超声波酶法联合提取绞股蓝种子中总黄酮的工艺研究
摘 要[目的]为了能够使得绞股蓝种子中总黄酮的提取工艺得到改善和优化，从而能够从其中获得更多的总黄酮。[方法]本研究通过单因素试验方法来研究温度、酶解时间、PH及加酶量等单一因素对超声波-酶法组合提取绞股蓝中总黄酮得率的影响。单一因素的试验结果表明，采用不同的试验因素和试验水平，以总黄酮的得率作为响应指标，利用Box—Behnken响应面优化法，以酶解时间、温度、PH及加酶量为因素进行优化，得出最佳实验条件和二次的响应面模型。[结果]绞股蓝中提取总黄酮的最适宜工艺条件分别为温度为44.8 ℃，酶解时间为1.52 h，加酶量为0.78%，PH为5.52。以此工艺条件提取，绞股蓝中总黄酮的提得率可达到最大值，且回归模型拟合度很好，这就另一方面表明该提取工艺的可行性。
目 录
1 绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2 研究目的及意义 1
1.3 研究进展 2
1.4 主要研究内容 3
2 相关概念综述 4
2.1 绞股蓝的化学成分 4
2.1.1 皂苷类 4
2.1.2 黄酮类 4
2.1.3 多糖 4
2.2 绞股蓝的药理作用 5
2.2.1 降血脂 5
2.2.2 增强免疫力 5
2.2.3 抗衰老作用 5
2.2.4 心理健康作用 5
2.3 响应面分析法 5
3 实验内容 7
3.1 实验器材 7
3.1.1 实验药材和试剂 7
3.1.2 实验器材 7
3.2 含量测定方法 7
3.2.1 样品的预处理 7
3.2.2 对照品溶液的制备 7
3.2.3 供试品溶液的制备 7
3.2.4 标准曲线的制备 8
3.2.5 样品总黄酮的测定 8
3.3 单因素实验 8
3.3.1 加酶量对总黄酮得率的影响 8
3.3.2 pH值对总黄酮得率的影响 9
3.3.3 酶解时间对总黄酮得率的影响 10
3.3.4 温度对总黄酮得率 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
的影响 11
3.4 响应曲面实验 12
3.4.1 实验设计 12
3.4.2 数学模型的建立及显著性的检验结果 13
3.4.3 交互作用的分析和优化 15
3.4.4 回归模型验证 17
4 结果与讨论 19
4.1 标准曲线的绘制 19
4.2 单因素对总黄酮得率的结果分析 19
4.3 响应曲面法优化实验结果分析 20
5 结论 21
致谢 22
参考文献 23
绪论
研究背景
绞股蓝的另一个名称为七叶胆，是一种可以攀附于其他物体上向上生长的植物，属葫芦科，其根茎较细、具有分支结构且有棱柱状突起，一般为无毛或者疏被短柔毛，目前主要生长在陕南以及长江以南地区。绞股蓝味道较苦，药性较寒，对于清热解毒，缓解咳嗽，气滋阴补，减少炎症反应，减轻咳嗽、抗老化、慢性支气管炎，咳嗽，肾虚等症状均有明显的药物作用。根据现代药理学，绞股蓝可有效缓解三高（血糖、血脂、血压），提升免疫力，也可抗癌、抗衰老、保护肝脏。绞股蓝之所以能够用于医药领域，这是因为其具有像如绞股蓝糖甙类、黄酮、水溶性化合物类，维生素类，氨基酸类，矿物质等，微量元素类等活性成分[1]。
绞股蓝的主要活性成分为皂苷和黄酮类物质，其中，皂苷具有与人参皂苷较为相似的结构，也被称为南方人参。目前国内外关于绞股蓝的研究中，主要是关于皂苷的研究及报道，而关于绞股蓝中黄酮类成分的研究屈指可数，但是绞股蓝总黄酮的药效成分也具有一定的研究意义，如抗氧化、改善心脑血管循环、防止心肌梗塞等[2]。
黄酮也是绞股蓝的主要活性成分之一，是一种强大的抗氧化剂，可以有效地清除体内的自由基。据研究，绞股蓝黄酮有效的抗氧化能力是维生素E的十倍多，同时抗衰老、也可以预防癌症的发生。黄酮类化合物可以改善血液循环，降低胆固醇。这些结果有助于降低心血管疾病的发病率，也可以改善大脑心血管疾病。
因此，研究提取绞股蓝中黄酮类化合物的方法，对于提高其产率，将对医学的进步有着重要的科学价值和社会意义。
研究目的及意义
中药学中，从植物中有效的提取中药是一种核心技术，是中药生产过程中极其重要的一部分。提取过程中，优异的工艺流程可以最大程度地提取有效的目标物质，使中药中的其他不必要的物质减小到最低，减少分解和提取过程中活性成分的损失。本文采用响应面法优化提取工艺，以总黄酮的得率为评价指标，优化绞股蓝总黄酮的乙醇提取工艺，为进一步应用绞股蓝资源提供实验基础。
研究进展
绞股蓝中的商陆苷、芦丁和商陆素等黄酮类物质具有很好的药物学作用。研究发现：绞股蓝中黄酮类物质的含量随着气候的改变而改变，夏季的时候黄酮含量能够与达到一年之中的最大值，相反在冬天里其含量缺处于低谷。侯冬岩等一些研究者们实验研究了不同产地的绞股蓝中所含有的黄酮比例，对于来源不同的黄酮得占比是不同的。江西药物研究所的研究者们有报道称，产地不同的其主要成分不同，不同的地区的绞股蓝主要以黄酮或皂苷为主要成分，所以，在今后的研究中应密切注意根据研究对象对绞股蓝进行栽植培养。
目前绞股蓝的提取工艺主要为溶剂提取法，如甲醇、乙醇、丙醇等。提取之前用石油乙醚对绞股蓝进行预处理，目的是有效去除掉其中的一些元素，例如胡萝卜素、叶绿素以及脂等物质。目前来说，测定总黄酮的手段有很多种，但是主要还是以分光光度计法和反相高效液相色谱法等方法居多。刘运美等一些研究者们[3]利用热回流防法和超声波的方法相结合开展了提取实验，然后通过紫外分光光度法进行测定总黄酮得率，实验数据显示：石油醚能够特别快的分离出脂类，采用溶剂是甲醇，确定了回流的最佳时间为3h；相较于加热回流法，超声波提取法操作简单、所需时间较短，能够有效的提取总黄酮。蒋伟哲等一些研究者们[4]。在510mm波长的条件之下，采用的方法是紫外分光光度法，测定总黄酮的含量，数据显示当芦丁浓度在0.00920.0553mg/ml的范围内，得到的浓度随吸光度的增加而成比例增加，因此，紫外分光光度法对总黄酮的检测较为准确快捷。刘运美等其他研究者们[5]把芦丁物质引入实验中来，是她当做作对照的样品，在500mm波长的条件之下，然后采用的方法是紫外分光光度法，测定总黄酮的含量，并且实验中采用不同的分离工艺提取总黄酮得，实验采集的数据显示，加热回流法相对于超声提取法，总黄酮得率相对低一些，即超声提取法更有效。侯敏娜等其他研究者们[[6]在特定的波长的条件之下，采用的方法是紫外分光光度法，测定总黄酮的含量，实验数据显示：在不同的温度、加酶量、pH值以及酶解时间的条件之下，总黄酮得率是不一样的，每一个因素都具有一个最优条件（最佳值）。
目 录
1 绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2 研究目的及意义 1
1.3 研究进展 2
1.4 主要研究内容 3
2 相关概念综述 4
2.1 绞股蓝的化学成分 4
2.1.1 皂苷类 4
2.1.2 黄酮类 4
2.1.3 多糖 4
2.2 绞股蓝的药理作用 5
2.2.1 降血脂 5
2.2.2 增强免疫力 5
2.2.3 抗衰老作用 5
2.2.4 心理健康作用 5
2.3 响应面分析法 5
3 实验内容 7
3.1 实验器材 7
3.1.1 实验药材和试剂 7
3.1.2 实验器材 7
3.2 含量测定方法 7
3.2.1 样品的预处理 7
3.2.2 对照品溶液的制备 7
3.2.3 供试品溶液的制备 7
3.2.4 标准曲线的制备 8
3.2.5 样品总黄酮的测定 8
3.3 单因素实验 8
3.3.1 加酶量对总黄酮得率的影响 8
3.3.2 pH值对总黄酮得率的影响 9
3.3.3 酶解时间对总黄酮得率的影响 10
3.3.4 温度对总黄酮得率 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
的影响 11
3.4 响应曲面实验 12
3.4.1 实验设计 12
3.4.2 数学模型的建立及显著性的检验结果 13
3.4.3 交互作用的分析和优化 15
3.4.4 回归模型验证 17
4 结果与讨论 19
4.1 标准曲线的绘制 19
4.2 单因素对总黄酮得率的结果分析 19
4.3 响应曲面法优化实验结果分析 20
5 结论 21
致谢 22
参考文献 23
绪论
研究背景
绞股蓝的另一个名称为七叶胆，是一种可以攀附于其他物体上向上生长的植物，属葫芦科，其根茎较细、具有分支结构且有棱柱状突起，一般为无毛或者疏被短柔毛，目前主要生长在陕南以及长江以南地区。绞股蓝味道较苦，药性较寒，对于清热解毒，缓解咳嗽，气滋阴补，减少炎症反应，减轻咳嗽、抗老化、慢性支气管炎，咳嗽，肾虚等症状均有明显的药物作用。根据现代药理学，绞股蓝可有效缓解三高（血糖、血脂、血压），提升免疫力，也可抗癌、抗衰老、保护肝脏。绞股蓝之所以能够用于医药领域，这是因为其具有像如绞股蓝糖甙类、黄酮、水溶性化合物类，维生素类，氨基酸类，矿物质等，微量元素类等活性成分[1]。
绞股蓝的主要活性成分为皂苷和黄酮类物质，其中，皂苷具有与人参皂苷较为相似的结构，也被称为南方人参。目前国内外关于绞股蓝的研究中，主要是关于皂苷的研究及报道，而关于绞股蓝中黄酮类成分的研究屈指可数，但是绞股蓝总黄酮的药效成分也具有一定的研究意义，如抗氧化、改善心脑血管循环、防止心肌梗塞等[2]。
黄酮也是绞股蓝的主要活性成分之一，是一种强大的抗氧化剂，可以有效地清除体内的自由基。据研究，绞股蓝黄酮有效的抗氧化能力是维生素E的十倍多，同时抗衰老、也可以预防癌症的发生。黄酮类化合物可以改善血液循环，降低胆固醇。这些结果有助于降低心血管疾病的发病率，也可以改善大脑心血管疾病。
因此，研究提取绞股蓝中黄酮类化合物的方法，对于提高其产率，将对医学的进步有着重要的科学价值和社会意义。
研究目的及意义
中药学中，从植物中有效的提取中药是一种核心技术，是中药生产过程中极其重要的一部分。提取过程中，优异的工艺流程可以最大程度地提取有效的目标物质，使中药中的其他不必要的物质减小到最低，减少分解和提取过程中活性成分的损失。本文采用响应面法优化提取工艺，以总黄酮的得率为评价指标，优化绞股蓝总黄酮的乙醇提取工艺，为进一步应用绞股蓝资源提供实验基础。
研究进展
绞股蓝中的商陆苷、芦丁和商陆素等黄酮类物质具有很好的药物学作用。研究发现：绞股蓝中黄酮类物质的含量随着气候的改变而改变，夏季的时候黄酮含量能够与达到一年之中的最大值，相反在冬天里其含量缺处于低谷。侯冬岩等一些研究者们实验研究了不同产地的绞股蓝中所含有的黄酮比例，对于来源不同的黄酮得占比是不同的。江西药物研究所的研究者们有报道称，产地不同的其主要成分不同，不同的地区的绞股蓝主要以黄酮或皂苷为主要成分，所以，在今后的研究中应密切注意根据研究对象对绞股蓝进行栽植培养。
目前绞股蓝的提取工艺主要为溶剂提取法，如甲醇、乙醇、丙醇等。提取之前用石油乙醚对绞股蓝进行预处理，目的是有效去除掉其中的一些元素，例如胡萝卜素、叶绿素以及脂等物质。目前来说，测定总黄酮的手段有很多种，但是主要还是以分光光度计法和反相高效液相色谱法等方法居多。刘运美等一些研究者们[3]利用热回流防法和超声波的方法相结合开展了提取实验，然后通过紫外分光光度法进行测定总黄酮得率，实验数据显示：石油醚能够特别快的分离出脂类，采用溶剂是甲醇，确定了回流的最佳时间为3h；相较于加热回流法，超声波提取法操作简单、所需时间较短，能够有效的提取总黄酮。蒋伟哲等一些研究者们[4]。在510mm波长的条件之下，采用的方法是紫外分光光度法，测定总黄酮的含量，数据显示当芦丁浓度在0.00920.0553mg/ml的范围内，得到的浓度随吸光度的增加而成比例增加，因此，紫外分光光度法对总黄酮的检测较为准确快捷。刘运美等其他研究者们[5]把芦丁物质引入实验中来，是她当做作对照的样品，在500mm波长的条件之下，然后采用的方法是紫外分光光度法，测定总黄酮的含量，并且实验中采用不同的分离工艺提取总黄酮得，实验采集的数据显示，加热回流法相对于超声提取法，总黄酮得率相对低一些，即超声提取法更有效。侯敏娜等其他研究者们[[6]在特定的波长的条件之下，采用的方法是紫外分光光度法，测定总黄酮的含量，实验数据显示：在不同的温度、加酶量、pH值以及酶解时间的条件之下，总黄酮得率是不一样的，每一个因素都具有一个最优条件（最佳值）。
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