盐胁迫对苗期水飞蓟的生理与活性成分的影响(附件)
摘要：为探讨苗期水飞蓟的对盐胁迫的响应，以苗期菊科植物水飞蓟为试验材料，采用浓度为100mmol·L-1 NaCl溶液对水飞蓟进行不同时间NaCl胁迫处理（0d、1d、2d、3d、4d、5d，记为CK、T1、T2、T3、T4、T5），观察幼苗生长及其生理生化特征。结果显示：（1）叶片中叶绿素含量随着盐胁迫的天数的增大而降低（2）SOD活性、POD活性、CAT活性、可溶性蛋白和可溶性糖含量在NaCl胁迫T1、T3、T4时上升，在NaCl胁迫T2、T5时下降。（3）MDA含量在T1、T2、T3下降，T4、T5上升，总黄酮含量和水飞蓟素含量在NaCl胁迫T1、T2、T5下降，在NaCl胁迫T3、T4上升。研究表明：苗期水飞蓟在适度NaCl胁迫时间下，具有一定的耐盐性，不同的活性成分对不同时间的NaCl胁迫处理的响应存在较大差异，建议生产中根据不同的目标成分采取不同时间的NaCl胁迫处理。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1 材料与方法3
1.1 实验材料 3
1.2 实验设计 3
1.3 测定指标与方法 3
1.3.1 叶片叶绿素SPAD值测定3
1.3.2 叶片可溶性蛋白含量测定3
1.3.3 叶片抗氧化酶活性测定3
1.3.4 叶片MDA含量测定4
1.3.5 叶片可溶性糖含量测定4
1.3.6 叶片中总黄酮含量测定4
1.3.7 叶片中水飞蓟素含量测定4
1.4 数据分析 4
2 结果与分析4
2.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片叶绿素含量的影响4
2.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片抗氧化酶活性和MDA含量的影响5
2.2.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片抗氧化酶活性的影响5
2.2.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片MDA含量的影响5
2.3 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片渗透性物质的影响6
2.3.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片可溶性蛋白含量的
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
影响6
2.3.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片可溶性糖含量的影响6
2.4 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片总黄酮含量的影响6
2.5 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片水飞蓟素含量的影响7
3 讨论 7
3.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片抗氧化酶活性的响应特征7
3.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片渗透性物质的响应特征7
3.3 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片总黄酮和水飞蓟素的响应特征8
致谢8
参考文献9
盐胁迫对苗期水飞蓟的生理与活性成分的影响
引言
水飞蓟（Silybum marinum (L.) Gaertn）为菊科水飞蓟属植物，以其成熟的果实入药[1]，具有清热解毒、疏肝利胆的功效，主要用于肝胆湿热、胁痛、黄疸等症。其果实中主要含有水飞蓟宾、脱氢水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭、水飞蓟宾聚合物等水飞蓟素类化合物[2]，其茎叶也含有黄酮类、氨基酸、生物碱等多种化合物[3]。现代药理研究证明，水飞蓟素与水飞蓟提取物具有稳定和保护肝细胞膜、改善肝功能、阻止肝损害、提高免疫力、抗疱疹病毒等功能[46]。水飞蓟原产于印度和巴基斯坦的喀什米尔山区，而后在欧洲、美洲及澳洲多个地区都有种植[7]。1952 年，北京植物园从英国引进作观赏植物栽培，1972 年，由中国土产畜产进出口公司天津土产分公司从德国引种作为药用植物栽培[8]。我国很多地方都已引种成功，目前主要在西北和华北栽培。随着国内制药企业对水飞蓟原药材需求的增加，近几年价格也有所上升。水飞蓟耐严寒、耐盐碱、耐旱能力非常强，所以其对土壤要求并不严格，可利用盐碱地种植。我国的盐碱土面积较大，研究水飞蓟等耐盐植物的NaCl胁迫的响应，对利用大面积的盐碱地资源，对农业盐渍土的治理、开发以及提高植物的耐盐性等方面有非常重要的意义[912]。而目前在其栽培生产中，对其栽培生理及与活性成分的研究较少，张晓倩等[13]的研究表明水飞蓟种子萌发期，盐分主要通过改变种子吸涨能力来影响芽苗生长；在苗期，水飞蓟幼苗主要通过提高渗透物质含量和保护酶活性来缓解盐分造成的伤害；水飞蓟萌发期和苗期耐盐性有差异，萌发期耐盐能力明显低于苗期；而0.050.60 mmolL1的SNP 浸种能提高水飞蓟种子和幼苗的抗盐能力[14]；张鑫等[15]的研究表明NaCl溶液浓度在50400mmolL1范围内水飞蓟素含量随着盐浓度的升高有所增加。而NaCl胁迫处理时间对苗期水飞蓟生长及活性成分的影响则未见报道。为此以苗期水飞蓟为试验材料，采用水培方式，以100mmolL1NaCl溶液处理不同时间，研究NaCl胁迫不同时间对苗期水飞蓟的生理与活性成分含量的影响，为水飞蓟栽培生产中耐盐性提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
试验材料来自于安徽丫山野生药用植物园栽培种，由安徽医药高等专科学校李林华提供，经大学王康才教授鉴定为菊科植物水飞蓟（Silybum marinum）的种子。
1．2 试验设计
试验于2015年1月24日将水飞蓟种子播种于周转箱内（基质为石英砂：蛭石为1:2），3月24日选取长势基本一致的幼苗，单株移植于水培箱（45cm×50cm×15cm）内，并将水培箱置于光照培养箱内，用Hoagland营养液水培，培养期间每2d换1次营养液，培养条件：光照：3000xl，25℃，通气；培养10d后，进行NaCl胁迫处理，将营养液更换为100mmolL1NaCl溶液，处理时间分别为0d、1d、2d、3d、4d、5d，记为CK、T1、T2、T3、T4、T5，每个处理8株，3次重复。
1．3 测定指标与方法
全部处理结束后测定其叶片的叶绿素含量（SPAD），另取新鲜叶片用于可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶活性（SOD）、过氧化物酶活性（POD）、过氧化氢酶活性（CAT）、丙二醛含量（MDA）测定，其余所有水飞蓟材料，取出后洗净，用吸水纸吸干水分，按地上部（叶片）、地下部（根）两个部位分开，准确称量鲜质量后，于105℃烘箱内杀青15min后，于60℃烘干至恒重，准确称量叶和根的干质量，粉碎过80目筛备用，用于测定可溶性糖、水飞蓟素、总黄酮等指标的含量。
1．3．1 叶片叶绿素SPAD值测定 100mmolL1NaCl胁迫处理结束后的上午，取由里至外全展且无破损的第二轮叶片的中上部作为测定部位，用SPAD 502叶绿素测定仪测定其SPAD值，每个处理测定10次。
1．3．2 叶片中可溶性蛋白含量 采用南京建成生物工程所试剂盒（A0452）测定。
1．3．3 叶片中抗氧化酶活性的测定 （1）超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定：采用南京建成生物工程研究所试剂盒（A0011）。（2）过氧化物酶（POD）活性的测定：采用南京建成生物工程研究所试剂盒（A0843）测定。利用POD催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm处吸光度变化测定其活性。（3）过氧化氢酶（CAT）活性的测定：采用南京建成生物工程所试剂盒（A0071）测定。利用CAT分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，计算CAT的活性。
1．3．4 叶片中丙二醛（MDA）含量测定 采用南京建成生物工程所试剂盒（A0031）测定。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1 材料与方法3
1.1 实验材料 3
1.2 实验设计 3
1.3 测定指标与方法 3
1.3.1 叶片叶绿素SPAD值测定3
1.3.2 叶片可溶性蛋白含量测定3
1.3.3 叶片抗氧化酶活性测定3
1.3.4 叶片MDA含量测定4
1.3.5 叶片可溶性糖含量测定4
1.3.6 叶片中总黄酮含量测定4
1.3.7 叶片中水飞蓟素含量测定4
1.4 数据分析 4
2 结果与分析4
2.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片叶绿素含量的影响4
2.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片抗氧化酶活性和MDA含量的影响5
2.2.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片抗氧化酶活性的影响5
2.2.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片MDA含量的影响5
2.3 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片渗透性物质的影响6
2.3.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片可溶性蛋白含量的
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
影响6
2.3.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片可溶性糖含量的影响6
2.4 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片总黄酮含量的影响6
2.5 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片水飞蓟素含量的影响7
3 讨论 7
3.1 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片抗氧化酶活性的响应特征7
3.2 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片渗透性物质的响应特征7
3.3 NaCl胁迫对苗期水飞蓟叶片总黄酮和水飞蓟素的响应特征8
致谢8
参考文献9
盐胁迫对苗期水飞蓟的生理与活性成分的影响
引言
水飞蓟（Silybum marinum (L.) Gaertn）为菊科水飞蓟属植物，以其成熟的果实入药[1]，具有清热解毒、疏肝利胆的功效，主要用于肝胆湿热、胁痛、黄疸等症。其果实中主要含有水飞蓟宾、脱氢水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭、水飞蓟宾聚合物等水飞蓟素类化合物[2]，其茎叶也含有黄酮类、氨基酸、生物碱等多种化合物[3]。现代药理研究证明，水飞蓟素与水飞蓟提取物具有稳定和保护肝细胞膜、改善肝功能、阻止肝损害、提高免疫力、抗疱疹病毒等功能[46]。水飞蓟原产于印度和巴基斯坦的喀什米尔山区，而后在欧洲、美洲及澳洲多个地区都有种植[7]。1952 年，北京植物园从英国引进作观赏植物栽培，1972 年，由中国土产畜产进出口公司天津土产分公司从德国引种作为药用植物栽培[8]。我国很多地方都已引种成功，目前主要在西北和华北栽培。随着国内制药企业对水飞蓟原药材需求的增加，近几年价格也有所上升。水飞蓟耐严寒、耐盐碱、耐旱能力非常强，所以其对土壤要求并不严格，可利用盐碱地种植。我国的盐碱土面积较大，研究水飞蓟等耐盐植物的NaCl胁迫的响应，对利用大面积的盐碱地资源，对农业盐渍土的治理、开发以及提高植物的耐盐性等方面有非常重要的意义[912]。而目前在其栽培生产中，对其栽培生理及与活性成分的研究较少，张晓倩等[13]的研究表明水飞蓟种子萌发期，盐分主要通过改变种子吸涨能力来影响芽苗生长；在苗期，水飞蓟幼苗主要通过提高渗透物质含量和保护酶活性来缓解盐分造成的伤害；水飞蓟萌发期和苗期耐盐性有差异，萌发期耐盐能力明显低于苗期；而0.050.60 mmolL1的SNP 浸种能提高水飞蓟种子和幼苗的抗盐能力[14]；张鑫等[15]的研究表明NaCl溶液浓度在50400mmolL1范围内水飞蓟素含量随着盐浓度的升高有所增加。而NaCl胁迫处理时间对苗期水飞蓟生长及活性成分的影响则未见报道。为此以苗期水飞蓟为试验材料，采用水培方式，以100mmolL1NaCl溶液处理不同时间，研究NaCl胁迫不同时间对苗期水飞蓟的生理与活性成分含量的影响，为水飞蓟栽培生产中耐盐性提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
试验材料来自于安徽丫山野生药用植物园栽培种，由安徽医药高等专科学校李林华提供，经大学王康才教授鉴定为菊科植物水飞蓟（Silybum marinum）的种子。
1．2 试验设计
试验于2015年1月24日将水飞蓟种子播种于周转箱内（基质为石英砂：蛭石为1:2），3月24日选取长势基本一致的幼苗，单株移植于水培箱（45cm×50cm×15cm）内，并将水培箱置于光照培养箱内，用Hoagland营养液水培，培养期间每2d换1次营养液，培养条件：光照：3000xl，25℃，通气；培养10d后，进行NaCl胁迫处理，将营养液更换为100mmolL1NaCl溶液，处理时间分别为0d、1d、2d、3d、4d、5d，记为CK、T1、T2、T3、T4、T5，每个处理8株，3次重复。
1．3 测定指标与方法
全部处理结束后测定其叶片的叶绿素含量（SPAD），另取新鲜叶片用于可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶活性（SOD）、过氧化物酶活性（POD）、过氧化氢酶活性（CAT）、丙二醛含量（MDA）测定，其余所有水飞蓟材料，取出后洗净，用吸水纸吸干水分，按地上部（叶片）、地下部（根）两个部位分开，准确称量鲜质量后，于105℃烘箱内杀青15min后，于60℃烘干至恒重，准确称量叶和根的干质量，粉碎过80目筛备用，用于测定可溶性糖、水飞蓟素、总黄酮等指标的含量。
1．3．1 叶片叶绿素SPAD值测定 100mmolL1NaCl胁迫处理结束后的上午，取由里至外全展且无破损的第二轮叶片的中上部作为测定部位，用SPAD 502叶绿素测定仪测定其SPAD值，每个处理测定10次。
1．3．2 叶片中可溶性蛋白含量 采用南京建成生物工程所试剂盒（A0452）测定。
1．3．3 叶片中抗氧化酶活性的测定 （1）超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定：采用南京建成生物工程研究所试剂盒（A0011）。（2）过氧化物酶（POD）活性的测定：采用南京建成生物工程研究所试剂盒（A0843）测定。利用POD催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm处吸光度变化测定其活性。（3）过氧化氢酶（CAT）活性的测定：采用南京建成生物工程所试剂盒（A0071）测定。利用CAT分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，计算CAT的活性。
1．3．4 叶片中丙二醛（MDA）含量测定 采用南京建成生物工程所试剂盒（A0031）测定。
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