鸡血藤总黄酮的提取工艺优化研究
摘 要 本次实验的主要目的是对鸡血藤总黄酮的提取工艺进行了优化，并且找到提取鸡血藤中总黄酮的最佳提取条件。采用单因素法对提取温度、时间、料液比和乙醇浓度这四个因素在不同设置范围内进行研究，获得这四个因素在设置范围内对鸡血藤中总黄酮提取率的影响。其中，影响提取率的最重要因素是提取时间，其次是乙醇浓度、提取温度和固液比。通过对上述单因素实验结果的分析，得到了从鸡血藤中提取总黄酮的最佳提取条件提取时间为90分钟，乙醇浓度为50%（v/v），提取温度为85℃，超声功率100 W。得到了最佳提取条件，为鸡血藤的进一步开发利用提供了一定实验基础。
目录
1 绪论 1
1.1 鸡血藤的化学成分 1
1.2 鸡血藤的药理作用 1
1.2.1 对造血功能的影响 1
1.2.2 对心血管系统的影响 2
1.2.3 癌细胞抵抗作用 2
1.2.4 对肝损伤的改善 2
1.2.5 镇静催眠功效 2
1.2.6 对辐射的抵抗作用 3
1.2.7 调脂作用 3
1.3 鸡血藤常用的提取方法 3
1.3.1 热水提取法 3
1.3.2 微波辅助提取法 3
1.3.3 双水相提取法 4
1.3.4 溶剂萃取法 4
1.4 鸡血藤的发展前景 4
2 实验部分 5
2.1 实验药材与试剂 5
2.2 实验仪器与设备 5
2.3 实验方法 5
2.3.1指标测定方法的选择 5
2.3.2 对照品溶液制备和标准曲线绘制 6
2.3.3 样品溶液的配置 7
2.3.4 样品总黄酮的含量测定 7
2.3.5 鸡血藤总黄酮提取工艺研究 7
3 结论 12
参考文献 13
致 谢 16
1 绪论
鸡血藤是一种具有显著疗效的化瘀活血作业的传统中医药材，主要出产地为江西，福建，两广地区等南方地区。鸡血藤具有活血化瘀、止痛、打通脉络、舒经调经的作用[12]。鸡血藤具有一定 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
的抗心律失常的功效，还可以降低血压、调理心血管健康，阻碍细菌生长，强化免疫力， 消灭病毒入侵及防止肿瘤形成等多种作用[35]。黄酮、有机酸、蒽醌、三菇等都是鸡血藤中的生物活性成分[6]。很多研究者使用各式方法对鸡血藤中最有价值和意义的总黄酮进行提取和分析，目前还没有比较高效、合理、耗能不高、提取率高的提取方法[7]。所以，为改善鸡血藤中总黄酮的提取率，使得鸡血藤发挥最大作用，本试验以总黄酮提取率作为观察指标，我们采用均匀设计法提取鸡血藤总黄酮，我们筛选各种可能会影响提取结果的试验因素[8]。找出最理想的提取条件，为工业应用和实验应用提供了依据。
1.1 鸡血藤的化学成分
鸡血藤中发现的有效化合物类型是多种多样的，其中黄酮类的研究应用价值最高。黄酮类化学物的功效众多，在疾病的防治上具有广泛的作用，包括心血管系统疾病的防御，加强免疫力，抗肿瘤，抗炎、镇痛等等[9]。
1.2 鸡血藤的药理作用
1.2.1 对造血功能的影响
鸡血藤具有造血功能，其中主要的药效成分为儿茶素类和黄酮类，影响造血功能的机制主要体现在如下几个方面：1）促进造血干细胞、造血祖细胞的增殖，其中儿茶素的促进增殖活力较强；2）参与免疫细胞、炎症因子的增殖，其中儿茶素可促进白介素6（IL6），GMCSF等的增殖分化；3）改善骨髓细胞的增殖状态，研究发现鸡血藤中儿茶素类成分可以改善小鼠的骨髓细胞增殖状态，维持其细胞活力[10]；4）促进细胞因子白介素3（IL3）的分泌及调节促红细胞生成素水平，研究表明鸡血藤中黄酮类成分可以促进血虚证大鼠的造血功能就是通过此机制发挥疗效，其中IL3能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能，故认为鸡血藤中的黄酮类成分也参与了炎症反应调节过程 [11]。5）促进白细胞的增殖分化，有研究人员用白细胞低下的大鼠模型进行探究，结果发现鸡血藤中的黄酮类成分可以促进白细胞的增殖分化[12]。
1.2.2 对心血管系统的影响
王秀华等通过研究鸡血藤对颈动、静脉旁路血栓形成的影响，通过测定血小板聚集率对其药效进行评价，实验结果显示，鸡血藤具有明显的活血化瘀作用，主要表现在其可以降低血小板聚集率，减轻血栓湿重，从血液凝固的机理层面证实了其具有保护心血管系统的功效 [13]。同时鸡血藤中黄酮类物质的保护心血管功能同样被探究，李丽等发现其对左冠状动脉前降支结扎急性心肌缺血大鼠的心脏功能具有保护作用，主要体现在心脏的收缩性和心脏组织的受损情况均得到改善 [14]。
1.2.3 癌细胞抵抗作用
研究人员通过研究发现鸡血藤对癌细胞具有一定的抵抗作用，主要作用方式为促进癌细胞的凋亡。其在U937 细胞中表现出较强的抑制作用。其发挥肿瘤细胞抑制作用的机制主要表现在：1）促进凋亡小体的产生；2）促进细胞凋亡，增加凋亡细胞的数量；3）促进细胞凋亡中的限速酶caspase3的活性，参与细胞凋亡。有研究表明鸡血藤提取物中黄酮类成分也具有抗肿瘤的作用，目前已经被证实的是其可有效抑制人肺癌A529和大肠癌HT19细胞的活性，且与二氯甲烷萃取物相比，黄酮类成分在抑制肿瘤细胞活性时不妨碍骨髓的功能，且会达到促进红细胞生殖分化的有益效果 [15]。从剂量上看，鸡血藤提取物在给药6～70μgml1 时就具有明显的细胞抑制作用。在体实验结果显示，鸡血藤提取物可明显抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长，并且可明显增加腹水瘤小鼠的存活率 [16]。
1.2.4 对肝损伤的改善
有学者研究发现鸡血藤中的黄酮类成分可显著保护小鼠的肝脏免受损伤，其作用机制主要是与小鼠体内氧化应激及能量代谢有关 [17]。
1.2.5 镇静催眠功效
研究人员将鸡血藤原料粉碎制成粗粉备用，用电子天平精密称取300 g，加蒸馏水煎煮120分钟（水粉比率为5:1），去除液体；药渣加蒸馏水煎煮90分钟后过滤；药渣加蒸馏水煎60分钟，过滤；合并前面两种过滤液，浓缩至515 ml。给药后，观察小鼠自主活动次数，分析对比后获得结果：鸡血藤水提物具有镇静和催眠的作用[18]。
目录
1 绪论 1
1.1 鸡血藤的化学成分 1
1.2 鸡血藤的药理作用 1
1.2.1 对造血功能的影响 1
1.2.2 对心血管系统的影响 2
1.2.3 癌细胞抵抗作用 2
1.2.4 对肝损伤的改善 2
1.2.5 镇静催眠功效 2
1.2.6 对辐射的抵抗作用 3
1.2.7 调脂作用 3
1.3 鸡血藤常用的提取方法 3
1.3.1 热水提取法 3
1.3.2 微波辅助提取法 3
1.3.3 双水相提取法 4
1.3.4 溶剂萃取法 4
1.4 鸡血藤的发展前景 4
2 实验部分 5
2.1 实验药材与试剂 5
2.2 实验仪器与设备 5
2.3 实验方法 5
2.3.1指标测定方法的选择 5
2.3.2 对照品溶液制备和标准曲线绘制 6
2.3.3 样品溶液的配置 7
2.3.4 样品总黄酮的含量测定 7
2.3.5 鸡血藤总黄酮提取工艺研究 7
3 结论 12
参考文献 13
致 谢 16
1 绪论
鸡血藤是一种具有显著疗效的化瘀活血作业的传统中医药材，主要出产地为江西，福建，两广地区等南方地区。鸡血藤具有活血化瘀、止痛、打通脉络、舒经调经的作用[12]。鸡血藤具有一定 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
的抗心律失常的功效，还可以降低血压、调理心血管健康，阻碍细菌生长，强化免疫力， 消灭病毒入侵及防止肿瘤形成等多种作用[35]。黄酮、有机酸、蒽醌、三菇等都是鸡血藤中的生物活性成分[6]。很多研究者使用各式方法对鸡血藤中最有价值和意义的总黄酮进行提取和分析，目前还没有比较高效、合理、耗能不高、提取率高的提取方法[7]。所以，为改善鸡血藤中总黄酮的提取率，使得鸡血藤发挥最大作用，本试验以总黄酮提取率作为观察指标，我们采用均匀设计法提取鸡血藤总黄酮，我们筛选各种可能会影响提取结果的试验因素[8]。找出最理想的提取条件，为工业应用和实验应用提供了依据。
1.1 鸡血藤的化学成分
鸡血藤中发现的有效化合物类型是多种多样的，其中黄酮类的研究应用价值最高。黄酮类化学物的功效众多，在疾病的防治上具有广泛的作用，包括心血管系统疾病的防御，加强免疫力，抗肿瘤，抗炎、镇痛等等[9]。
1.2 鸡血藤的药理作用
1.2.1 对造血功能的影响
鸡血藤具有造血功能，其中主要的药效成分为儿茶素类和黄酮类，影响造血功能的机制主要体现在如下几个方面：1）促进造血干细胞、造血祖细胞的增殖，其中儿茶素的促进增殖活力较强；2）参与免疫细胞、炎症因子的增殖，其中儿茶素可促进白介素6（IL6），GMCSF等的增殖分化；3）改善骨髓细胞的增殖状态，研究发现鸡血藤中儿茶素类成分可以改善小鼠的骨髓细胞增殖状态，维持其细胞活力[10]；4）促进细胞因子白介素3（IL3）的分泌及调节促红细胞生成素水平，研究表明鸡血藤中黄酮类成分可以促进血虚证大鼠的造血功能就是通过此机制发挥疗效，其中IL3能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能，故认为鸡血藤中的黄酮类成分也参与了炎症反应调节过程 [11]。5）促进白细胞的增殖分化，有研究人员用白细胞低下的大鼠模型进行探究，结果发现鸡血藤中的黄酮类成分可以促进白细胞的增殖分化[12]。
1.2.2 对心血管系统的影响
王秀华等通过研究鸡血藤对颈动、静脉旁路血栓形成的影响，通过测定血小板聚集率对其药效进行评价，实验结果显示，鸡血藤具有明显的活血化瘀作用，主要表现在其可以降低血小板聚集率，减轻血栓湿重，从血液凝固的机理层面证实了其具有保护心血管系统的功效 [13]。同时鸡血藤中黄酮类物质的保护心血管功能同样被探究，李丽等发现其对左冠状动脉前降支结扎急性心肌缺血大鼠的心脏功能具有保护作用，主要体现在心脏的收缩性和心脏组织的受损情况均得到改善 [14]。
1.2.3 癌细胞抵抗作用
研究人员通过研究发现鸡血藤对癌细胞具有一定的抵抗作用，主要作用方式为促进癌细胞的凋亡。其在U937 细胞中表现出较强的抑制作用。其发挥肿瘤细胞抑制作用的机制主要表现在：1）促进凋亡小体的产生；2）促进细胞凋亡，增加凋亡细胞的数量；3）促进细胞凋亡中的限速酶caspase3的活性，参与细胞凋亡。有研究表明鸡血藤提取物中黄酮类成分也具有抗肿瘤的作用，目前已经被证实的是其可有效抑制人肺癌A529和大肠癌HT19细胞的活性，且与二氯甲烷萃取物相比，黄酮类成分在抑制肿瘤细胞活性时不妨碍骨髓的功能，且会达到促进红细胞生殖分化的有益效果 [15]。从剂量上看，鸡血藤提取物在给药6～70μgml1 时就具有明显的细胞抑制作用。在体实验结果显示，鸡血藤提取物可明显抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长，并且可明显增加腹水瘤小鼠的存活率 [16]。
1.2.4 对肝损伤的改善
有学者研究发现鸡血藤中的黄酮类成分可显著保护小鼠的肝脏免受损伤，其作用机制主要是与小鼠体内氧化应激及能量代谢有关 [17]。
1.2.5 镇静催眠功效
研究人员将鸡血藤原料粉碎制成粗粉备用，用电子天平精密称取300 g，加蒸馏水煎煮120分钟（水粉比率为5:1），去除液体；药渣加蒸馏水煎煮90分钟后过滤；药渣加蒸馏水煎60分钟，过滤；合并前面两种过滤液，浓缩至515 ml。给药后，观察小鼠自主活动次数，分析对比后获得结果：鸡血藤水提物具有镇静和催眠的作用[18]。
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