松花粉不同有效部位抑菌及抗氧化活性比较研究
摘 要松花粉是我国植物中的一种尤为不同的树种所产生的花粉，有马尾松和油松（花粉）之分。它又叫松花、松黄，其颜色一般为浅黄色。松花粉生长的环境也比较复杂一些，其海拔也比较高，在1200米左右的山中。现如今，健康安全问题已成为人们最关注的的一大问题，而松花粉被人们称作是既是药品也是食物的一种特别的植物。能受到人们如此高的重视，也一定有它的特别之处。在松花粉植物中，有着许许多多的营养成分，由于很少有人去研究其成分，因此对松花粉没有了进一步扩展。例如蛋白质、氨基酸和多糖类等。可以治疗一些常见病症，为医疗方面也提供了另一种选择，其主要在治疗外伤出血、湿疹、皮肤溃烂、脓水等方面有着重要作用，另外如果能够是较长时间服用也可以增加寿命。现如今医学水平发展越来越好，温饱问题已不再是关键，更多的是对于健康问题的关注，而松花粉在这一方面的优点在近年来也备受人们关注。本文主要是以松花粉作为研究对象，在研究课题的过程中，用到了乙醇回流提取法来对松花粉中不同有效部位进行提取与分离。本研究是以2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）和维生素C（VC）作为对照品，采用DPPH法和ABTS自由基清除法，利用紫外分光光度法测定其吸光度，从而分析其不同部位的抗氧化与抑菌活性。经研究，可以发现在石油醚和乙酸乙酯层的抗氧化作用较为明显，另外，为了扩展松花粉的利用度，本研究还选取了大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、米曲霉等菌种，来探究松花粉不同极性部位的抑菌活性，由此能够为松花粉的开发利用奠定了理论基础。实验结果表明，松花粉对大肠杆菌等细菌的抑制作用强于霉菌的抑制力。因此松花粉可以作为一种理想的抑菌添加剂使用。
目 录
目 录 IV
1 绪论 6
1.1研究背景及意义 6
1.2 松花粉的概述 6
1.2.1原植物形态及资源分布 7
1.2.3化学成分 8
1.2.2.1黄酮类 8
1.2.2.2甾醇类 8
1.2.3药理作用 8
1.2.3.1. 保护器官 8
1.2.3.2. 抗衰老 8
1.2.3.3. 抗肿瘤 9
1.2.3.4. 抗氧化 9
1.2.3.5. 其他 9
1.3松花粉的研 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
究前景 10
1.4天然抗氧化剂简介 10
1.5 常见的抗氧化研究方法 10
1.5.2羟基自由基清除法 11
1.5.3 ABTS自由基阳离子清除实验 11
2 实验研究 12
2.1 试药与仪器 12
2.1.1 试药 12
2.1.2 仪器和试剂 12
2.2 实验方法 12
2.2.1技术路线图 12
图2.1 技术路线图 13
2.2.2 松花粉的预处理 13
2.2.3 松花粉各有效部位提取 13
2.2.4 松花粉各有效部位溶液的配置 13
2.2.6 松花粉对DPPH自由基清除活性测定 14
2.2.6.1 DPPH自由基溶液的配置 14
2.2.6.2 DPPH清除活性测定 14
2.2.7 松花粉对ABTS自由基阳离子清除实验 15
2.2.7.1 ABTS自由基溶液的配置 15
2.2.7.2 ABTS自由基阳离子清除活性测定 15
2.3.1培养基的制备 15
2.3.2菌悬液的制备 16
2.3.3松花粉抑菌活性的测定 16
2.3.4松花粉最低抑菌浓度的测定（MIC） 17
2.3.5 松花粉最低致死浓度的测定（MBC） 17
2.4结果与分析 18
结 论 21
参考文献 24
致 谢 26
1 绪论
1.1研究背景及意义
所谓天然的抗氧化剂，它主要的来源－植物。其中含有维生素和黄酮类等化合物，而它的主要作用就是能够有效的清除自由基、改善血液循环、延缓细胞老化和预防癌症。松花粉在近几年和人们想更加亲近自然的想法大为相同，因此在松花粉的开发利用方面得到了人们的较多关注。同时，随着时代的进步，食品工业的快速发展，人们的安全意识在不断的提高，在健康方面有了更高的要求。
松花粉（Pine pollen），始载于《新修本草》[1]，现已收入《中国药典》[2]。具有抗疲劳、调节胃肠功能、护肝等功能。本课题以乙醇为溶剂,采用乙醇回流法提取松花粉中的化学成分,然后使用不同极性的有机溶剂按极性由小到大的顺序萃取松花粉的乙醇提取物,将其提取出来之后在按极性大小分为不同有效部位,然后再对所提取出来不同层的溶液进行抗氧化活性[34]测定以及对选取的细菌和霉菌进行抑菌活性测定。经试验，选出抗氧化活性与抑菌活性最优的部分。
1.2植物的概述
松花粉，其名字又叫松黄，是马尾松等植物所收集的花粉。见图：
1.2.1原植物形态及资源分布
松花粉的原植物形态，在《中国高等植物》中有记载。在高海拔处存在，由于地理位置与所处环境气候等不同，因此所需的生长环境也不同。据资料显示，在长江中下游海拔在700米以下的地区有松花粉的存在。它对生长环境也有一定的要求，需要适宜的温度，土壤的酸碱度，适宜在酸性土壤下生长，不宜在碱性条件下生长。一般的松花粉的采摘时间是在春季，花刚开时对松花粉进行摘取。对于收集到的松花粉进行分类，将其进一步加工处理，去掉其中的杂质部分，进行筛除，最后就可以得到最优质可供人们食用的松花粉。就现如今的发展形势来看，越来越多的人已经意识到松花粉的这一优点，关注度也逐渐提高，对于松花粉的利用度也逐渐提高。据资料显示，松花粉主要分布在云南地区，云南松花粉的质地要更为好一些 [5]。如图1.1。主要分布于秦巴山地，在陕、甘、鄂、豫西山地有天然散生，生长于秦岭太白山海拔32003700米的高山草地或灌丛中。
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图1.1 松花粉原植物形态
1.2.2化学成分
1.2.2.1黄酮类
经王开发[6]研究总结，松花粉中含有多种化学成分。其中黄酮类是占比例较重的一部分。再就是二氢黄酮醇类，最后还有一小部分的花青素。而黄酮类化合物一般都有抗氧化、防止过敏、能够预防肿瘤，还有简单的抗病毒的作用，因此人们对松花粉的关注度也逐渐提高。
1.2.2.2甾醇类
由研究发现，甾醇类化合物在松花粉中所占比例也较多一些。而甾醇类化合物其存在最多的要属植物了。提取甾醇类化合物主要用到的方法是二氧化碳超临界提取法。将甾醇类化合物提取出来之后，将其作为标准品，从而发展、开发利用。由此也可以表明，我国对松花粉的发展也有了越来越多的重视。
1.2.3药理作用
1.2.3.1. 保护器官
研究表明，松花粉能够改善四氯化碳所导致的肝组织氧化损伤及肝纤维化，其主要机制可能与增强肝脏氧化能力、抑制肝星形细胞的增殖、抑制胶原蛋白合成、基质金属蛋白酶表达等因素有关[7]。除此之外，松花粉还可以降低丙酸睾酮诱发的前列腺增生模型小鼠前列腺湿质量和前列腺指数，从而具有一定的前列腺保护作用[810]
目 录
目 录 IV
1 绪论 6
1.1研究背景及意义 6
1.2 松花粉的概述 6
1.2.1原植物形态及资源分布 7
1.2.3化学成分 8
1.2.2.1黄酮类 8
1.2.2.2甾醇类 8
1.2.3药理作用 8
1.2.3.1. 保护器官 8
1.2.3.2. 抗衰老 8
1.2.3.3. 抗肿瘤 9
1.2.3.4. 抗氧化 9
1.2.3.5. 其他 9
1.3松花粉的研 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
究前景 10
1.4天然抗氧化剂简介 10
1.5 常见的抗氧化研究方法 10
1.5.2羟基自由基清除法 11
1.5.3 ABTS自由基阳离子清除实验 11
2 实验研究 12
2.1 试药与仪器 12
2.1.1 试药 12
2.1.2 仪器和试剂 12
2.2 实验方法 12
2.2.1技术路线图 12
图2.1 技术路线图 13
2.2.2 松花粉的预处理 13
2.2.3 松花粉各有效部位提取 13
2.2.4 松花粉各有效部位溶液的配置 13
2.2.6 松花粉对DPPH自由基清除活性测定 14
2.2.6.1 DPPH自由基溶液的配置 14
2.2.6.2 DPPH清除活性测定 14
2.2.7 松花粉对ABTS自由基阳离子清除实验 15
2.2.7.1 ABTS自由基溶液的配置 15
2.2.7.2 ABTS自由基阳离子清除活性测定 15
2.3.1培养基的制备 15
2.3.2菌悬液的制备 16
2.3.3松花粉抑菌活性的测定 16
2.3.4松花粉最低抑菌浓度的测定（MIC） 17
2.3.5 松花粉最低致死浓度的测定（MBC） 17
2.4结果与分析 18
结 论 21
参考文献 24
致 谢 26
1 绪论
1.1研究背景及意义
所谓天然的抗氧化剂，它主要的来源－植物。其中含有维生素和黄酮类等化合物，而它的主要作用就是能够有效的清除自由基、改善血液循环、延缓细胞老化和预防癌症。松花粉在近几年和人们想更加亲近自然的想法大为相同，因此在松花粉的开发利用方面得到了人们的较多关注。同时，随着时代的进步，食品工业的快速发展，人们的安全意识在不断的提高，在健康方面有了更高的要求。
松花粉（Pine pollen），始载于《新修本草》[1]，现已收入《中国药典》[2]。具有抗疲劳、调节胃肠功能、护肝等功能。本课题以乙醇为溶剂,采用乙醇回流法提取松花粉中的化学成分,然后使用不同极性的有机溶剂按极性由小到大的顺序萃取松花粉的乙醇提取物,将其提取出来之后在按极性大小分为不同有效部位,然后再对所提取出来不同层的溶液进行抗氧化活性[34]测定以及对选取的细菌和霉菌进行抑菌活性测定。经试验，选出抗氧化活性与抑菌活性最优的部分。
1.2植物的概述
松花粉，其名字又叫松黄，是马尾松等植物所收集的花粉。见图：
1.2.1原植物形态及资源分布
松花粉的原植物形态，在《中国高等植物》中有记载。在高海拔处存在，由于地理位置与所处环境气候等不同，因此所需的生长环境也不同。据资料显示，在长江中下游海拔在700米以下的地区有松花粉的存在。它对生长环境也有一定的要求，需要适宜的温度，土壤的酸碱度，适宜在酸性土壤下生长，不宜在碱性条件下生长。一般的松花粉的采摘时间是在春季，花刚开时对松花粉进行摘取。对于收集到的松花粉进行分类，将其进一步加工处理，去掉其中的杂质部分，进行筛除，最后就可以得到最优质可供人们食用的松花粉。就现如今的发展形势来看，越来越多的人已经意识到松花粉的这一优点，关注度也逐渐提高，对于松花粉的利用度也逐渐提高。据资料显示，松花粉主要分布在云南地区，云南松花粉的质地要更为好一些 [5]。如图1.1。主要分布于秦巴山地，在陕、甘、鄂、豫西山地有天然散生，生长于秦岭太白山海拔32003700米的高山草地或灌丛中。
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图1.1 松花粉原植物形态
1.2.2化学成分
1.2.2.1黄酮类
经王开发[6]研究总结，松花粉中含有多种化学成分。其中黄酮类是占比例较重的一部分。再就是二氢黄酮醇类，最后还有一小部分的花青素。而黄酮类化合物一般都有抗氧化、防止过敏、能够预防肿瘤，还有简单的抗病毒的作用，因此人们对松花粉的关注度也逐渐提高。
1.2.2.2甾醇类
由研究发现，甾醇类化合物在松花粉中所占比例也较多一些。而甾醇类化合物其存在最多的要属植物了。提取甾醇类化合物主要用到的方法是二氧化碳超临界提取法。将甾醇类化合物提取出来之后，将其作为标准品，从而发展、开发利用。由此也可以表明，我国对松花粉的发展也有了越来越多的重视。
1.2.3药理作用
1.2.3.1. 保护器官
研究表明，松花粉能够改善四氯化碳所导致的肝组织氧化损伤及肝纤维化，其主要机制可能与增强肝脏氧化能力、抑制肝星形细胞的增殖、抑制胶原蛋白合成、基质金属蛋白酶表达等因素有关[7]。除此之外，松花粉还可以降低丙酸睾酮诱发的前列腺增生模型小鼠前列腺湿质量和前列腺指数，从而具有一定的前列腺保护作用[810]
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