盐炙杜仲炮制工艺研究
摘 要本文以杜仲作为实验材料，以杜仲中的松脂醇二葡萄糖苷含量作为检测指标,采用单因素试验，研究了不同炮制温度、炮制时间以及浸盐浓度对松脂醇二葡萄糖苷含量的影响，并确定盐炙杜仲的最佳炮制工艺条件。在单因素试验的基础上，采用Box-Behnken响应曲面法对盐炙杜仲的最佳炮制工艺进行筛选。最后建立了不同的影响因子炮制温度、炮制时间以及浸盐浓度与响应值之间的模型。经过分析可得，优化后的盐炙杜仲的最佳炮制工艺条件是炮制温度是142.5℃，炮制时间是22 min以及浸盐浓度是2 %。结合盐炙杜仲的实际生产过程，最后将盐炙杜仲最佳的炮制工艺确定为炮制温度为140℃，炮制时间为20 min以及浸盐浓度为2 %。使用该模型预测得到的响应值与实际值比较接近，可以较真实地反映出检测指标与各个影响因子的关系，以及各个影响因子之间的交互作用。
目 录
1 引言 1
2 文献研究 2
2.1 杜仲概况 2
2.2 杜仲活性成分研究 2
2.3 杜仲的药理作用研究 3
2.4 杜仲的炮制研究进展 4
2.4.1 古代炮制研究 4
2.4.2 现代炮制研究 5
2.4.3 杜仲的盐炙工艺研究 6
3 实验研究 8
3.1仪器与材料 8
3.1.1 仪器 8
3.1.2 材料与试剂 8
3.2 实验方法 8
3.2.1 杜仲药材样品的炮制 8
3.2.2 标准品溶液的配制 8
3.2.3 色谱条件 8
3.2.4 标准曲线的测定 8
3.2.5 杜仲样品中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定 9
3.3 实验结果 9
3.3.1 标准曲线的测定 9
3.3.2 不同炮制温度对杜仲松脂醇二葡萄糖苷含量的影响 9
3.3.3 不同炮制时间对杜仲松脂醇二葡萄糖苷含量的影响 10
3.3.4 不同浸盐浓度对杜仲松脂醇二葡萄糖苷含量的影响 11
3.3.5 响应曲面法优化工艺 12
3.3.6 工艺参数最佳优化 16
3.3.7 模 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
型检验 16
4 结论与讨论 17
4.1 结论 17
4.2 讨论 17
参考文献 18
致 谢 20
1 引言
杜仲一般指的是杜仲科（Eucommiaceae）植物杜仲的干燥树皮[1]，其主要产地分布在我国的南方地区，以贵州为首，湖南和陕西等地次之，且在国外几个国家如缅甸、朝鲜与日本均有种植栽培[2]。杜仲是我国的一种名贵滋补的中药材，现代国内外很多研究均说明它具有很多功效，如补中益气、降血压、消炎杀菌、镇痛镇静、强筋健骨、提高人体的免疫力等，另外，其对孕妇还有安神保胎的作用。在杜仲的工业化生产过程中，通常会采用一些特定的炮制工艺来炮制杜仲，目的是提高杜仲中多种活性成分的浸出量，以及加速活性成分的浸出速度和提取速度。
在医院临床上，主要是将杜仲炮制成盐炙杜仲使用，盐炙杜仲在《药典》中有记载，盐炙的炮制依据是“引药入肾”，可以强肝补肾和强筋健骨[3, 4]。杜仲的质量如何一般是通过杜仲中含有的松脂醇二葡萄糖苷的量来评价的[58]。而现在杜仲炮制相关的研究仍然存在许多不足的地方，比如炮制盐炙杜仲的方法是“将杜仲块或杜仲丝按照盐水炙的方法，炒至杜仲的表面呈现焦黑色并且出现断丝的现象”。但是，这个方法并未设定炮制时的温度和炮制的时间等一些详细的炮制工艺参数。另外，以是否出现断丝的现象来判断杜仲炮制的程度，对观察者的炮制经验要求很高，且主观性极强，缺少了量化的参数以及更为客观的检验指标。所以，现在市场上所出售的杜仲质量参差不齐，这必然会对杜仲的临床医疗效果有较大的影响。因此，现在急需深入细化研究杜仲的炮制工艺，使得杜仲在国内外的竞争力有所提高，从而促进中药走向现代化，走向世界。总而言之，本文研究了盐炙杜仲炮制的工艺，希望能为提高杜仲的医学疗效提供一定的借鉴。
2 文献研究
2.1 杜仲概况
杜仲是我国一种珍贵的滋补中药材。其味甘甜，性温和，具有很多功效，如补中益气、降血压、消炎杀菌、镇痛镇静、强筋健骨、提高人体的免疫力等，另外，其对孕妇还有安神保胎的作用。《神农本草》上也有杜仲的记载，且属于上品。许多研究均说明杜仲可以帮助身体排出毒素，使得人体的物质代谢加快，有效减缓肌肉骨骼的老化速度，还可以使人体的血压达到平衡的状态，降低人体内的脂肪含量，使血管重新恢复弹性，此外，杜仲还具有清热解毒的作用，可以对抗常见的多种细菌与真菌，会增加人体中枢神经的兴奋度。而《本草纲目》对历代人民的杜仲使用经验进行了总结，增加了对杜仲药理方面的内容，书中记载道杜仲色紫而润，味甘微辛，微辛润，故能入肝而补肾，子能令母实也”[2]。在我国杜仲树皮的售价很低廉，这造成了极大的资源浪费，形成了恶性循环[9]。因此，现在急需深入细化研究杜仲的炮制工艺，使得杜仲在国内外的竞争力有所提高，从而促进中药走向现代化，走向世界。
2.2 杜仲活性成分研究
杜仲的活性成分十分丰富，世界范围内自上个世纪中期开始，就已经有很多研究人员在对杜仲中的活性化学成分进行了充分系统的研究。最终他们发现杜仲内含有Ca、Fe等大量的无机元素[10]。到目前为止，能从杜仲中分离出来的以及能鉴定得到的物质有很多，其中有机物质已超过70种，而矿物元素已超过15种[11]。Gonda等人[12]从杜仲的树皮里分离得到酸性聚糖杜仲糖A，同时Tomoda等人[13]也在同一年分离得到了杜仲糖B。木脂素类物质是杜仲活性成分的主要研究内容，与其他活性成分相比，人们对该物质的研究较多，对其化学结构了解得比较透彻，目前为止，人们已从杜仲的树皮内分离得到28种木脂素类物质，且已有超过百篇与该物质相关的研究报道[14, 15]。很多植物体内都含有环烯醚萜，它的的含量在杜仲的不同部位有很大的差异。木脂素类物质的前体是苯丙素类物质，其普遍存在于杜仲植物体内，主要的存在点为杜仲根茎的外皮和叶子上[16]。杜仲还有一种主要的活性成分就是黄酮类物质，对于这类物质，人们的研究主要集中在对其含量的测定方面，人们通常通过该物质含量的多少来对杜仲与杜仲饮片的质量进行评价[17]。
2.3 杜仲的药理作用研究
经很多国内外研究人员研究，他们发现杜仲可以帮助身体排出毒素，使得人体的物质代谢加快，有效减缓肌肉骨骼的老化速度，还可以使人体的血压达到平衡的状态，降低人体内的脂肪含量，使血管重新恢复弹性，此外，杜仲还具有清热解毒的作用，可以对抗常见的多种细菌与真菌，会增加人体中枢神经的兴奋度[18]。杜仲有着“世上质量最好的天然降压药，且无任何副作用”的美誉[19]。而使杜仲有极好的降压效果的主要活性成分是杜仲内的松脂醇二葡萄糖昔。杜仲的降血脂及血糖的机制主要是通过抑制淀粉酶等相关酶的活性从而使得碳水化合物分解的速度受到抑制来实现的。有研究人员通过研究发现，口服木脂素类物质可以有效降低大鼠的血压。近期的研究表明杜仲内含有的京尼平普酸也可以有效地降低并调节人体血压，日本的健康部门则认为真正起到降压作用的是杜仲中的京尼平昔酸[20]。杜仲内含有较高的Zn元素含量，通过调节特定病症的高血压病人体内的Zn元素含量，有效地降低了病人的血压。杜仲的愈伤组织以及叶片中的水提取物具备延缓肝脏和肌肉内的脂质过氧化速度的效果。杜仲内的桃叶珊瑚苷与京尼平昔均有抗肿瘤的活性。其抗肿瘤功能主要是通过增强人体的免疫力以及缩短肿瘤细胞的凋亡时间来实现的。其中杜仲内的桃叶珊瑚苷可以有效对抗病原菌和病毒，并且具有一定的肝保护活性，对乙肝病毒的抑制作用也比较明显。杜仲的树皮和叶片中含有丁香脂素二葡萄糖苷，能较好的抑制白血病。此外，杜仲内的绿原酸也有比较强的对抗病原菌的效果，可以增加人体中枢神经的兴奋性，使人体胃液与胆碱的分泌量增加，使得白细胞的数量增加，从而使人体抗病毒的功能有所增强。灌服杜仲煎剂可以明显减缓大鼠的蛋白性足肿现象，灌服杜仲树皮和叶片的醇沉物可以有效抑制大鼠的血清性脚肿，还能增强小鼠巨噬细胞对红细胞的吞噬能力。杜仲已经广泛应用于临床治疗，它的诸多药效也已得到临床上的证明，然而优质的杜仲药材资源却十分匮乏，这阻碍了杜仲的进一步开发利用。虽然现在越来越发达的人工栽培技术改善了杜仲药材资源的匮乏情况，也有了一定的进展，然而还是无法满足当前市场的需求。杜仲还有一种特殊的作用就是可以治疗人体农药中毒的情况，减小农药对人体的伤害。一些有机磷农药的相关研究说明杜仲叶片的参提物可以减缓该类型农药对人体的毒害程度。参提物中的有效活性成分能够将该类农药逐渐分解，进一步降低人体内乙酰胆碱的含量，以达到缓解中毒的目的。关于杜仲在防止骨质疏松方面的一些研究说明，杜仲的调节机制包括2个部分，第一是杜仲的活性成分可以促进成骨细胞的增殖与分化，加快细胞的成熟，从而对破骨细胞的生长起到抑制作用。第二是杜仲能够加快骨髓间的充质细胞发生增殖。杜仲叶片的醇提物作用与性激素相似，它可以使动物的骨髓生成速度加快，使它们的骨髓强度增加。而杜仲叶片的水煎剂则能够预防关节炎，而且镇痛作用比较明显，杜仲的叶片能够加快伤口的愈合速度。
目 录
1 引言 1
2 文献研究 2
2.1 杜仲概况 2
2.2 杜仲活性成分研究 2
2.3 杜仲的药理作用研究 3
2.4 杜仲的炮制研究进展 4
2.4.1 古代炮制研究 4
2.4.2 现代炮制研究 5
2.4.3 杜仲的盐炙工艺研究 6
3 实验研究 8
3.1仪器与材料 8
3.1.1 仪器 8
3.1.2 材料与试剂 8
3.2 实验方法 8
3.2.1 杜仲药材样品的炮制 8
3.2.2 标准品溶液的配制 8
3.2.3 色谱条件 8
3.2.4 标准曲线的测定 8
3.2.5 杜仲样品中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定 9
3.3 实验结果 9
3.3.1 标准曲线的测定 9
3.3.2 不同炮制温度对杜仲松脂醇二葡萄糖苷含量的影响 9
3.3.3 不同炮制时间对杜仲松脂醇二葡萄糖苷含量的影响 10
3.3.4 不同浸盐浓度对杜仲松脂醇二葡萄糖苷含量的影响 11
3.3.5 响应曲面法优化工艺 12
3.3.6 工艺参数最佳优化 16
3.3.7 模 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
型检验 16
4 结论与讨论 17
4.1 结论 17
4.2 讨论 17
参考文献 18
致 谢 20
1 引言
杜仲一般指的是杜仲科（Eucommiaceae）植物杜仲的干燥树皮[1]，其主要产地分布在我国的南方地区，以贵州为首，湖南和陕西等地次之，且在国外几个国家如缅甸、朝鲜与日本均有种植栽培[2]。杜仲是我国的一种名贵滋补的中药材，现代国内外很多研究均说明它具有很多功效，如补中益气、降血压、消炎杀菌、镇痛镇静、强筋健骨、提高人体的免疫力等，另外，其对孕妇还有安神保胎的作用。在杜仲的工业化生产过程中，通常会采用一些特定的炮制工艺来炮制杜仲，目的是提高杜仲中多种活性成分的浸出量，以及加速活性成分的浸出速度和提取速度。
在医院临床上，主要是将杜仲炮制成盐炙杜仲使用，盐炙杜仲在《药典》中有记载，盐炙的炮制依据是“引药入肾”，可以强肝补肾和强筋健骨[3, 4]。杜仲的质量如何一般是通过杜仲中含有的松脂醇二葡萄糖苷的量来评价的[58]。而现在杜仲炮制相关的研究仍然存在许多不足的地方，比如炮制盐炙杜仲的方法是“将杜仲块或杜仲丝按照盐水炙的方法，炒至杜仲的表面呈现焦黑色并且出现断丝的现象”。但是，这个方法并未设定炮制时的温度和炮制的时间等一些详细的炮制工艺参数。另外，以是否出现断丝的现象来判断杜仲炮制的程度，对观察者的炮制经验要求很高，且主观性极强，缺少了量化的参数以及更为客观的检验指标。所以，现在市场上所出售的杜仲质量参差不齐，这必然会对杜仲的临床医疗效果有较大的影响。因此，现在急需深入细化研究杜仲的炮制工艺，使得杜仲在国内外的竞争力有所提高，从而促进中药走向现代化，走向世界。总而言之，本文研究了盐炙杜仲炮制的工艺，希望能为提高杜仲的医学疗效提供一定的借鉴。
2 文献研究
2.1 杜仲概况
杜仲是我国一种珍贵的滋补中药材。其味甘甜，性温和，具有很多功效，如补中益气、降血压、消炎杀菌、镇痛镇静、强筋健骨、提高人体的免疫力等，另外，其对孕妇还有安神保胎的作用。《神农本草》上也有杜仲的记载，且属于上品。许多研究均说明杜仲可以帮助身体排出毒素，使得人体的物质代谢加快，有效减缓肌肉骨骼的老化速度，还可以使人体的血压达到平衡的状态，降低人体内的脂肪含量，使血管重新恢复弹性，此外，杜仲还具有清热解毒的作用，可以对抗常见的多种细菌与真菌，会增加人体中枢神经的兴奋度。而《本草纲目》对历代人民的杜仲使用经验进行了总结，增加了对杜仲药理方面的内容，书中记载道杜仲色紫而润，味甘微辛，微辛润，故能入肝而补肾，子能令母实也”[2]。在我国杜仲树皮的售价很低廉，这造成了极大的资源浪费，形成了恶性循环[9]。因此，现在急需深入细化研究杜仲的炮制工艺，使得杜仲在国内外的竞争力有所提高，从而促进中药走向现代化，走向世界。
2.2 杜仲活性成分研究
杜仲的活性成分十分丰富，世界范围内自上个世纪中期开始，就已经有很多研究人员在对杜仲中的活性化学成分进行了充分系统的研究。最终他们发现杜仲内含有Ca、Fe等大量的无机元素[10]。到目前为止，能从杜仲中分离出来的以及能鉴定得到的物质有很多，其中有机物质已超过70种，而矿物元素已超过15种[11]。Gonda等人[12]从杜仲的树皮里分离得到酸性聚糖杜仲糖A，同时Tomoda等人[13]也在同一年分离得到了杜仲糖B。木脂素类物质是杜仲活性成分的主要研究内容，与其他活性成分相比，人们对该物质的研究较多，对其化学结构了解得比较透彻，目前为止，人们已从杜仲的树皮内分离得到28种木脂素类物质，且已有超过百篇与该物质相关的研究报道[14, 15]。很多植物体内都含有环烯醚萜，它的的含量在杜仲的不同部位有很大的差异。木脂素类物质的前体是苯丙素类物质，其普遍存在于杜仲植物体内，主要的存在点为杜仲根茎的外皮和叶子上[16]。杜仲还有一种主要的活性成分就是黄酮类物质，对于这类物质，人们的研究主要集中在对其含量的测定方面，人们通常通过该物质含量的多少来对杜仲与杜仲饮片的质量进行评价[17]。
2.3 杜仲的药理作用研究
经很多国内外研究人员研究，他们发现杜仲可以帮助身体排出毒素，使得人体的物质代谢加快，有效减缓肌肉骨骼的老化速度，还可以使人体的血压达到平衡的状态，降低人体内的脂肪含量，使血管重新恢复弹性，此外，杜仲还具有清热解毒的作用，可以对抗常见的多种细菌与真菌，会增加人体中枢神经的兴奋度[18]。杜仲有着“世上质量最好的天然降压药，且无任何副作用”的美誉[19]。而使杜仲有极好的降压效果的主要活性成分是杜仲内的松脂醇二葡萄糖昔。杜仲的降血脂及血糖的机制主要是通过抑制淀粉酶等相关酶的活性从而使得碳水化合物分解的速度受到抑制来实现的。有研究人员通过研究发现，口服木脂素类物质可以有效降低大鼠的血压。近期的研究表明杜仲内含有的京尼平普酸也可以有效地降低并调节人体血压，日本的健康部门则认为真正起到降压作用的是杜仲中的京尼平昔酸[20]。杜仲内含有较高的Zn元素含量，通过调节特定病症的高血压病人体内的Zn元素含量，有效地降低了病人的血压。杜仲的愈伤组织以及叶片中的水提取物具备延缓肝脏和肌肉内的脂质过氧化速度的效果。杜仲内的桃叶珊瑚苷与京尼平昔均有抗肿瘤的活性。其抗肿瘤功能主要是通过增强人体的免疫力以及缩短肿瘤细胞的凋亡时间来实现的。其中杜仲内的桃叶珊瑚苷可以有效对抗病原菌和病毒，并且具有一定的肝保护活性，对乙肝病毒的抑制作用也比较明显。杜仲的树皮和叶片中含有丁香脂素二葡萄糖苷，能较好的抑制白血病。此外，杜仲内的绿原酸也有比较强的对抗病原菌的效果，可以增加人体中枢神经的兴奋性，使人体胃液与胆碱的分泌量增加，使得白细胞的数量增加，从而使人体抗病毒的功能有所增强。灌服杜仲煎剂可以明显减缓大鼠的蛋白性足肿现象，灌服杜仲树皮和叶片的醇沉物可以有效抑制大鼠的血清性脚肿，还能增强小鼠巨噬细胞对红细胞的吞噬能力。杜仲已经广泛应用于临床治疗，它的诸多药效也已得到临床上的证明，然而优质的杜仲药材资源却十分匮乏，这阻碍了杜仲的进一步开发利用。虽然现在越来越发达的人工栽培技术改善了杜仲药材资源的匮乏情况，也有了一定的进展，然而还是无法满足当前市场的需求。杜仲还有一种特殊的作用就是可以治疗人体农药中毒的情况，减小农药对人体的伤害。一些有机磷农药的相关研究说明杜仲叶片的参提物可以减缓该类型农药对人体的毒害程度。参提物中的有效活性成分能够将该类农药逐渐分解，进一步降低人体内乙酰胆碱的含量，以达到缓解中毒的目的。关于杜仲在防止骨质疏松方面的一些研究说明，杜仲的调节机制包括2个部分，第一是杜仲的活性成分可以促进成骨细胞的增殖与分化，加快细胞的成熟，从而对破骨细胞的生长起到抑制作用。第二是杜仲能够加快骨髓间的充质细胞发生增殖。杜仲叶片的醇提物作用与性激素相似，它可以使动物的骨髓生成速度加快，使它们的骨髓强度增加。而杜仲叶片的水煎剂则能够预防关节炎，而且镇痛作用比较明显，杜仲的叶片能够加快伤口的愈合速度。
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