正清痛宁中青藤碱的含量测定
摘 要类风湿性关节炎是一种常见的多发病。在我国各地的患者数量达到大约440万。并且这种病的典型表现轻度或者中度发热，游走性关节炎，严重患者会发生关节的炎症，致使关节出现病变，关节的僵硬、关节的变形等，更严重的患者会直接出现行动瘫痪等问题。肌肉疼痛、关节胀痛、下肢屈伸不利、麻木僵硬等都属于临床常见的范畴。现如今正清风痛宁片应用于临床,主要用于治疗类风湿性关节炎等各种风湿病以及心律失常等。正清风痛宁片，具有祛湿止痛，活血化瘀，通经活络等功效。青藤碱作为正清风痛宁中主要有效成分之一，是从青风藤里提取出来的。青藤碱具有抵抗风湿、通经活络、止痛化瘀等药理作用。本文的含量测定，采用高效液相色谱法进行，三次测定之后，分别为0.638mg?g-1、0.652mg?g-1、0.646mg?g-1。可以算出平均每片中的含量为0.645mg?g-1。中国药典2015版一部成方制剂和单单味制剂正清风痛宁中青藤碱含量不少于97.0%。本实验主要应用精密度试验，重现性实验、稳定性试验、回收率试验等方法学进行方法学的考察，实验结果表明高效液相色谱法使用灵敏、准确、快速，实验结果准确可靠，可操作性强，为青藤碱的含量测定和稳定性考察提供了依据，对于该药品的质量控制有很好的效果。
目 录
1绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2 正清风痛宁的研究意义 2
1.3 青藤碱的来源 2
1.4 青藤碱的药用价值 3
1.5 青藤碱的药理研究 3
1.5.1 抗炎抗风湿作用 3
1.5.2对心血管系统的影响 4
1.5.3对免疫系统的影响 4
1.5.4 对平滑肌的影响 4
1.5.5 镇痛镇静作用 5
1.5.6 释放组胺作用 5
1.6 青藤碱的临床研究 5
1.6.1 治疗风湿性和类风湿性关节炎 5
1.7 青藤碱含量测定研究 6
2实验部分研究 9
2.1 材料 9
2.1.1药品与试剂 9
2.1.2仪器 9
2.2 方法与结果 10
2.2.1 色谱条件 10
2.2.2 溶液制 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
备 10
2.3 标准曲线的制备 10
2.4 方法学考察 11
2.4.1 精密度试验 11
2.4.2 重现性实验 11
2.4.3 稳定性试验 11
2.4.4 回收率实验 11
2.4.5 含量测定 11
3 结果与讨论 13
参考文献 14
致 谢 17
1绪论
1.1 研究背景
痛风性关节炎是一种反复发作性的疾病，经常导致病变关节周围出现红、肿、热、痛及活动受限等严重的问题，从而影响到病患的工作和生活[1]。痛风性关节炎常会出现肢体屈伸不利、僵硬、肿大，这些在中医知识里属于痹证，病因有很多，主要的是邪气痹阻经络，气血痹阻不通，不通则痛，才会导致关节红肿热痛[2]。
类风湿性关节炎(RA)这种疾病是慢性的、炎症性的和破坏性的，它与患者免疫系统功能失调有着密切关系。它是多发病，南方大概占全国的为0.3%，北方则占0.8%，算下来全国患病的人大约有440万[3]。类风湿性关节炎症状出现是因为关节内部的滑膜出现了炎症，长时间的不愈合，才导致关节之间的滑膜增加了厚度、血管内血液的阻塞、软骨及软骨之下骨质的破坏，以至于发生关节僵硬、肿大，更严重的会出现畸形。类风湿性关节炎会缩短患者的寿命，严重的可能会导致大约1/3的患者成为残废。而国家也会为了治疗这类患者出现巨大的经济损失，还可能会丧失更多的劳动力[4]。
RA这种疾病是变态反应性的，这种变态反应同样也是风湿热症的主要表现之一，发病的时候常会出现风湿热的症状，一般多是急性的发热或者关节的胀痛，较为典型的症状会出现轻度或中度发热，关节游走性疼痛，病变部位一般是膝，踝、肩、肘、腕等关节处，疼痛时常见游走性疼痛，病变部位会出现红，肿、热、痛等症状，也有的病人会出现多个关节部位同时出现疼痛的情况，不典型的病人相对来说只有关节疼痛并无其他炎症表现。严重者会出现关节部位的炎症，促使疼痛的关节病变，出现关节僵硬、变形，从而会导致行动不便，更甚者会使患者瘫痪。急性炎症24周消退，通常不留后遗症，但会反复出现。在关节炎的急性期患者通常都会出现关节病变部位发热肿痛、心悸心慌等症状。
RA的关节外表现有皮下结节、眼干、口干及腕管综合征，而这些表现可以发生于RA的任何阶段，形式多样，常见有类风湿结节、血管炎等，发病率为75.6%[5]，由此可见，目前患风湿病的人很多，而风湿严重者会出现行动不便或者行动瘫痪这种严重的后果。
1.2 正清风痛宁的研究意义
正清风痛宁是现代制剂中的一种，其中它的有效成分是青藤碱，而青藤碱是从传统抗风湿中药材青风藤中提取出来的，临床上常用的是片剂和注射剂。本药品为肠溶薄膜衣片，剥去肠溶衣片后，显白色或类白色，味苦。经药理研究表明，这类药物可以消炎和免疫抑制类糖皮质激素，可以纠正纤维蛋白溶解功能障碍、降低凝血、改善血液流变的性质（如全血比粘度、全血还原粘度、血浆粘度等）、改善微动脉与微静脉之间的循环及抗氧化自由基[6]。同时发现它可以抑制小鼠的先天免疫、细胞介导免疫及以效应B细胞产生抗体来达到保护目的的免疫机制，也可以抑制T淋巴细胞、巨噬细胞，抑制抗体溶血素和免疫球蛋白的生成[7]，从而达到治疗效果与目的。研究还表明该药可以抑制前列腺素的合成，从而达到止痛的目的。因为导致炎症疼痛和发热的主要因素是前列腺素，并且此药的作用有抗炎止痛、活血化瘀、通经活络、改善微循环等，优点则是毒副作用小、见效快，与观察结论相符合，值得临床推广使用[8]。
正清风痛宁的主要成分是青藤碱，而它是从中草药青风藤（青风藤，味苦辛，性温，其功能为祛湿止痛，通经活络[9]）中提取出来的。因为青藤碱的药理作用有抗炎抗风湿、免疫机制、祛湿止痛、抗心律失常等，所以正清风痛宁同样具有祛湿止痛、通经活络、活血化瘀等功效。一般适用于风寒湿痹症，发病时会出现肌肉疼痛、关节酸胀、红肿、关节屈伸不利、麻木僵硬等。
目前，我国的现代科技上，有很多有效的方法可以对青藤碱进行有效成分的提取，在这次试验中我们将采用高效液相的方法对正清风痛宁的有效成分进行提取对比。对提取方法系统性的进行研究，确定工业生产中的最佳工艺提取率，便于生产数据参考。
1.3 青藤碱的来源
青藤碱为防己科植物，是青藤和毛青藤的干燥藤茎。采割时间一般在秋末冬初，通常采割完之后扎成把或切成长段，并放在外面晒干。本品外形为长圆柱形，整体看起来微弯曲，长度大约有20～70㎝或更长，直径大约长0.5～2cm。植物表面颜色绿褐色至棕褐色，有的会出现灰褐色，表面还会有细纵纹和皮孔。关节部稍微有些膨大突出，于其他植物一样会有分枝。植物本身质地轻盈，材质比较坚硬，但是质地很脆弱，容易破碎，植物截面相对光滑，颜色主要为灰黄色或淡灰棕色，表皮部分要窄一些，管状的木部呈放射状排列，里面的骨髓部呈现出淡黄白色或黄棕色。气味微小，味道偏苦涩。本品中青藤碱（C19H23NO4）含量不能少于0.50%。来自常春藤植物根部和茎部的提取物、美国藜科植物叶子等。针状结晶是青藤碱的性质，它是属于苯中的结晶。熔点一般在161℃，熔化以后，熔点可以上升到182℃。旋光度在71(c=2.1，乙醇)。在生活中，可以看见它通常易溶于乙醇、氯仿、丙酮、和稀碱等溶剂，也可以微溶于水、乙醚和苯等溶剂。它的盐酸盐，由水或者乙醇来结晶，在278℃的时候进行分解。而它的氢碘酸盐，结晶形成于水中，在272℃的时候出现分解现象。还有苦味酸盐，它的颜色为黄色，也是针晶，在176℃的时候进行分解。
目 录
1绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2 正清风痛宁的研究意义 2
1.3 青藤碱的来源 2
1.4 青藤碱的药用价值 3
1.5 青藤碱的药理研究 3
1.5.1 抗炎抗风湿作用 3
1.5.2对心血管系统的影响 4
1.5.3对免疫系统的影响 4
1.5.4 对平滑肌的影响 4
1.5.5 镇痛镇静作用 5
1.5.6 释放组胺作用 5
1.6 青藤碱的临床研究 5
1.6.1 治疗风湿性和类风湿性关节炎 5
1.7 青藤碱含量测定研究 6
2实验部分研究 9
2.1 材料 9
2.1.1药品与试剂 9
2.1.2仪器 9
2.2 方法与结果 10
2.2.1 色谱条件 10
2.2.2 溶液制 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
备 10
2.3 标准曲线的制备 10
2.4 方法学考察 11
2.4.1 精密度试验 11
2.4.2 重现性实验 11
2.4.3 稳定性试验 11
2.4.4 回收率实验 11
2.4.5 含量测定 11
3 结果与讨论 13
参考文献 14
致 谢 17
1绪论
1.1 研究背景
痛风性关节炎是一种反复发作性的疾病，经常导致病变关节周围出现红、肿、热、痛及活动受限等严重的问题，从而影响到病患的工作和生活[1]。痛风性关节炎常会出现肢体屈伸不利、僵硬、肿大，这些在中医知识里属于痹证，病因有很多，主要的是邪气痹阻经络，气血痹阻不通，不通则痛，才会导致关节红肿热痛[2]。
类风湿性关节炎(RA)这种疾病是慢性的、炎症性的和破坏性的，它与患者免疫系统功能失调有着密切关系。它是多发病，南方大概占全国的为0.3%，北方则占0.8%，算下来全国患病的人大约有440万[3]。类风湿性关节炎症状出现是因为关节内部的滑膜出现了炎症，长时间的不愈合，才导致关节之间的滑膜增加了厚度、血管内血液的阻塞、软骨及软骨之下骨质的破坏，以至于发生关节僵硬、肿大，更严重的会出现畸形。类风湿性关节炎会缩短患者的寿命，严重的可能会导致大约1/3的患者成为残废。而国家也会为了治疗这类患者出现巨大的经济损失，还可能会丧失更多的劳动力[4]。
RA这种疾病是变态反应性的，这种变态反应同样也是风湿热症的主要表现之一，发病的时候常会出现风湿热的症状，一般多是急性的发热或者关节的胀痛，较为典型的症状会出现轻度或中度发热，关节游走性疼痛，病变部位一般是膝，踝、肩、肘、腕等关节处，疼痛时常见游走性疼痛，病变部位会出现红，肿、热、痛等症状，也有的病人会出现多个关节部位同时出现疼痛的情况，不典型的病人相对来说只有关节疼痛并无其他炎症表现。严重者会出现关节部位的炎症，促使疼痛的关节病变，出现关节僵硬、变形，从而会导致行动不便，更甚者会使患者瘫痪。急性炎症24周消退，通常不留后遗症，但会反复出现。在关节炎的急性期患者通常都会出现关节病变部位发热肿痛、心悸心慌等症状。
RA的关节外表现有皮下结节、眼干、口干及腕管综合征，而这些表现可以发生于RA的任何阶段，形式多样，常见有类风湿结节、血管炎等，发病率为75.6%[5]，由此可见，目前患风湿病的人很多，而风湿严重者会出现行动不便或者行动瘫痪这种严重的后果。
1.2 正清风痛宁的研究意义
正清风痛宁是现代制剂中的一种，其中它的有效成分是青藤碱，而青藤碱是从传统抗风湿中药材青风藤中提取出来的，临床上常用的是片剂和注射剂。本药品为肠溶薄膜衣片，剥去肠溶衣片后，显白色或类白色，味苦。经药理研究表明，这类药物可以消炎和免疫抑制类糖皮质激素，可以纠正纤维蛋白溶解功能障碍、降低凝血、改善血液流变的性质（如全血比粘度、全血还原粘度、血浆粘度等）、改善微动脉与微静脉之间的循环及抗氧化自由基[6]。同时发现它可以抑制小鼠的先天免疫、细胞介导免疫及以效应B细胞产生抗体来达到保护目的的免疫机制，也可以抑制T淋巴细胞、巨噬细胞，抑制抗体溶血素和免疫球蛋白的生成[7]，从而达到治疗效果与目的。研究还表明该药可以抑制前列腺素的合成，从而达到止痛的目的。因为导致炎症疼痛和发热的主要因素是前列腺素，并且此药的作用有抗炎止痛、活血化瘀、通经活络、改善微循环等，优点则是毒副作用小、见效快，与观察结论相符合，值得临床推广使用[8]。
正清风痛宁的主要成分是青藤碱，而它是从中草药青风藤（青风藤，味苦辛，性温，其功能为祛湿止痛，通经活络[9]）中提取出来的。因为青藤碱的药理作用有抗炎抗风湿、免疫机制、祛湿止痛、抗心律失常等，所以正清风痛宁同样具有祛湿止痛、通经活络、活血化瘀等功效。一般适用于风寒湿痹症，发病时会出现肌肉疼痛、关节酸胀、红肿、关节屈伸不利、麻木僵硬等。
目前，我国的现代科技上，有很多有效的方法可以对青藤碱进行有效成分的提取，在这次试验中我们将采用高效液相的方法对正清风痛宁的有效成分进行提取对比。对提取方法系统性的进行研究，确定工业生产中的最佳工艺提取率，便于生产数据参考。
1.3 青藤碱的来源
青藤碱为防己科植物，是青藤和毛青藤的干燥藤茎。采割时间一般在秋末冬初，通常采割完之后扎成把或切成长段，并放在外面晒干。本品外形为长圆柱形，整体看起来微弯曲，长度大约有20～70㎝或更长，直径大约长0.5～2cm。植物表面颜色绿褐色至棕褐色，有的会出现灰褐色，表面还会有细纵纹和皮孔。关节部稍微有些膨大突出，于其他植物一样会有分枝。植物本身质地轻盈，材质比较坚硬，但是质地很脆弱，容易破碎，植物截面相对光滑，颜色主要为灰黄色或淡灰棕色，表皮部分要窄一些，管状的木部呈放射状排列，里面的骨髓部呈现出淡黄白色或黄棕色。气味微小，味道偏苦涩。本品中青藤碱（C19H23NO4）含量不能少于0.50%。来自常春藤植物根部和茎部的提取物、美国藜科植物叶子等。针状结晶是青藤碱的性质，它是属于苯中的结晶。熔点一般在161℃，熔化以后，熔点可以上升到182℃。旋光度在71(c=2.1，乙醇)。在生活中，可以看见它通常易溶于乙醇、氯仿、丙酮、和稀碱等溶剂，也可以微溶于水、乙醚和苯等溶剂。它的盐酸盐，由水或者乙醇来结晶，在278℃的时候进行分解。而它的氢碘酸盐，结晶形成于水中，在272℃的时候出现分解现象。还有苦味酸盐，它的颜色为黄色，也是针晶，在176℃的时候进行分解。
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