洋马5个栽培类型药用菊花化学成分比较分析
摘要：目的：洋马镇是我国一个具有代表性的中药种植区域，菊花是其一大特色，本次探究通过对洋马镇5种栽培类型菊花的化学成分研究，得出不同栽培类型下各种化学成分有显著性差异，进一步确定洋马菊花适合的栽培类型。方法：采用聚酰胺薄层析法分离总黄酮，分光光度法测定总黄酮含量，高效液相测定绿原酸，木犀草苷3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量。结果与结论：洋马不同栽培类型药用菊花总黄酮薄层分析有差异，香菊的总黄酮含量最高。相同栽培类型药用菊花黄酮类成分含量在不同生长期具有显著差异性。通过比较洋马不同栽培类型和不同生长期的药用菊，选择出最合洋马的优质药用菊，为该地的菊花质量控制提供依据。
目录
摘要.2
关键词2 Abstract.2
引言
引言.2
1 材料与方法2
1.1 材料与仪器3
1.2 实验方法.3
1.2.1 聚酰胺薄层析法..3
1.2.2 分光光度法测总黄酮...3
1.2.3 高效液相色谱4
2 结果与分析5
2.1 薄层色谱法测定果.5
2.2 分光光度法测定结果...5
2.3 高效液相色谱法测定结果.6
3 讨论...6
3.1 分光光度法光的波长选择..6
致谢.7
参考文献..8
图1 薄层色谱分析图.3
表1 芦丁对照品溶液的吸光度变化 4
表2 5种菊花中黄酮质量分数的比较...4
表3 流动相的洗脱条件...5
表4 对照品的标准曲线方程.6
表5 不同产地的菊花药材样品中三种指标成分的含量（n=3） 6
洋马5个栽培类型药用菊花化学成分比较分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1材料与试剂
洋马镇五个不同栽培类型菊花的烘干品：香菊、黄菊、红心菊、北京菊、中菊，以聚酰胺薄层层析版做薄层色谱，需要先制版，用到聚酰胺粉、85%的甲酸、70%的乙醇溶液，做成分提取的实验需要用到石油醚（3060°C）、稀盐酸、乙酸乙酯、甲醇。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
> 测总黄酮时需要用到分光光度法，需要用到甲醇（色谱醇）、95%乙醇（分析纯）、超纯水、硝酸鋁、氢氧化钠为分析纯。
高效液相法分别用到：色谱级乙腈、甲醇（Honeywell，USA）、磷酸（赛默飞世尔有限公司）；水为超纯水；甲醇分析纯（北京化工厂）；绿原酸、木犀草苷、3，5O二咖啡酰基奎宁酸（天津马克生物技术有限公司，纯度>98%）。
1.1.2 实验仪器
筛选聚酰胺粉需要用到目筛（120目）、乳钵、玻璃板（10x20cm）、烘箱、烧杯（50ml）、量筒（10ml）、超声仪、水浴锅、分析天平、分光光度计、Waters 26952996高效液相色谱系统（USA），Empower2工作站；AL204电子分析天平（METTLER TOLEDO）；KQ500DE 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），Millipore超纯水机（美国Millipore公司）。
1.2 方法
1.2.1聚酰胺薄层析法
天然药物分离较广的一种分离方法即是聚酰胺薄层法，主要分离的有机物为黄酮类、醌类和酚类，本次实验测定的对象为总黄酮和总多糖。
聚酰胺薄层版的制备：将聚酰胺粉粉碎，经过120目的目筛备用，取1 g的粉末，放入干燥洁净的乳钵内，加入85%的甲酸6 ml，沿一个方向研磨，使其全部溶解，当溶液在全部透明的状态下缓缓加入70%的乙醇溶液3.5ml并研匀。将研匀后的胶状溶液倒匀在玻璃板上振摇平整晾干至不透明白色时洗去甲酸，置于常温下晾干，再将玻璃板放入150℃的烘箱内30 min，取出置于干净的环境中备用[1] 。
样品溶液的制备：将五种不同栽培类型的菊花分别编号15号，将烘干后的材料分别打粉，各取1g的材料粉末置于5个烧杯中，加石油醚（3060°C）20 ml，超声处理10 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 ml与乙酸乙酯50 ml，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供式品溶液。相同的方法制得其他4份样品的供试溶液。
样品成分的鉴定：吸取上述六种溶液各0.51ul，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水（1：15：1：1：2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
1.2.2 分光光度法测总黄酮：
供试样品的制备：称取五个样品每个称取1g，加70%的乙醇溶液30 ml，置于60℃的水中30 min超生，抽滤，洗涤至100 ml量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，并振动摇匀，备用。
对照品溶液的制备：称取芦丁对照品加乙醇溶液摇匀配成0.2102g.的对照品。
样品中总黄酮的测定：分别吸取五个样品的供试溶液3 ml加30％乙醇定容于10 ml量瓶中至刻度线，将定容后的溶液摇匀吸取2 ml到10 ml试管中，加5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，再用30%的乙醇稀释直至定容，摇匀后并放置1.5 h，然后测定在510 nm条件下的吸光度，每种样品平行操作3份，共测定15组数据，数据结果见表2.
芦丁对照品标准溶液的曲线绘制与稳定性考察 [2]：
吸取芦丁对照品溶液7组，规格分别为0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，3.5 ml分别加入10 ml试管中，加5%亚硝酸钠0.3 ml，震荡摇匀后放置5 min，再加4％氢氧化钠溶液4 ml， 同样用30%乙醇定容于10 ml量瓶中至刻度线，放置1.5 h后用紫外分光光度法测定在510 nm处的吸光度。
以对芦丁照品的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，计算得到方程 y=0.115x－0.009(r=0.996)，在符合的范围内，可用，见表1。
表1 芦丁对照品溶液的吸光度变化
t/min
A1
A2
A3
A平均
10
0.481
0.482
0.481
目录
摘要.2
关键词2 Abstract.2
引言
引言.2
1 材料与方法2
1.1 材料与仪器3
1.2 实验方法.3
1.2.1 聚酰胺薄层析法..3
1.2.2 分光光度法测总黄酮...3
1.2.3 高效液相色谱4
2 结果与分析5
2.1 薄层色谱法测定果.5
2.2 分光光度法测定结果...5
2.3 高效液相色谱法测定结果.6
3 讨论...6
3.1 分光光度法光的波长选择..6
致谢.7
参考文献..8
图1 薄层色谱分析图.3
表1 芦丁对照品溶液的吸光度变化 4
表2 5种菊花中黄酮质量分数的比较...4
表3 流动相的洗脱条件...5
表4 对照品的标准曲线方程.6
表5 不同产地的菊花药材样品中三种指标成分的含量（n=3） 6
洋马5个栽培类型药用菊花化学成分比较分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1材料与试剂
洋马镇五个不同栽培类型菊花的烘干品：香菊、黄菊、红心菊、北京菊、中菊，以聚酰胺薄层层析版做薄层色谱，需要先制版，用到聚酰胺粉、85%的甲酸、70%的乙醇溶液，做成分提取的实验需要用到石油醚（3060°C）、稀盐酸、乙酸乙酯、甲醇。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
> 测总黄酮时需要用到分光光度法，需要用到甲醇（色谱醇）、95%乙醇（分析纯）、超纯水、硝酸鋁、氢氧化钠为分析纯。
高效液相法分别用到：色谱级乙腈、甲醇（Honeywell，USA）、磷酸（赛默飞世尔有限公司）；水为超纯水；甲醇分析纯（北京化工厂）；绿原酸、木犀草苷、3，5O二咖啡酰基奎宁酸（天津马克生物技术有限公司，纯度>98%）。
1.1.2 实验仪器
筛选聚酰胺粉需要用到目筛（120目）、乳钵、玻璃板（10x20cm）、烘箱、烧杯（50ml）、量筒（10ml）、超声仪、水浴锅、分析天平、分光光度计、Waters 26952996高效液相色谱系统（USA），Empower2工作站；AL204电子分析天平（METTLER TOLEDO）；KQ500DE 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），Millipore超纯水机（美国Millipore公司）。
1.2 方法
1.2.1聚酰胺薄层析法
天然药物分离较广的一种分离方法即是聚酰胺薄层法，主要分离的有机物为黄酮类、醌类和酚类，本次实验测定的对象为总黄酮和总多糖。
聚酰胺薄层版的制备：将聚酰胺粉粉碎，经过120目的目筛备用，取1 g的粉末，放入干燥洁净的乳钵内，加入85%的甲酸6 ml，沿一个方向研磨，使其全部溶解，当溶液在全部透明的状态下缓缓加入70%的乙醇溶液3.5ml并研匀。将研匀后的胶状溶液倒匀在玻璃板上振摇平整晾干至不透明白色时洗去甲酸，置于常温下晾干，再将玻璃板放入150℃的烘箱内30 min，取出置于干净的环境中备用[1] 。
样品溶液的制备：将五种不同栽培类型的菊花分别编号15号，将烘干后的材料分别打粉，各取1g的材料粉末置于5个烧杯中，加石油醚（3060°C）20 ml，超声处理10 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 ml与乙酸乙酯50 ml，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供式品溶液。相同的方法制得其他4份样品的供试溶液。
样品成分的鉴定：吸取上述六种溶液各0.51ul，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水（1：15：1：1：2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
1.2.2 分光光度法测总黄酮：
供试样品的制备：称取五个样品每个称取1g，加70%的乙醇溶液30 ml，置于60℃的水中30 min超生，抽滤，洗涤至100 ml量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，并振动摇匀，备用。
对照品溶液的制备：称取芦丁对照品加乙醇溶液摇匀配成0.2102g.的对照品。
样品中总黄酮的测定：分别吸取五个样品的供试溶液3 ml加30％乙醇定容于10 ml量瓶中至刻度线，将定容后的溶液摇匀吸取2 ml到10 ml试管中，加5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，再用30%的乙醇稀释直至定容，摇匀后并放置1.5 h，然后测定在510 nm条件下的吸光度，每种样品平行操作3份，共测定15组数据，数据结果见表2.
芦丁对照品标准溶液的曲线绘制与稳定性考察 [2]：
吸取芦丁对照品溶液7组，规格分别为0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，3.5 ml分别加入10 ml试管中，加5%亚硝酸钠0.3 ml，震荡摇匀后放置5 min，再加4％氢氧化钠溶液4 ml， 同样用30%乙醇定容于10 ml量瓶中至刻度线，放置1.5 h后用紫外分光光度法测定在510 nm处的吸光度。
以对芦丁照品的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，计算得到方程 y=0.115x－0.009(r=0.996)，在符合的范围内，可用，见表1。
表1 芦丁对照品溶液的吸光度变化
t/min
A1
A2
A3
A平均
10
0.481
0.482
0.481
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