d101型大孔树脂分离纯化沙苑子总黄酮工艺研究
沙苑子源于豆科植物扁茎黄芪AstragaluscomplanatusR.Brown.的成熟种籽。拥有补肾助阳、固精和养肝等一系类的功效。该药材主要含有氨基酸、蛋白质类、酚类、鞣质类、甾醇类、三贴皂苷和生物碱等黄酮类的有效成分。为此，本文研究并讨论了D101型大孔吸附树脂动态吸附分离和纯化总黄酮的最为合适的工艺。并且给沙苑子总黄酮化合物的分离纯化提供一定理论依据。本实验是运用紫外分光光度计的方法测定黄酮的浓度，以黄酮的纯度，收率，洗脱率，损失率为指标，测量D101型大孔树脂分离纯化沙苑子总黄酮化合物工艺中上样液浓度、上样流速以及样液PH的影响。使用D101型大孔树脂分离纯化总黄酮类化合物的工艺，得到的最合适的吸附条件的数据为:上样浓度为1.93mg/mL、上样流速1.5mL/min和样液pH6;运用D101型树脂分离和纯化沙苑子总黄酮类化合物是可使用的，制纯效果良好并可用于大批量生产。
Key words: Total Flavonoids from Astragalus and its macroporous resin 目录
1.1沙苑子的研究概况 1
1.1.1沙苑子简介 1
1.1.2沙苑子的药理活性 1
1,1,3沙苑子化学成分的研究 1
1.2总黄酮的提取分离方法 2
1.2.1总黄酮的提取方法 2
1.2.2总黄酮的分离纯化方法 3
2沙苑子总黄酮的分离工艺优化 5
2.1实验材料与仪器 5
2.1.1实验材料和试剂 5
2.1.2仪器 5
2.2方法 5
2.2.1黄酮提取工艺及含量测定 5
2.2.2黄酮的提取及含量测定 6
2.2.3树脂的预处 6
2.2.4D101型大孔树脂的动态吸附 6
2.2.5D101大孔树脂的动态解析 7
3结果与分析 8
3.1D101树脂对沙苑子总黄酮的动态吸附 8
3.2D101型树脂的动态解析效果 11
参考文献 17
致谢 19
1绪论
1.1沙苑子的研究概况< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
br /> 1.1.1沙苑子简介
沙苑子(Astraglicomplanatisemen)具有别名称为沙苑蒺藜、蔓黄芪、夏黄草、沙蒺藜。是豆科植物扁茎黄芪成熟的干燥种仁。主要产自我国的陕西、河北等地。在秋末或冬初果实成熟但还为开裂时而进行采收该种植物，经晒干以后，分离出种子，去除其中豆皮等杂质后，再一次晾干。沙苑子的外表形态略呈肾形，体型稍扁，长度大约在2～2.5mm之间，宽度大约在1.5～2mm之间，厚度大约在1mm左右。表面呈光滑稍微反光，颜色是以褐绿色或着灰褐色为主，在种籽边缘的一侧出处具有类圆形的种脐。沙苑子种籽质地很坚硬，不易被其他外力破碎。子叶有2，所呈现为淡黄色，胚根弯曲，长度大约1mm左右。嗅闻之没有臭味，味淡，用牙齿咀嚼有豆腥的气味。其中以种子颗粒饱满质大并且颜色以绿褐着为道地药材[2]。
1.1.2沙苑子的药理活性
沙苑子药材的性味甘、微温。具有有补肾固精、清肝明目的功效，主要治疗腰膝酸痛、遗精早泄、白带、神经衰弱和视力减退、糖尿病等有关疾病[3]。现在的药理研究发现，沙苑子有调节机体免疫功能、抗衰老、抗氧化功能、降血糖、降血脂、降血压、护肝等一系列的功效。沙苑子还具有增强机体的非特异性免疫功能；抑制ADP和胶原诱导的大鼠血小板聚集；降低高血脂大鼠血清TC,TG和LDLC,升高LDLC;以及保肝，抗肝纤维化，抗癌，抗疲劳，延缓衰老，抗辐射等作用。沙苑子中生理活性的主要成分为黄酮类的化合物。近几年来的研究所表明，沙苑子黄酮类成分有明显的降脂、保肝、降压等作用[45]。
1,1,3沙苑子化学成分的研究
药材沙苑子主要拥有氨基酸类、多肽类、蛋白质类和黄酮类等很多有效活性的化学成分。研究发现沙苑子植物中含量最高的一类化合物是黄酮类化合物。沙苑子是可以补益肝肾的传统天然的药物植物，其中所拥有的甾醇等药理活性的成分，可以抗肝损伤、调节血脂、降低血液的流动压力、改善血液流的指标、抑制血液中血小板聚集能力、增强身体机体的免疫功能、抗肿瘤以及镇痛等一系列的作用。
沙苑子黄酮类是在沙苑子中分得沙苑子甙、芒柄花甙、沙苑子新甙、沙苑子杨梅甙、鼠李柠檬素3OβD葡萄糖甙、山奈素3OL阿拉伯吡喃糖甙、毛蕊异黄酮7O葡萄糖甙。同时它还具有3O吡喃葡萄糖基4O(3O氢红花菜豆酰βD吡喃葡萄糖基)、单体鼠李柠檬素3O[SO对香豆酰βD呋喃芹菜糖基(1→2)βD吡喃葡萄糖基]、鼠李柠檬素、土麻甙、杨梅素3OβD葡萄糖甙、异槲皮甙和鼠李柠檬素[6]等等成分。
1.2总黄酮的提取分离方法
1.2.1总黄酮的提取方法
随着我国社会科技的不断发展和理论的进步，生物活性成分的提取方法和提取技术也在不断改进和被创新出来。目前，在我国植物中黄酮类成分的提取方法也从在经典的浸提法和回流提取法发展到现代高新的超声提取法、微波辅助萃取法以及超临界流体萃取等一系列比较先进的提取方法。黄酮类化合物易溶于有机溶剂而难溶于水，故大多经常选择用乙醇、甲醇或氯仿等有机溶剂进行一定的提取。从提取的效果、溶剂的耗损以及实验地的安全性等各方面全面进行考虑，大多会以乙醇作为提取溶剂较好。
（1）传统提取法
浸提法和回流法[7]是根据溶剂间相似相溶的原理进行提取，用合适的有机溶剂先进行充分浸渍药材，由于植物细胞内外会存在浓度差，并在合适的温度范围以内，细胞内的活性成分就会从细胞内溶出从而达到有效成分提取的目的。传统的方法操作比较简单容易操作，但是该提取方法耗时长比较低，提取效率比较低下，需要消耗大量的有机溶剂而且易造成污染，且材料受加热时间比较久，有效成分的结构会受热而遭到破坏。
（2）超声提取方法
超声提取方法就是运用超声波辐射压强所产生的空化作用、机械能效应力和热效应力来使生物活性成分快速的释放、溶解和扩散出来。它的机理是运用超声波产生的剧烈振动，粉碎作用把植物中有效的活性成分快速的溶解到溶剂中去。这种方法使用时间相对较短且得率较高、副产物少且温度低，物质的结构通常不易被破坏[8]，能达到比传统法更理想的效果，所以，近几年来一直广泛用于植物中有效活性成分的提取。
（3）微波辅助萃取法
微波辅助萃取法（MAE）是一种具有发展潜力的新型的提取技术，其原理是利用其产生的高频电磁波可以快速到达细胞内部使植物的细胞壁破裂，有效成分溶解流出的一种全新技术。它是近几年来才发展起来的比较新型的一种提取技术，具有选择性高、生物活性成分不易被破坏、使用时间短及排污量比较少等一系列的优点[9]。它是目前天然的有效产物提取的创新技术，因而，广泛的使用于食品或天然产物等相关领域。
Key words: Total Flavonoids from Astragalus and its macroporous resin 目录
1.1沙苑子的研究概况 1
1.1.1沙苑子简介 1
1.1.2沙苑子的药理活性 1
1,1,3沙苑子化学成分的研究 1
1.2总黄酮的提取分离方法 2
1.2.1总黄酮的提取方法 2
1.2.2总黄酮的分离纯化方法 3
2沙苑子总黄酮的分离工艺优化 5
2.1实验材料与仪器 5
2.1.1实验材料和试剂 5
2.1.2仪器 5
2.2方法 5
2.2.1黄酮提取工艺及含量测定 5
2.2.2黄酮的提取及含量测定 6
2.2.3树脂的预处 6
2.2.4D101型大孔树脂的动态吸附 6
2.2.5D101大孔树脂的动态解析 7
3结果与分析 8
3.1D101树脂对沙苑子总黄酮的动态吸附 8
3.2D101型树脂的动态解析效果 11
参考文献 17
致谢 19
1绪论
1.1沙苑子的研究概况< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
br /> 1.1.1沙苑子简介
沙苑子(Astraglicomplanatisemen)具有别名称为沙苑蒺藜、蔓黄芪、夏黄草、沙蒺藜。是豆科植物扁茎黄芪成熟的干燥种仁。主要产自我国的陕西、河北等地。在秋末或冬初果实成熟但还为开裂时而进行采收该种植物，经晒干以后，分离出种子，去除其中豆皮等杂质后，再一次晾干。沙苑子的外表形态略呈肾形，体型稍扁，长度大约在2～2.5mm之间，宽度大约在1.5～2mm之间，厚度大约在1mm左右。表面呈光滑稍微反光，颜色是以褐绿色或着灰褐色为主，在种籽边缘的一侧出处具有类圆形的种脐。沙苑子种籽质地很坚硬，不易被其他外力破碎。子叶有2，所呈现为淡黄色，胚根弯曲，长度大约1mm左右。嗅闻之没有臭味，味淡，用牙齿咀嚼有豆腥的气味。其中以种子颗粒饱满质大并且颜色以绿褐着为道地药材[2]。
1.1.2沙苑子的药理活性
沙苑子药材的性味甘、微温。具有有补肾固精、清肝明目的功效，主要治疗腰膝酸痛、遗精早泄、白带、神经衰弱和视力减退、糖尿病等有关疾病[3]。现在的药理研究发现，沙苑子有调节机体免疫功能、抗衰老、抗氧化功能、降血糖、降血脂、降血压、护肝等一系列的功效。沙苑子还具有增强机体的非特异性免疫功能；抑制ADP和胶原诱导的大鼠血小板聚集；降低高血脂大鼠血清TC,TG和LDLC,升高LDLC;以及保肝，抗肝纤维化，抗癌，抗疲劳，延缓衰老，抗辐射等作用。沙苑子中生理活性的主要成分为黄酮类的化合物。近几年来的研究所表明，沙苑子黄酮类成分有明显的降脂、保肝、降压等作用[45]。
1,1,3沙苑子化学成分的研究
药材沙苑子主要拥有氨基酸类、多肽类、蛋白质类和黄酮类等很多有效活性的化学成分。研究发现沙苑子植物中含量最高的一类化合物是黄酮类化合物。沙苑子是可以补益肝肾的传统天然的药物植物，其中所拥有的甾醇等药理活性的成分，可以抗肝损伤、调节血脂、降低血液的流动压力、改善血液流的指标、抑制血液中血小板聚集能力、增强身体机体的免疫功能、抗肿瘤以及镇痛等一系列的作用。
沙苑子黄酮类是在沙苑子中分得沙苑子甙、芒柄花甙、沙苑子新甙、沙苑子杨梅甙、鼠李柠檬素3OβD葡萄糖甙、山奈素3OL阿拉伯吡喃糖甙、毛蕊异黄酮7O葡萄糖甙。同时它还具有3O吡喃葡萄糖基4O(3O氢红花菜豆酰βD吡喃葡萄糖基)、单体鼠李柠檬素3O[SO对香豆酰βD呋喃芹菜糖基(1→2)βD吡喃葡萄糖基]、鼠李柠檬素、土麻甙、杨梅素3OβD葡萄糖甙、异槲皮甙和鼠李柠檬素[6]等等成分。
1.2总黄酮的提取分离方法
1.2.1总黄酮的提取方法
随着我国社会科技的不断发展和理论的进步，生物活性成分的提取方法和提取技术也在不断改进和被创新出来。目前，在我国植物中黄酮类成分的提取方法也从在经典的浸提法和回流提取法发展到现代高新的超声提取法、微波辅助萃取法以及超临界流体萃取等一系列比较先进的提取方法。黄酮类化合物易溶于有机溶剂而难溶于水，故大多经常选择用乙醇、甲醇或氯仿等有机溶剂进行一定的提取。从提取的效果、溶剂的耗损以及实验地的安全性等各方面全面进行考虑，大多会以乙醇作为提取溶剂较好。
（1）传统提取法
浸提法和回流法[7]是根据溶剂间相似相溶的原理进行提取，用合适的有机溶剂先进行充分浸渍药材，由于植物细胞内外会存在浓度差，并在合适的温度范围以内，细胞内的活性成分就会从细胞内溶出从而达到有效成分提取的目的。传统的方法操作比较简单容易操作，但是该提取方法耗时长比较低，提取效率比较低下，需要消耗大量的有机溶剂而且易造成污染，且材料受加热时间比较久，有效成分的结构会受热而遭到破坏。
（2）超声提取方法
超声提取方法就是运用超声波辐射压强所产生的空化作用、机械能效应力和热效应力来使生物活性成分快速的释放、溶解和扩散出来。它的机理是运用超声波产生的剧烈振动，粉碎作用把植物中有效的活性成分快速的溶解到溶剂中去。这种方法使用时间相对较短且得率较高、副产物少且温度低，物质的结构通常不易被破坏[8]，能达到比传统法更理想的效果，所以，近几年来一直广泛用于植物中有效活性成分的提取。
（3）微波辅助萃取法
微波辅助萃取法（MAE）是一种具有发展潜力的新型的提取技术，其原理是利用其产生的高频电磁波可以快速到达细胞内部使植物的细胞壁破裂，有效成分溶解流出的一种全新技术。它是近几年来才发展起来的比较新型的一种提取技术，具有选择性高、生物活性成分不易被破坏、使用时间短及排污量比较少等一系列的优点[9]。它是目前天然的有效产物提取的创新技术，因而，广泛的使用于食品或天然产物等相关领域。
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