裸花紫珠止血活性部位的筛选研究(附件)
摘 要裸花紫珠又称节节红，中国主产长江流域以南，分布在江西、福建、广东、广西，海南等省。地面以上所有部位都可以入药，对治疗各种出血症状有很好的效果疗效。根据相关的药理活性研究和化学成分。本篇论文选取裸花紫珠止血活性部位作为本次的研究对象。第一部分：提取裸花紫珠中有关的六种代表性的裸花紫珠粗提物：乙酸乙酯浸膏、萃取水层浸膏经大孔吸附树脂柱乙醇洗脱物、裸花紫珠片溶解液、药渣水提液、石油醚浸膏、总醇提物。第二部分：采用动物实验，将裸花紫珠药材中六种有着典型代表的裸花紫珠粗提物以灌胃的方式注射在小白鼠身体内，参考小白鼠的出血时间、凝血时间和小鼠的重量为实验的参考指标。第三部位：通过观察小白鼠的止血效果，分析和了解止血活性成分相对于比较集中的药材部位的化学成分。通过对裸花紫珠粗提物进行止血活性的观察和检测，发现注射萃取水层经大孔树脂处理乙醇洗脱物的小白鼠相对于其他五组小白鼠的出血时间的有着缩减作用，且止血作用最为明显。 目 录
1 绪论 1
1.1 裸花紫珠的研究进展 1
1.1.1 裸花紫珠的研究概况 1
1.1.2 裸花紫珠的化学成分的研究 1
1.1.3 裸花紫珠的活性研究 1
1.2 论文的设计思想 3
1.2.1 研究的目的和意义 3
1.2.2 研究的内容和方法 4
2 裸花紫珠止血活性部位的筛选 6
2.1 材料与仪器 6
2.1.1 植物材料 6
2.1.2 药品和试剂 6
2.1.3 动物 6
2.1.4 仪器 6
2.2 试验方法 6
2.2.1 裸花紫珠提取物的制备 6
2.2.2 供试样品的配制 7
2.2.3 分组与给药 7
2.2.4 止血效果检测 9
2.2.5 统计学方法 9
2.3 试验结果 9
2.3.1 对小鼠体重的影响 9
2.3.2 裸花紫珠提取物对小鼠止血效果的影响 10
2.4 讨论 13
2.4.1 试验方法 13
2.4.2 统计方法 13
2.4.3
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3 分组与给药 7
2.2.4 止血效果检测 9
2.2.5 统计学方法 9
2.3 试验结果 9
2.3.1 对小鼠体重的影响 9
2.3.2 裸花紫珠提取物对小鼠止血效果的影响 10
2.4 讨论 13
2.4.1 试验方法 13
2.4.2 统计方法 13
2.4.3 止血机制 14
2.5 结果与分析 14
2.5.1 体重变化结果分析 14
2.5.2 止血试验结果分析 15
3 结论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1裸花紫珠的研究进展
1.1.1 裸花紫珠的研究概况
裸花紫珠又被称为节节红，赶风柴、饭汤叶、亚寨凡、白花茶。属于马鞭草科紫珠植物[1]。主要生长在中国长江流域以南，分布在广西、福建、广东、江西，海南等省多。在海南生产与安定、澄迈、白沙、昌江、东方、三亚、陵水、保亭等地。其中以海南五指山生长的裸花紫珠质量最好。于此同时裸花紫珠也是海南大宗性道地药材，是海南黎族医生最经常使用的中药材之一。在国外主要分布在印度、中南半岛、马来半岛及新加坡等。裸花紫珠几乎全年都采摘和加工的，除去杂质，在太阳下晾干，枝叶有着良好的驱风去湿、消炎解毒、散瘀消肿、抗菌止血的效果[2]。医疗方面主要用作消化道出血、烫伤、创伤、治疗烧伤等身体内和体外出血的症状，急性传染性肝炎和肿胀性炎症以及化脓性。目前市场代表药为裸花紫珠片，主要也是用于消炎，解毒，收敛，止血。用于细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，呼吸道及消化道出血多[3]。
1.1.2 裸花紫珠的化学成分的研究
截至到现在，对裸花紫珠的化学成分相关研究报道主要有黄酮类、三萜类和酚酸类等化合物[4]。紫珠属植物国内外相关研究得出的结论化学成分主要分为杜虹花和紫珠 2 种为主，日本和印度印度两国对大叶紫珠、木紫珠和日本紫珠 3 种植物的化学成分研究相对于其他国家最多[5]。虽然已经有少量的文献报道有关于裸花紫珠的化学成分的研究，但还是主要集中与低极性部位或者挥发油上，但是和临床上用的水提工艺提取的成分有着很大的差异。
1.1.3裸花紫珠的活性研究
裸花紫珠的药理作用相关研究表明止血活性效果较好，此外还具有不错的增强免疫、抗炎、抗菌、镇痛的作用[6]。
1.1.3.1止血活性
最近几年里，有关于裸花紫珠止血活性成分和相关机制的研究，已经报道了部分苯丙素类、萜类和黄酮等成分[7]。而且其中的一部分化合物具有明显缩短APTT的效果，此外使用裸花紫珠总黄酮和裸花紫珠片给小白鼠灌胃，能够显然缩少小白鼠凝血时间和出血时间，提示裸花珠还有可能是通过其内源性凝血的途径从而发 挥止血效果的。分别使用裸花紫珠低剂量 (1mg/kg)，中剂量 (2 mg/kg)、高剂量 (3 mg/kg) 对SD大鼠灌胃连续给药5滴，每个小组在末次灌药半个小时以后进然后行体内的血栓形成实验，以血栓湿质量为指标计算其抑制率，最后结果发现用了裸花紫珠后，SD大鼠的体内血栓湿质量和没有灌药的SD大鼠这组相比较明很显然减少了[8]。裸花紫珠各剂量组连续灌胃给药5滴，与末次给药40min后对SD大鼠静脉注射10%高分子右旋糖苷(10ml/kg)，然后在其腹主动脉取少量的血，在以1%的肝素抗凝测定全血粘度及红细胞压积，最后结果模型组动物全血粘度和红细胞压积与没有灌药的SD大鼠相比着很明显的增高，这说明了SD大鼠处于高凝的状态。以上虽有的实验结果表明，裸花紫珠在对于抑制血小板聚集抗、降低全血粘度和红细胞压积、抗血栓形成等作用有着发挥着重要的作用[9]。临床上裸花紫珠炼制的中成药主要应用于妇科、五官科和肛肠科等相关术后止血，对流产术、上环术、眼球钝挫伤、鼻黏膜糜烂、鼻腔鼻窦术和肛门局部创面出血的治疗效果显著[10]。
1.2.3.2抗菌
通过研究裸花紫珠提取物在抗菌方面过程中，采用试管体外抗菌试验和体外抗菌试验通常是以最低抑菌浓度和最小杀菌浓度为参考标准。结果发现裸花紫珠在抗菌方面起着举足轻重的作用，不论是对葡萄球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌都有很好的抗菌作用[11]。
1.2.3.3抗炎
裸花紫珠总黄酮含量从低到高依次为：低（50 mg/kg）、中（100mg/kg）、高（150 mg/kg）各个剂量组、裸花紫珠粉末1.90g/kg和0.970g/kg组都有着很显著抑制二甲苯导致的小白鼠耳廓周围肿胀作用；裸花紫珠粉末1.90、0.970g/kg两组对冰醋酸所导致的小白鼠毛细血管通透性增高有着明显的抑制作用[12]；裸花紫珠低（0.3 g/kg）、中（0.6g/kg）、高（1.2 g/kg）剂量组对角叉菜胶引起发炎导致大鼠足跖肿胀均有显著抑制作用，以上研究表明裸花紫珠具有较好的抗炎作用。
1.2.3.4镇痛作用
用裸花紫珠水提液和完全不一样剂量的有关提取物给小白鼠进行灌胃，在7天后滴一滴，然后将每只小白鼠0.25 mL的 0.7%醋酸溶液在其腹腔以注射的方式给药，20
1 绪论 1
1.1 裸花紫珠的研究进展 1
1.1.1 裸花紫珠的研究概况 1
1.1.2 裸花紫珠的化学成分的研究 1
1.1.3 裸花紫珠的活性研究 1
1.2 论文的设计思想 3
1.2.1 研究的目的和意义 3
1.2.2 研究的内容和方法 4
2 裸花紫珠止血活性部位的筛选 6
2.1 材料与仪器 6
2.1.1 植物材料 6
2.1.2 药品和试剂 6
2.1.3 动物 6
2.1.4 仪器 6
2.2 试验方法 6
2.2.1 裸花紫珠提取物的制备 6
2.2.2 供试样品的配制 7
2.2.3 分组与给药 7
2.2.4 止血效果检测 9
2.2.5 统计学方法 9
2.3 试验结果 9
2.3.1 对小鼠体重的影响 9
2.3.2 裸花紫珠提取物对小鼠止血效果的影响 10
2.4 讨论 13
2.4.1 试验方法 13
2.4.2 统计方法 13
2.4.3
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3 分组与给药 7
2.2.4 止血效果检测 9
2.2.5 统计学方法 9
2.3 试验结果 9
2.3.1 对小鼠体重的影响 9
2.3.2 裸花紫珠提取物对小鼠止血效果的影响 10
2.4 讨论 13
2.4.1 试验方法 13
2.4.2 统计方法 13
2.4.3 止血机制 14
2.5 结果与分析 14
2.5.1 体重变化结果分析 14
2.5.2 止血试验结果分析 15
3 结论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1裸花紫珠的研究进展
1.1.1 裸花紫珠的研究概况
裸花紫珠又被称为节节红，赶风柴、饭汤叶、亚寨凡、白花茶。属于马鞭草科紫珠植物[1]。主要生长在中国长江流域以南，分布在广西、福建、广东、江西，海南等省多。在海南生产与安定、澄迈、白沙、昌江、东方、三亚、陵水、保亭等地。其中以海南五指山生长的裸花紫珠质量最好。于此同时裸花紫珠也是海南大宗性道地药材，是海南黎族医生最经常使用的中药材之一。在国外主要分布在印度、中南半岛、马来半岛及新加坡等。裸花紫珠几乎全年都采摘和加工的，除去杂质，在太阳下晾干，枝叶有着良好的驱风去湿、消炎解毒、散瘀消肿、抗菌止血的效果[2]。医疗方面主要用作消化道出血、烫伤、创伤、治疗烧伤等身体内和体外出血的症状，急性传染性肝炎和肿胀性炎症以及化脓性。目前市场代表药为裸花紫珠片，主要也是用于消炎，解毒，收敛，止血。用于细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，呼吸道及消化道出血多[3]。
1.1.2 裸花紫珠的化学成分的研究
截至到现在，对裸花紫珠的化学成分相关研究报道主要有黄酮类、三萜类和酚酸类等化合物[4]。紫珠属植物国内外相关研究得出的结论化学成分主要分为杜虹花和紫珠 2 种为主，日本和印度印度两国对大叶紫珠、木紫珠和日本紫珠 3 种植物的化学成分研究相对于其他国家最多[5]。虽然已经有少量的文献报道有关于裸花紫珠的化学成分的研究，但还是主要集中与低极性部位或者挥发油上，但是和临床上用的水提工艺提取的成分有着很大的差异。
1.1.3裸花紫珠的活性研究
裸花紫珠的药理作用相关研究表明止血活性效果较好，此外还具有不错的增强免疫、抗炎、抗菌、镇痛的作用[6]。
1.1.3.1止血活性
最近几年里，有关于裸花紫珠止血活性成分和相关机制的研究，已经报道了部分苯丙素类、萜类和黄酮等成分[7]。而且其中的一部分化合物具有明显缩短APTT的效果，此外使用裸花紫珠总黄酮和裸花紫珠片给小白鼠灌胃，能够显然缩少小白鼠凝血时间和出血时间，提示裸花珠还有可能是通过其内源性凝血的途径从而发 挥止血效果的。分别使用裸花紫珠低剂量 (1mg/kg)，中剂量 (2 mg/kg)、高剂量 (3 mg/kg) 对SD大鼠灌胃连续给药5滴，每个小组在末次灌药半个小时以后进然后行体内的血栓形成实验，以血栓湿质量为指标计算其抑制率，最后结果发现用了裸花紫珠后，SD大鼠的体内血栓湿质量和没有灌药的SD大鼠这组相比较明很显然减少了[8]。裸花紫珠各剂量组连续灌胃给药5滴，与末次给药40min后对SD大鼠静脉注射10%高分子右旋糖苷(10ml/kg)，然后在其腹主动脉取少量的血，在以1%的肝素抗凝测定全血粘度及红细胞压积，最后结果模型组动物全血粘度和红细胞压积与没有灌药的SD大鼠相比着很明显的增高，这说明了SD大鼠处于高凝的状态。以上虽有的实验结果表明，裸花紫珠在对于抑制血小板聚集抗、降低全血粘度和红细胞压积、抗血栓形成等作用有着发挥着重要的作用[9]。临床上裸花紫珠炼制的中成药主要应用于妇科、五官科和肛肠科等相关术后止血，对流产术、上环术、眼球钝挫伤、鼻黏膜糜烂、鼻腔鼻窦术和肛门局部创面出血的治疗效果显著[10]。
1.2.3.2抗菌
通过研究裸花紫珠提取物在抗菌方面过程中，采用试管体外抗菌试验和体外抗菌试验通常是以最低抑菌浓度和最小杀菌浓度为参考标准。结果发现裸花紫珠在抗菌方面起着举足轻重的作用，不论是对葡萄球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌都有很好的抗菌作用[11]。
1.2.3.3抗炎
裸花紫珠总黄酮含量从低到高依次为：低（50 mg/kg）、中（100mg/kg）、高（150 mg/kg）各个剂量组、裸花紫珠粉末1.90g/kg和0.970g/kg组都有着很显著抑制二甲苯导致的小白鼠耳廓周围肿胀作用；裸花紫珠粉末1.90、0.970g/kg两组对冰醋酸所导致的小白鼠毛细血管通透性增高有着明显的抑制作用[12]；裸花紫珠低（0.3 g/kg）、中（0.6g/kg）、高（1.2 g/kg）剂量组对角叉菜胶引起发炎导致大鼠足跖肿胀均有显著抑制作用，以上研究表明裸花紫珠具有较好的抗炎作用。
1.2.3.4镇痛作用
用裸花紫珠水提液和完全不一样剂量的有关提取物给小白鼠进行灌胃，在7天后滴一滴，然后将每只小白鼠0.25 mL的 0.7%醋酸溶液在其腹腔以注射的方式给药，20
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