复氮浓度对苗期菘蓝营养及主要活性成分的影响
摘要：为探讨苗期菘蓝适宜的复氮浓度，以山西栽培居群的菘蓝为材料，对先基质培养后水培的菘蓝幼苗进行复氮处理的方式，分析不同复氮浓度下苗期菘蓝的营养及活性成分含量的变化。结果表明：（1）菘蓝叶中游离氨基酸含量随复氮浓度的提高先下降后上升再下降，可溶性蛋白含量变化趋势与之相反，T1处理可溶性蛋白含量最高，T3处理游离氨基酸含量最高；根中可溶性糖含量则整体呈上升趋势，在T4处理达到最大值。（2）随着复氮浓度的提高，叶中靛蓝、靛玉红含量均先上升后下降，在T2处理达到最大；根中(R,S)-告依春含量则先下降后上升，T4处理达到最大值；总生物碱及总黄酮含量的变化趋势一致，较低的复氮浓度有利于提高其含量。以上结果表明，不同的复氮浓度对菘蓝生理生化品质及药用品质的影响不同。在实际栽培过程中应节约肥料的使用，采用1/2N的复氮浓度最适宜提高菘蓝的药用品质。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言 1
1 材料与方法1
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1.2.1 材料培养2
1.2.2 材料处理3
1.3 药品试剂3
1.4 仪器设备3
1.5 测定项目与方法3
1.6 数据分析 3
2 结果与分析3
2.1 复氮水平对苗期菘蓝营养的影响3
2.1.1 游离氨基酸与可溶性蛋白含量3
2.1.2 可溶性糖含量4
2.2 复氮水平对苗期菘蓝活性成分的影响4
2.2.1 靛蓝和靛玉红含量4
2.2.2 （R, S）告依春含量4
2.2.3 总黄酮含量5
2.2.4 总生物碱含量5
3 小结与讨论 6
3.1 苗期菘蓝营养对不同复氮浓度的响应 6
3.2 苗期菘蓝活性成分对不同复氮浓度的响应 7
致谢7
参考文献7
表1 基本营养液(pH 6.0)8
表2 缺氮营养液(pH 6.0)8
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
复氮浓度对苗期菘蓝营养及主要活性成分的影响
引言
菘蓝（Isatis indigotica Fort.），又称北板蓝根，是十字花科菘蓝属二年生草本植物。菘蓝的干燥根与叶均可作为药材，分别称“板蓝根”与“大青叶”，具有良好的清热解毒的效果[1]。近年来对菘蓝研究较多的主要集中在其药理活性、制剂、四倍体育种、病虫害防治等方面，而对原植物栽培方面的问题研究较少，因此如何获得高产优质的菘蓝根与叶是栽培的首要任务。
植物生长需要多种营养元素，氮素是其生长发育所必需的大量元素之一。植物从土壤中吸收的氮素主要是无机氮，如铵态氮和硝态氮，因此必须通过同化作用才能转化为植物可利用的有效态氮。只有少部分有机的含氮化合物，如尿素、氨基酸等可被植物吸收利用。植物同化氮素的途径包括吸收、转运和同化三个过程。无机氮素只有先同化为有机氮，才能合成多种氨基酸和酰胺，最终形成植物可利用的氮类化合物。
氮素不仅可影响药用植物的营养品质，还可通过影响其次生代谢过程对活性成分含量产生影响。适当提高氮素浓度能促进药用植物活性成分的合成，但并非氮素浓度越高，药用植物活性成分的含量就越高。
靛蓝、靛玉红是大青叶中重要的活性成分，均属于吲哚生物碱类化合物。目前中国药典以靛玉红含量作为药材大青叶的质量控制指标。
板蓝根中的活性成分(R,S)告依春，分子式为C5H7NOS，属于吲哚生物碱类的含硫化合物，是目前中国药典规定的板蓝根的质量控制指标。
现代农业生产中，土壤本身可供给植物利用的肥料往往是缺乏的，因此需要施用肥料来使作物生长地更好，但化肥的过量施用会导致土壤营养的富集，使土壤出现盐渍化问题。氮素是施用最多的一种肥料，增施氮肥能提高农作物的产量。但据Zhang Lidong[2]对黄瓜的研究表明，大量施用氮肥并不能提高其产量。菘蓝是一种药用植物，栽培过程中需要兼顾其产量和药用品质。大量研究表明，菘蓝的产量与药用品质与氮素浓度与氮素形态有关。为此，在前期对缺氮和复氮研究的基础上，探讨不同的复氮浓度对苗期菘蓝生理生化及活性成分的影响，以确定苗期菘蓝最适宜的复氮浓度，为节约氮肥的使用、提高药材的品质提供科学的参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
菘蓝为来自山西的栽培居群，经大学王康才教授鉴定为十字花科植物菘蓝。
1.2 方法
1.2.1材料培养 试验采用盆栽方法进行。2015年6月4日进行播种，栽培基质为蛭石:有机质=1:1，花盆规格为270 mm×235 mm（高×内径），种植地点在大学生科楼六楼大棚。待出苗整齐后间苗，保证每盆56株，栽培期间定期浇水。2015年7月18日将其移入自制水培箱进行水培。
1.2.2材料处理 水培方式采用复氮培养方式，即先用基本营养液缓苗7天，再用缺氮营养液缺氮培养4天，最后再更换基本营养液复氮培养5天。营养液配方均参照Hoagland营养液（表1、2）。培养条件为：光照时间12 h/12 h（光/暗）、光照度20000 lx、温度25 ℃/20 ℃（昼/夜）。复氮处理时以基本营养液氮素浓度为1N，设置5个处理浓度，分别是CK（0N），T1（1/3N），T2(1/2N)，T3(1N)，T4(2N)。每个处理设3次重复。培养结束后将根与叶分开，均在105℃杀青，60℃烘干后粉碎过60目筛，进行各指标的测定。
1.3 药品试剂
靛蓝、靛玉红、(R,S)告依春、芦丁、葡萄糖、溴百里酚蓝、苯酚、浓硫酸
茚三酮、考马斯亮蓝G250、L亮氨酸
1.4 仪器设备
电热恒温鼓风干燥箱、数显恒温水浴锅、紫外分光光度计、电子分析天平。
超高效液相色谱仪：Agilent 1290，美国安捷伦公司。
高效液相色谱仪：L2000型，株式会社日立制作所。
1.5 测定项目与方法
1.5.1叶中游离氨基酸含量测定 采用茚三酮显色法进行测定[3]。
1.5.2叶中可溶性蛋白含量测定 采用考马斯亮蓝法进行测定[4]。
1.5.3根中可溶性糖含量测定 采用苯酚硫酸法进行测定[4]。
1.5.4叶中靛蓝、靛玉红含量测定 参照《中国药典》（2015版）的方法进行靛蓝、靛玉红的提取及测定。测定条件：采用Agilent超高效液相色谱仪，分析柱为ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1×50mm,1.8μm)，流动相为甲醇:水=72︰28，流速：0.300 mLmin1，柱温:30℃，检测波长：289 nm，进样体积：2 μL。
1.5.5根中(R,S)告依春含量测定 参照《中国药典》（2015版）的方法进行(R,S)告依春的提取及测定。测定条件：采用日立高效液相色谱仪，分析柱为Dubhe C18 (250mm×2.4mm, 5μm)，流动相为甲醇︰0.02%磷酸溶液=7︰93，流速：0.800 mLmin1，柱温:30℃，检测波长：245 nm，进样体积：20 μL。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言 1
1 材料与方法1
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1.2.1 材料培养2
1.2.2 材料处理3
1.3 药品试剂3
1.4 仪器设备3
1.5 测定项目与方法3
1.6 数据分析 3
2 结果与分析3
2.1 复氮水平对苗期菘蓝营养的影响3
2.1.1 游离氨基酸与可溶性蛋白含量3
2.1.2 可溶性糖含量4
2.2 复氮水平对苗期菘蓝活性成分的影响4
2.2.1 靛蓝和靛玉红含量4
2.2.2 （R, S）告依春含量4
2.2.3 总黄酮含量5
2.2.4 总生物碱含量5
3 小结与讨论 6
3.1 苗期菘蓝营养对不同复氮浓度的响应 6
3.2 苗期菘蓝活性成分对不同复氮浓度的响应 7
致谢7
参考文献7
表1 基本营养液(pH 6.0)8
表2 缺氮营养液(pH 6.0)8
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
复氮浓度对苗期菘蓝营养及主要活性成分的影响
引言
菘蓝（Isatis indigotica Fort.），又称北板蓝根，是十字花科菘蓝属二年生草本植物。菘蓝的干燥根与叶均可作为药材，分别称“板蓝根”与“大青叶”，具有良好的清热解毒的效果[1]。近年来对菘蓝研究较多的主要集中在其药理活性、制剂、四倍体育种、病虫害防治等方面，而对原植物栽培方面的问题研究较少，因此如何获得高产优质的菘蓝根与叶是栽培的首要任务。
植物生长需要多种营养元素，氮素是其生长发育所必需的大量元素之一。植物从土壤中吸收的氮素主要是无机氮，如铵态氮和硝态氮，因此必须通过同化作用才能转化为植物可利用的有效态氮。只有少部分有机的含氮化合物，如尿素、氨基酸等可被植物吸收利用。植物同化氮素的途径包括吸收、转运和同化三个过程。无机氮素只有先同化为有机氮，才能合成多种氨基酸和酰胺，最终形成植物可利用的氮类化合物。
氮素不仅可影响药用植物的营养品质，还可通过影响其次生代谢过程对活性成分含量产生影响。适当提高氮素浓度能促进药用植物活性成分的合成，但并非氮素浓度越高，药用植物活性成分的含量就越高。
靛蓝、靛玉红是大青叶中重要的活性成分，均属于吲哚生物碱类化合物。目前中国药典以靛玉红含量作为药材大青叶的质量控制指标。
板蓝根中的活性成分(R,S)告依春，分子式为C5H7NOS，属于吲哚生物碱类的含硫化合物，是目前中国药典规定的板蓝根的质量控制指标。
现代农业生产中，土壤本身可供给植物利用的肥料往往是缺乏的，因此需要施用肥料来使作物生长地更好，但化肥的过量施用会导致土壤营养的富集，使土壤出现盐渍化问题。氮素是施用最多的一种肥料，增施氮肥能提高农作物的产量。但据Zhang Lidong[2]对黄瓜的研究表明，大量施用氮肥并不能提高其产量。菘蓝是一种药用植物，栽培过程中需要兼顾其产量和药用品质。大量研究表明，菘蓝的产量与药用品质与氮素浓度与氮素形态有关。为此，在前期对缺氮和复氮研究的基础上，探讨不同的复氮浓度对苗期菘蓝生理生化及活性成分的影响，以确定苗期菘蓝最适宜的复氮浓度，为节约氮肥的使用、提高药材的品质提供科学的参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
菘蓝为来自山西的栽培居群，经大学王康才教授鉴定为十字花科植物菘蓝。
1.2 方法
1.2.1材料培养 试验采用盆栽方法进行。2015年6月4日进行播种，栽培基质为蛭石:有机质=1:1，花盆规格为270 mm×235 mm（高×内径），种植地点在大学生科楼六楼大棚。待出苗整齐后间苗，保证每盆56株，栽培期间定期浇水。2015年7月18日将其移入自制水培箱进行水培。
1.2.2材料处理 水培方式采用复氮培养方式，即先用基本营养液缓苗7天，再用缺氮营养液缺氮培养4天，最后再更换基本营养液复氮培养5天。营养液配方均参照Hoagland营养液（表1、2）。培养条件为：光照时间12 h/12 h（光/暗）、光照度20000 lx、温度25 ℃/20 ℃（昼/夜）。复氮处理时以基本营养液氮素浓度为1N，设置5个处理浓度，分别是CK（0N），T1（1/3N），T2(1/2N)，T3(1N)，T4(2N)。每个处理设3次重复。培养结束后将根与叶分开，均在105℃杀青，60℃烘干后粉碎过60目筛，进行各指标的测定。
1.3 药品试剂
靛蓝、靛玉红、(R,S)告依春、芦丁、葡萄糖、溴百里酚蓝、苯酚、浓硫酸
茚三酮、考马斯亮蓝G250、L亮氨酸
1.4 仪器设备
电热恒温鼓风干燥箱、数显恒温水浴锅、紫外分光光度计、电子分析天平。
超高效液相色谱仪：Agilent 1290，美国安捷伦公司。
高效液相色谱仪：L2000型，株式会社日立制作所。
1.5 测定项目与方法
1.5.1叶中游离氨基酸含量测定 采用茚三酮显色法进行测定[3]。
1.5.2叶中可溶性蛋白含量测定 采用考马斯亮蓝法进行测定[4]。
1.5.3根中可溶性糖含量测定 采用苯酚硫酸法进行测定[4]。
1.5.4叶中靛蓝、靛玉红含量测定 参照《中国药典》（2015版）的方法进行靛蓝、靛玉红的提取及测定。测定条件：采用Agilent超高效液相色谱仪，分析柱为ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1×50mm,1.8μm)，流动相为甲醇:水=72︰28，流速：0.300 mLmin1，柱温:30℃，检测波长：289 nm，进样体积：2 μL。
1.5.5根中(R,S)告依春含量测定 参照《中国药典》（2015版）的方法进行(R,S)告依春的提取及测定。测定条件：采用日立高效液相色谱仪，分析柱为Dubhe C18 (250mm×2.4mm, 5μm)，流动相为甲醇︰0.02%磷酸溶液=7︰93，流速：0.800 mLmin1，柱温:30℃，检测波长：245 nm，进样体积：20 μL。
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