股蓝种子中总皂苷的提取工艺研究，选择加酶量、PH值、酶解时间和温度为自变量，再分别以功率为190w、285W的超声波细胞破碎仪处理不同时间后，测其吸光度从而筛选 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
出最佳制备工艺。
2.2研究方法
2.2.1材 料
绞股蓝种子。采摘于陕西省平利县。
2.2.2实验仪器
KHWS4数显恒温水浴锅、FRQ1002T数显小型超声波清洗机 、BDV101501822微孔板分光光度计、药物电子天平
2.3试验方法
2.3.1总皂苷的提取和测定
绞股蓝粉10g、水160ml，振荡20min后过滤，再加水120ml后振荡20min，过滤，将两次所得滤液混合，调节pH至9～10后静置，滤除沉淀，滤液备用。在设置的超声条件下提取，抽滤，浓缩，定容，测定总皂苷含量。
2.3.2提取工艺
工艺流程：将绞股蓝种子清洗后晾干，粉碎后超声处理，加入复合酶，离心取上清液，所得沉淀溶解后进行测定。
2.4资料分析
对实验所得出的结果进行整理核对，建立数据库，采用对照方法对数据库中的结果进行分析。
2.5数据质量
严格按照研究方法的要求开展实验。质量控制应贯穿在原料选取、仪器选取、数据录入和处理、检测等各个环节，使用符合标准的原料及实验器材，必须采取各种方法尽量避免选择性偏倚，对所得数据认真分析，并多次实验减少误差。
3结果
3.1单一酶法提取
绞股蓝细胞壁及细胞间质给提取绞股蓝中皂苷带来很大难度，在提取时必须克服。纤维素酶可以破坏细胞壁和细胞间质，使其阻力消失从而使皂苷溶出。其中涉及到多种因素的影响［3］。
3.1.1 加酶量
用药物电子天平称取5份绞股蓝种子粉末，每份5g，加入固定体积固定PH值的缓冲液，再加入0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%复合酶，在一定温度下酶解一段时间，灭酶后超声条件下提取30min，测定总皂苷含量（见表1）。
表1 加酶量对绞股蓝皂苷提取率的影响
加酶量 温度（℃） PH值 酶解时间（h） 总皂苷提取率（%）
0.2% 40 4.5 1.5 3.5
0.4% 40 4.5 1.5 5.0
0.6% 40 4.5 1.5 5.2
0.8% 40 4.5 1.5 5.3
1.0% 40 4.5 1.5 5.5
当温度、PH值、酶解时间固定时，随着加酶量的增多，皂苷的提取率也随之增加，但加酶量由0.2%至0.4%时，皂苷提取率增加比较明显，随后增长平缓，说明加酶量在0.4%时，已趋于将样品最大酶解化，考虑到成本问题，加酶量为0.4%最适宜。
3.1.2 pH值
用药物电子天平称取5份绞股蓝种子粉末，每份5g，加入固定体积pH值分别为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0的缓冲液，再加入复合酶，在一定温度下酶解一段时间，灭酶后超声条件下提取30min，测定总皂苷含量（见表2）。
目 录
1 绪 论 1
2内容与方法 2
2.1研究内容 2
2.2研究方法 2
2.2.1材 料 2
2.2.2实验仪器 2
2.3试验方法 2
2.3.1总皂苷的提取和测定 2
2.3.2提取工艺 2
2.4资料分析 3
2.5数据质量 3
3结果 4
3.1单一酶法提取 4
3.1.1 加酶量 4
3.1.2 pH值 4
3.1.3 酶解时间 5
3.1.4 酶解温度 5
3.1.5综合单因素试验 6
3.2单一超声波法提取 6
4讨论 8
参考文献 9
致 谢 11
1 绪论
绞股蓝中提取的皂苷具有很高的临床药用价值，有着“南方人参”的美誉［2］。但是目前缺少一种有效的方法能更大程度上的提高绞股蓝中总皂苷的提取率，本实验采用超声波酶法联合提取绞股蓝种子中的总皂苷，对加酶量、PH值、酶解时间和温度进行单因素实验，然后通过Boxbenhnken响应面设计，选取最优工艺。
2内容与方法
2.1研究内容
以绞股蓝种子为原料，为优化绞股蓝种子中总皂苷的提取工艺研究，选择加酶量、PH值、酶解时间和温度为自变量，再分别以功率为190w、285W的超声波细胞破碎仪处理不同时间后，测其吸光度从而筛选 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
出最佳制备工艺。
2.2研究方法
2.2.1材 料
绞股蓝种子。采摘于陕西省平利县。
2.2.2实验仪器
KHWS4数显恒温水浴锅、FRQ1002T数显小型超声波清洗机 、BDV101501822微孔板分光光度计、药物电子天平
2.3试验方法
2.3.1总皂苷的提取和测定
绞股蓝粉10g、水160ml，振荡20min后过滤，再加水120ml后振荡20min，过滤，将两次所得滤液混合，调节pH至9～10后静置，滤除沉淀，滤液备用。在设置的超声条件下提取，抽滤，浓缩，定容，测定总皂苷含量。
2.3.2提取工艺
工艺流程：将绞股蓝种子清洗后晾干，粉碎后超声处理，加入复合酶，离心取上清液，所得沉淀溶解后进行测定。
2.4资料分析
对实验所得出的结果进行整理核对，建立数据库，采用对照方法对数据库中的结果进行分析。
2.5数据质量
严格按照研究方法的要求开展实验。质量控制应贯穿在原料选取、仪器选取、数据录入和处理、检测等各个环节，使用符合标准的原料及实验器材，必须采取各种方法尽量避免选择性偏倚，对所得数据认真分析，并多次实验减少误差。
3结果
3.1单一酶法提取
绞股蓝细胞壁及细胞间质给提取绞股蓝中皂苷带来很大难度，在提取时必须克服。纤维素酶可以破坏细胞壁和细胞间质，使其阻力消失从而使皂苷溶出。其中涉及到多种因素的影响［3］。
3.1.1 加酶量
用药物电子天平称取5份绞股蓝种子粉末，每份5g，加入固定体积固定PH值的缓冲液，再加入0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%复合酶，在一定温度下酶解一段时间，灭酶后超声条件下提取30min，测定总皂苷含量（见表1）。
表1 加酶量对绞股蓝皂苷提取率的影响
加酶量 温度（℃） PH值 酶解时间（h） 总皂苷提取率（%）
0.2% 40 4.5 1.5 3.5
0.4% 40 4.5 1.5 5.0
0.6% 40 4.5 1.5 5.2
0.8% 40 4.5 1.5 5.3
1.0% 40 4.5 1.5 5.5
当温度、PH值、酶解时间固定时，随着加酶量的增多，皂苷的提取率也随之增加，但加酶量由0.2%至0.4%时，皂苷提取率增加比较明显，随后增长平缓，说明加酶量在0.4%时，已趋于将样品最大酶解化，考虑到成本问题，加酶量为0.4%最适宜。
3.1.2 pH值
用药物电子天平称取5份绞股蓝种子粉末，每份5g，加入固定体积pH值分别为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0的缓冲液，再加入复合酶，在一定温度下酶解一段时间，灭酶后超声条件下提取30min，测定总皂苷含量（见表2）。
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