光慈姑提取物细胞药理活性研究

目录
摘要1
关键词1
引言1
1 材料与方法1
1.1 材料 1
1.1.1 癌细胞1
1.1.2 光慈姑1
1.1.3 主要试剂1
1.2 方法 2
1.2.1 光慈姑浸膏制备2
1.2.2 人乳腺癌细胞MCF7准备2
1.2.3 细胞药理实验2
2 结果3
2.1 光慈姑提取物对人乳腺癌细胞的毒性3
2.1.1 光慈姑水提物对人乳腺癌细胞的抑制率3
2.1.2 光慈姑醇提物对人乳腺癌细胞的抑制率3
2.1.3 两种提取物对人乳腺癌细胞作用的IC50指标3
2.1.4 两种提取物对人乳腺癌细胞处理不同时间后的形态变化4
2.2 两种提取物对人乳腺癌细胞的毒性大小比较4
3 讨论5
3.1 光慈姑提取物对癌细胞的影响及分析5
3.2 两种提取物对癌细胞影响的差异及分析5
致谢6
参考文献6
Abstract7
引言
光慈姑提取物细胞药理活性研究
学生 邓爱辉
[摘要] 目的：研究中药材光慈姑提取物的体外细胞药理活性，比较其醇提物和水提物对癌细胞增殖作用的差异。方法：以人乳腺癌细胞MCF7为对象，采用SRB法检测光慈姑提取物对细胞增殖抑制的影响。结果：在药物分别对人乳腺癌细胞处理24 h、48 h、72 h后，光慈姑水提物作用的IC50指标分别为7.80 mgmL1、 4.31 mgmL1、 3.67 mgmL1，其醇提物作用的IC50指标分别为3.64 mgmL1、2.22 mgmL1、1.46 mgmL1；在药物浓度和处理时间相同的条件下，醇提物对人乳腺癌细胞的增殖抑制率均明显高于水提物。结论：光慈姑水提物和醇提物对人乳腺癌细胞均有毒性，可有效抑制其增殖，且效果与药物浓度和作用时间正相关；光慈姑醇提物的细胞毒性比水提物更大，抑制效果更佳。
[关键词] 光慈姑；提取物；细胞药理活性；癌细胞
中药材光慈姑
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是百合科郁金香属多年生草本植物老鸦瓣[1]Tulipa edulis ( Miq. ) Baker的去膜质皮和绒毛后的干燥鳞茎，具有解毒散结、行血化瘀之功效，多用于治疗痢疾、小儿痰厥、痛风等，外可治疔疮疖肿、咽喉肿痛、蛇虫狂犬伤等[2]。目前也是治疗多种癌症的常用药，如咽喉癌、淋巴瘤、乳腺癌等[34]。光慈姑作为一种中医常用要药，在临床上发挥着重要作用，在抗癌方面疗效显著。近年来，光慈姑社会需求量较大，使得对其研究逐渐加深，包括本草考证、栽培技术及生物学特性等[57]，并且取得一定成果。
随着中药现代化推进，许多传统中药被挖掘并深入研究，有效成分、毒理、药理等逐渐被揭示，使其逐渐趋于现代化、标准化和国际化，加速了发展进程。然而，关于光慈姑的药理作用方面的研究，至今少有人涉足，国内外关于光慈姑药理活性研究并不多，主要集中在抗突变[8]、抗菌或抗病毒[910]、抗肿瘤[1112]几方面。其中，在抗肿瘤方面，阮小丽等[9]研究发现光慈姑提取物对小鼠S180实体肿瘤、小鼠Lewis肺癌、小鼠肝癌和人肝癌细胞株7721均有明显的抑制作用；Lin等[11]用以光慈姑提取物进行人胃癌细胞SGC7901抑制活性研究，结果表明它能促进胃癌细胞凋亡，且抑制效果随剂量增加而增强。目前已知，光慈姑提取物能够拮抗胃癌、肺癌、肝癌，但对其能否有效抑制乳腺癌，则尚不明确。作为传统治疗乳腺增生的乳核散结片，其主要成分之一即光慈姑，该中成药这一功效可能与该方剂中的光慈姑有关，即光慈姑可能具有抗乳腺癌活性，但当前对于这一方面的研究尚属空白，亟待科学研究证明。
因此，本实验以此为立足点，利用溶剂水和乙醇分别提取野生采集的中药材光慈姑，获得相应水提物和醇提物，并以之分别对人乳腺癌细胞MCF7在细胞学水平上探究其抗乳腺癌活性，并比较两种提取物的抗乳腺癌活性差异，为光慈姑的合理利用提供依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 癌细胞 人乳腺癌细胞MCF7购于中国科学院上海细胞研究院。
1．1．2 光慈姑 光慈姑经大学郭巧生教授鉴定为老鸦瓣Tulipa edulis ( Miq. ) Baker的干燥鳞茎，实验材料保存在大学中药材研究所。
1．1．3 主要试剂 磺基罗丹明B（SRB，Sigma公司），胚胎牛血清和DMEM(均为进口GIBCO产品）。
1．2 方法
1．2．1 光慈姑浸膏制备
(1) 光慈姑水提物浸膏的制备 干燥光慈姑粉末5 g用40 mL水加热回流2 h，过滤，滤渣再加热回流1 h，合并两次滤液，减压浓缩，制成浸膏，4℃冰箱保存。
(2) 光慈姑醇提物浸膏的制备 干燥光慈姑粉末 5 g先用95%乙醇超生波提取1 h，过滤，滤渣再用70%乙醇超生波提取1 h，合并两次滤液，减压浓缩，制成浸膏，4℃冰箱保存。
1．2．2 人乳腺癌细胞MCF7准备
(1) 细胞复苏 冻存管投入37℃温水直至冻存液完全溶解后，将细胞冻存悬液转移到离心管内，加入约5 mL培养液，经1000 rmin1离心5 min，弃上清夜；向细胞沉淀内加入完全培养液，混匀后转移到培养瓶内，补足培养液进行培养。
(2) 细胞培养 将MCF7细胞在5%CO2、37℃细胞恒温培养箱中培养，以T25细胞培养瓶培养。MCF7细胞的培养基为：95% DMEM培养基+5%胎牛血清+1%青链霉素双抗+1%牛胰岛素。倒置显微镜下每天观察培养瓶中细胞生长情况，两到三天换一次培养液。
(3) 细胞传代 待细胞80%以上贴壁后，进行传代操作，于T75细胞培养瓶中培养。弃旧培养基，用2 mL PBS清洗细胞；加入1 mL胰蛋白酶EDTA溶液在37℃下消化约5~6 min，待细胞缩起变圆，浮起，进行吹打操作，使贴于瓶壁的细胞全都脱落，并使成片生长的细胞成单一细胞，加入500 uL完全培养基终止消化，2000 rmin1离心5 min；弃上清，取沉淀的细胞，再加入1 mL完全培养基，吹打，制成细胞悬液，一分为二到细胞培养瓶中，加入6 mL完全培养基，转移到细胞培养箱中。

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