黑果枸杞叶多糖的提取分离研究
近年来研究表明，黑果枸杞具有非常高的营养价值和生物活性。黑果枸杞果实中含有氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等丰富的营养成分和多糖，色素，黄酮等活性成分，其多糖可以抗肿瘤、增强免疫调节、降血压、降血糖、抗氧化等。但由于其果实的产量较低，价格昂贵，生产成本较高，它的开发利用受到一定限制；然而近年来有研究显示黑果枸杞叶片含有和其果实相同的成分，以多糖最明显。基于此本研究以收集于青海柴法木盆地的黑果构杞叶片，经陕西省中医药研究院张红研究员鉴定黑果枸杞的干燥叶。本文通过对黑果构杞叶采用热水提取、乙醇沉淀、Sevage试剂除蛋白、H2O2脱色素，透析冻干可以获得黑果构杞叶粗多糖CLRLP。CLRLP经离子交换柱层析和凝胶柱层析分离纯化后得到５个多糖组分LRLP1-A、LRLP2-A、LRLP3、LRLP4-A和LRLP5-A。从中选择LRLP1-A并研究分子量、单糖组成、糖含量等问题从而测定它们的理化性质，结果表明,该组分中分子量为34.9，糖含量为96.8%，单糖组成Ara、Man、Glc、Gal，相对摩尔比为6.86:1:1.05:3.12，以Ara和Gal为主要组成中性多糖。
目录
1 综述 1
1.1黑果枸杞的概述 1
1.2多糖的概述 1
1.2.1多糖的来源及分类 1
1.2.2多糖的生物活性 2
1.3黑果枸杞的研究现状 3
1.3.1黑果枸杞果实的研究现状 3
1.3.2黑果枸杞叶的研究现状 4
1.4多糖的提取方法 4
1.4.1水提醇沉法 5
1.4.2酸碱提法 5
1.4.3生物酶提取法 5
1.4.4超声提取法 5
1.4.5超滤提取法 5
1.4.6微波辅助提取法 6
1.5多糖的单糖组成分析 6
1.6本研究的目的及意义 7
2.实验内容 8
2.1 实验材料试剂及仪器 8
2.1.1实验材料 8
2.1.2实验试剂 8
2.1.3实验仪器 8
2.2实验方法 8
2.2.1提取方法 8
2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2.2分离纯化的方法 9
2.2.3糖含量测定 10
2.2.4单糖组成分析 12
结论 15
参考文献 18
致谢 20
1 综述
1.1黑果枸杞的概述
黑果枸杞大多数生长在人迹罕至而环境险恶的地方，比如沙漠荒山等，这一因素也赋予了黑果枸杞顽强的生命力。近年来，随着人类对大自然的大力开发和滥开发使黑果枸杞越来越少，同时也使之价格日益增加。
黑枸杞即黑果枸杞，别名为“苏枸杞”，属于茄科枸杞属。多刺的灌木，2050厘米高，多分枝;枝条倾斜或躺在地上，不规则的纵向条纹，小枝顶部刺，短节间，0.31.5厘米刺;荆棘两侧有短枝;在幼枝上，旧枝上不明显，旧枝上簇生叶或花。叶子在同一时间聚集，而较老的分支是没有叶子的短形块茎。叶26出生在短枝上，在嫩枝上，交替的叶上，肉质，不规则2或4裂，裂片膜质，边缘具边缘;花冠漏斗状，淡紫色，长1.2cm，管口稍扩大，浅5，圆形椭圆形，约1/21/3的管状，无毛，穗花不明显;雄蕊稍突出，花冠，雄蕊稍伸出，雄蕊略突出，位于花冠筒中部，花丝稍稀疏。在基地，花冠的高度也稀疏绒毛，风格几乎等于雄蕊。果实呈紫蓝色，圆球形状，也可在果实顶部稍微凹陷，大约宽49mm。其果实成熟种粒多像不规则椭圆形，棕褐色，大约1.5mm*2mm[1]。
黑果枸杞果实中含有氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等丰富的营养成分和多糖，色素，黄酮等活性成分，而多糖作为其主要成分之一，这也使得多糖的生物活性受到了人们的广泛关注[2]。
1.2多糖的概述
多糖广泛存在于植物、动物和微生物中，它是由十个或者十个以上的单糖通过苷键形成的大分子。它同时扮演着多种角色如，生理调节，免疫调节，信息识别与储存等重要角色，同蛋白质、核酸、脂质并称为四类大分子物质。现代研究表明，多糖具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种药理作用，并且无毒副作用，可大规模应用于食品药品领域[3]。
1.2.1多糖的来源及分类
大多数植物的结构支持和能量储存都是靠多糖完成的。近年来有研究发现从高等植物和药用植物中提取出的多糖达几百种，包括果胶、水溶性多糖、黏胶、树胶等，被广泛应用于药品、食品和化妆品等生产科研领域。还有一些植物多糖具有抗肿瘤，抗氧化，免疫调节和降血糖作用。
多糖存在于部分动物组织中，主要为粘多糖，包括肝素、类肝素、和壳聚糖等，很多多糖有着非常有价值的药理作用。其中壳聚糖具有无毒副作用、耐热、耐腐蚀等特征，是药物的良好载体；肝素及类肝素，其良好的抗凝血作用被广泛的应用于临床；透明质酸，用于骨科治疗；硫酸软骨素目前也是研究的热门，其对于抑制肝毒性和减轻骨关节疼痛等有较好的疗效。
微生物多糖主要来源于真菌、细菌等，目前研究较多，应用也较为广泛，例如，细菌英膜多糖已用作医药中的疫苗，细菌胞外多糖黄原胶用于纺织工业，香茹多糖、灵芝多糖用于保健行业。
藻类多糖主要来源于海藻类植物，从中提取出的多糖大多有硫酸根，具有多种生物活性，因此被广泛应用于食品、纺织和医药领域。
根据多糖的组成，多糖分为均聚糖和杂多糖。同多糖由单糖组成；杂多糖由两种或更多种单糖组成。常见的同聚糖包括葡聚糖，甘露聚糖和岩藻依聚糖、阿拉伯聚糖等；杂多糖有阿拉伯半乳聚糖、鼠李半乳糖酵酸等。
1.2.2多糖的生物活性
近年来多糖的生物活性受到了密切的关注，早期一直把多糖作为能量物质，然而人们发现多糖可以用作免疫促进剂。特别是在近年来的研究中显示多糖具有抗肿瘤活性后，这也使得多糖活性研究及成果更多受到人们的关注。目前已发现多糖具有多方面的活性[4]。
（1）抗肿瘤
多糖可以影响肿瘤细胞信号传递等来抑制癌细胞生长；地黄多糖通过显著提高抗癌基因表达抗肿瘤作用[5]。
（2）免疫调节
多糖可以通过不同的途径、不同的层面对免疫系统发挥作用，包括参与刺激免疫细胞的识别、抑制免疫细胞的活性，监控炎症引发的副作用等[6]。
多糖需要与受体表面的细胞结合后发挥免疫调节作用，而Ｔ细胞的细胞膜表面有很多不同的抗原和抗体，多糖能够通过促进Ｔ细胞的増殖来增强细胞免疫。研究表明，灵芝多糖可以激活骨髓细胞，促进Ｔ淋巴细胞转化为有活性的细胞，还可以激活诱生免疫因子的网状内皮系统和补体系统等多方面途径来调节免疫活性。此外，刺五加多糖、猕猴桃多糖、构杞多糖等均对Ｔ细胞具有增殖作用。而且，多糖可以有效的提高Ｂ细胞分泌抗体的能力，从而增进机体的免疫调节能力。比如，香茹多糖、紫菜多糖、褐藻多糖等均被证明具有提高Ｂ细胞合成IgG和IgB的能力，从而有效的促进Ｂ细胞增殖[7]。
（3）降血糖、降血脂
降低血糖的主要途径一种是通过保护胰岛岛Ｂ细胞，促进膜分泌胰岛素本身来调节：另一种可抑制胰高血糖素的分泌，使胰岛素的剩余效应达到平衡; 也可以通过葡萄糖代谢和外周组织中葡萄糖的使用而增加。金耳多糖对糖尿病小鼠具有显著的降糖功能；黑果构杞果实多糖对糖尿病具有预防和治疗作用。此外，银耳多糖可以加速肝脏的糖酵解，灵芝多糖可以加速葡萄糖的分解，麦冬多糖可以抑制肾上腺素，这些不同的途径都可以降低血糖[8]。
目录
1 综述 1
1.1黑果枸杞的概述 1
1.2多糖的概述 1
1.2.1多糖的来源及分类 1
1.2.2多糖的生物活性 2
1.3黑果枸杞的研究现状 3
1.3.1黑果枸杞果实的研究现状 3
1.3.2黑果枸杞叶的研究现状 4
1.4多糖的提取方法 4
1.4.1水提醇沉法 5
1.4.2酸碱提法 5
1.4.3生物酶提取法 5
1.4.4超声提取法 5
1.4.5超滤提取法 5
1.4.6微波辅助提取法 6
1.5多糖的单糖组成分析 6
1.6本研究的目的及意义 7
2.实验内容 8
2.1 实验材料试剂及仪器 8
2.1.1实验材料 8
2.1.2实验试剂 8
2.1.3实验仪器 8
2.2实验方法 8
2.2.1提取方法 8
2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2.2分离纯化的方法 9
2.2.3糖含量测定 10
2.2.4单糖组成分析 12
结论 15
参考文献 18
致谢 20
1 综述
1.1黑果枸杞的概述
黑果枸杞大多数生长在人迹罕至而环境险恶的地方，比如沙漠荒山等，这一因素也赋予了黑果枸杞顽强的生命力。近年来，随着人类对大自然的大力开发和滥开发使黑果枸杞越来越少，同时也使之价格日益增加。
黑枸杞即黑果枸杞，别名为“苏枸杞”，属于茄科枸杞属。多刺的灌木，2050厘米高，多分枝;枝条倾斜或躺在地上，不规则的纵向条纹，小枝顶部刺，短节间，0.31.5厘米刺;荆棘两侧有短枝;在幼枝上，旧枝上不明显，旧枝上簇生叶或花。叶子在同一时间聚集，而较老的分支是没有叶子的短形块茎。叶26出生在短枝上，在嫩枝上，交替的叶上，肉质，不规则2或4裂，裂片膜质，边缘具边缘;花冠漏斗状，淡紫色，长1.2cm，管口稍扩大，浅5，圆形椭圆形，约1/21/3的管状，无毛，穗花不明显;雄蕊稍突出，花冠，雄蕊稍伸出，雄蕊略突出，位于花冠筒中部，花丝稍稀疏。在基地，花冠的高度也稀疏绒毛，风格几乎等于雄蕊。果实呈紫蓝色，圆球形状，也可在果实顶部稍微凹陷，大约宽49mm。其果实成熟种粒多像不规则椭圆形，棕褐色，大约1.5mm*2mm[1]。
黑果枸杞果实中含有氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等丰富的营养成分和多糖，色素，黄酮等活性成分，而多糖作为其主要成分之一，这也使得多糖的生物活性受到了人们的广泛关注[2]。
1.2多糖的概述
多糖广泛存在于植物、动物和微生物中，它是由十个或者十个以上的单糖通过苷键形成的大分子。它同时扮演着多种角色如，生理调节，免疫调节，信息识别与储存等重要角色，同蛋白质、核酸、脂质并称为四类大分子物质。现代研究表明，多糖具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种药理作用，并且无毒副作用，可大规模应用于食品药品领域[3]。
1.2.1多糖的来源及分类
大多数植物的结构支持和能量储存都是靠多糖完成的。近年来有研究发现从高等植物和药用植物中提取出的多糖达几百种，包括果胶、水溶性多糖、黏胶、树胶等，被广泛应用于药品、食品和化妆品等生产科研领域。还有一些植物多糖具有抗肿瘤，抗氧化，免疫调节和降血糖作用。
多糖存在于部分动物组织中，主要为粘多糖，包括肝素、类肝素、和壳聚糖等，很多多糖有着非常有价值的药理作用。其中壳聚糖具有无毒副作用、耐热、耐腐蚀等特征，是药物的良好载体；肝素及类肝素，其良好的抗凝血作用被广泛的应用于临床；透明质酸，用于骨科治疗；硫酸软骨素目前也是研究的热门，其对于抑制肝毒性和减轻骨关节疼痛等有较好的疗效。
微生物多糖主要来源于真菌、细菌等，目前研究较多，应用也较为广泛，例如，细菌英膜多糖已用作医药中的疫苗，细菌胞外多糖黄原胶用于纺织工业，香茹多糖、灵芝多糖用于保健行业。
藻类多糖主要来源于海藻类植物，从中提取出的多糖大多有硫酸根，具有多种生物活性，因此被广泛应用于食品、纺织和医药领域。
根据多糖的组成，多糖分为均聚糖和杂多糖。同多糖由单糖组成；杂多糖由两种或更多种单糖组成。常见的同聚糖包括葡聚糖，甘露聚糖和岩藻依聚糖、阿拉伯聚糖等；杂多糖有阿拉伯半乳聚糖、鼠李半乳糖酵酸等。
1.2.2多糖的生物活性
近年来多糖的生物活性受到了密切的关注，早期一直把多糖作为能量物质，然而人们发现多糖可以用作免疫促进剂。特别是在近年来的研究中显示多糖具有抗肿瘤活性后，这也使得多糖活性研究及成果更多受到人们的关注。目前已发现多糖具有多方面的活性[4]。
（1）抗肿瘤
多糖可以影响肿瘤细胞信号传递等来抑制癌细胞生长；地黄多糖通过显著提高抗癌基因表达抗肿瘤作用[5]。
（2）免疫调节
多糖可以通过不同的途径、不同的层面对免疫系统发挥作用，包括参与刺激免疫细胞的识别、抑制免疫细胞的活性，监控炎症引发的副作用等[6]。
多糖需要与受体表面的细胞结合后发挥免疫调节作用，而Ｔ细胞的细胞膜表面有很多不同的抗原和抗体，多糖能够通过促进Ｔ细胞的増殖来增强细胞免疫。研究表明，灵芝多糖可以激活骨髓细胞，促进Ｔ淋巴细胞转化为有活性的细胞，还可以激活诱生免疫因子的网状内皮系统和补体系统等多方面途径来调节免疫活性。此外，刺五加多糖、猕猴桃多糖、构杞多糖等均对Ｔ细胞具有增殖作用。而且，多糖可以有效的提高Ｂ细胞分泌抗体的能力，从而增进机体的免疫调节能力。比如，香茹多糖、紫菜多糖、褐藻多糖等均被证明具有提高Ｂ细胞合成IgG和IgB的能力，从而有效的促进Ｂ细胞增殖[7]。
（3）降血糖、降血脂
降低血糖的主要途径一种是通过保护胰岛岛Ｂ细胞，促进膜分泌胰岛素本身来调节：另一种可抑制胰高血糖素的分泌，使胰岛素的剩余效应达到平衡; 也可以通过葡萄糖代谢和外周组织中葡萄糖的使用而增加。金耳多糖对糖尿病小鼠具有显著的降糖功能；黑果构杞果实多糖对糖尿病具有预防和治疗作用。此外，银耳多糖可以加速肝脏的糖酵解，灵芝多糖可以加速葡萄糖的分解，麦冬多糖可以抑制肾上腺素，这些不同的途径都可以降低血糖[8]。
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