甘草总黄酮对自由基和亚硝酸盐的清除作用
目 录
1 引言 1
1.1 黄酮类化合物的理化性质 1
1.2 甘草总黄酮的提取工艺 2
1.3 甘草总黄酮对自由基的清除作用 3
1.4 甘草总黄酮对亚硝酸盐的清除作用 4
1.5 本课题研究的目的与意义 4
2 材料与方法 4
2.1 实验原料 4
2.2 实验试剂 5
2.3 实验仪器与设备 5
2.4 甘草总黄酮含量的测定 6
2.5 甘草总黄酮对自由基和亚硝酸盐清除率的测定 7
2.6 数据处理与统计分析 9
3 结果与分析 9
3.1 芦丁标准曲线 9
3.2 单因素试验结果与分析 9
3.3 正交试验结果与分析 12
3.4 甘草总黄酮对自由基的清除作用 13
3.5 甘草总黄酮对亚硝酸盐的清除作用 14
结 论 16
致 谢 17
参 考 文 献 18
1 引言
甘草又名甜根，是补益的中草药之一，药用部位是其根茎部分。它有解毒、止痛、祛痰、解痉及抗癌等功效。其有效成份包括黄酮类、三萜类、多糖等[1]。其中黄酮类的生物活性较强。
目前，人们从甘草中已分离出150多种黄酮类化合物，主要有黄酮醇类、查尔酮类、双氢查尔酮类等[2]。甘草黄酮具有明显的抑菌、降血脂、镇痛、抗病毒、抗肿瘤[3]、抗氧化[4]、保肝[5]等药理功效，广泛应用于医药、保健以及美容等行业。特别是在发现其具有抗艾滋病病毒作用后， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
甘草黄酮类化合物受到了人们的广泛关注。目前国内还只侧重于对甘草甜素的提取、分离[6]及药理功能的研究，大多数厂家也只局限于甘草酸的提取及其应用，黄酮类化合物及其它成分经常被忽视掉。因此，加强对黄酮类化合物的提取及其应用是我国大多数生产厂家的首要任务。由于不同黄酮类化合物的组成不同、提取方法不同，所以提取出来的甘草总黄酮的成分与性质也会有所不同。本文主要选取了超声波辅助提取法分离提取甘草样品中的总黄酮，并研究它对自由基和亚硝酸盐的清除效果，从而可以进一步为甘草总黄酮在食品中的实际应用提供理论依据。
1.1 黄酮类化合物的理化性质
1.1.1 结构
黄酮类化合物是以黄酮为母核而衍生的一类色素，包括同分异构体以及它的氢化还原产物。大多黄酮类化合物为结晶型的固体，少数为无定型的粉末[7]。黄酮类化合物分布广泛，大多数黄酮类化合物在植物体内以苷类或碳糖基的形式存在，少数以游离的形式存在。由于分子中γ-吡酮环上的氧原子可以与强酸形成盐而表现出弱碱性，所以也称为黄碱素类化合物。
1.1.2 颜色
黄酮类化合物的颜色与其分子中存在的交叉共轭体系和助色团 等的类型、数目及其取代位置有关。一般而言，黄酮、黄酮醇及其苷类物质大多显灰黄至黄色，查尔酮显黄色至橙黄色，而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类等由于不存在或很少存在共轭体系，故不显色[8]。而由于pH的变化，花色素及其苷元 的颜色也会有所不同，当pH﹤7时，一般显红色；7﹤pH﹤8.5时显紫色；PH﹥8.5时显蓝色。
1.1.3 溶解性
黄酮类化合物一般不溶或难溶于水，易溶于稀碱液和有机溶剂。当它的羟基糖苷化以后，其水溶性会相应变大，在有机溶剂 中的溶解性相应变小。黄酮苷 难溶于乙醚 、三氯甲烷 、苯 等有机溶剂，易溶于水、甲醇 、乙醇 、乙酸乙酯 等溶剂中。黄酮类化合物由于分子中多存在酚羟基而呈酸性，所以可溶于碱性水溶液、甲酰胺 、吡啶 及二甲基甲酰胺 中。
1.2 甘草总黄酮的提取工艺
如今黄酮类化合物的提取方法有很多，它们的基本原理都是以物理或化学方法来破坏样品的细胞壁，然后根据黄酮类化合物不同的极性及溶解性对其进行分离提取。
1.2.1 水提法
水提法是人们通常用来提取甘草总黄酮的方法，它的主要原理是利用甘草黄酮的水溶性进而来提取的。这种方法虽然简单，但因为提取时杂质太多、所需的提取时间较长、提取完以后的液体不易存放和后续的过滤操作较困难、收率较低等缺点，所以不常被使用[9]。
1.2.2 有机萃取法
目前提取甘草总黄酮使用最普遍的方法是有机萃取法。由于黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，所以在很多研究中人们常采用有机溶剂来提取黄酮类化合物。该方法可分为加热抽提法和冷浸法提取，不同的有机溶剂对不同的黄酮类化合物的提取效果也不同，而目前大多采用乙醇和甲醇作为提取溶剂[10]，并且常用70 %的乙醇提取天然黄酮类化合物，因为乙醇相对其他有机溶剂来讲较为廉价，且容易挥发，它的溶剂残留对人体也相对安全。然而使用有机溶剂提取黄酮类物质仍然存在着较大的安全隐患，故在实验操作时需谨慎对待。
1.2.3 超声辅助提取法
1.2.4 微波加热提取法
微波加热提取法的原理为：基于物质的介电性质与内部不同电荷的极化不具备跟上交变电场的能力实现的[12]。它可直接作用在分子上，加剧分子的热运动，使温度升高。微波的这种热效应可以穿透到介质内部，加速粉碎植物细胞壁，更快的分离提取甘草中的黄酮类物质。它具有加热均匀、时间短、质量好、易实现控制自动化等一系列优点。
1.2.5 其他提取方法
大孔树脂法、超临界流体提取法、酶法等。
1.3 甘草总黄酮对自由基的清除作用
1.3.1 自由基
自由基是含有一个或一个以上不成对电子的原子团，包括氧自由基、羟自由基和DPPH自由基等。它主要易造成细胞膜的损害最终导致细胞死亡。研究表明[13]：大量产生的自由基超过了机体的自我清除能力，因而引发严重的病理作用，导致机体神经元受损。因此研究从某些天然中草药中提取的抗氧化有效成分具有重要的意义。
1 引言 1
1.1 黄酮类化合物的理化性质 1
1.2 甘草总黄酮的提取工艺 2
1.3 甘草总黄酮对自由基的清除作用 3
1.4 甘草总黄酮对亚硝酸盐的清除作用 4
1.5 本课题研究的目的与意义 4
2 材料与方法 4
2.1 实验原料 4
2.2 实验试剂 5
2.3 实验仪器与设备 5
2.4 甘草总黄酮含量的测定 6
2.5 甘草总黄酮对自由基和亚硝酸盐清除率的测定 7
2.6 数据处理与统计分析 9
3 结果与分析 9
3.1 芦丁标准曲线 9
3.2 单因素试验结果与分析 9
3.3 正交试验结果与分析 12
3.4 甘草总黄酮对自由基的清除作用 13
3.5 甘草总黄酮对亚硝酸盐的清除作用 14
结 论 16
致 谢 17
参 考 文 献 18
1 引言
甘草又名甜根，是补益的中草药之一，药用部位是其根茎部分
目前，人们从甘草中已分离出150多种黄酮类化合物，主要有黄酮醇类、查尔酮类、双氢查尔酮类等[2]。甘草黄酮具有明显的抑菌、降血脂、镇痛、抗病毒、抗肿瘤[3]、抗氧化[4]、保肝[5]等药理功效，广泛应用于医药、保健以及美容等行业。特别是在发现其具有抗艾滋病病毒作用后， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
甘草黄酮类化合物受到了人们的广泛关注。目前国内还只侧重于对甘草甜素的提取、分离[6]及药理功能的研究，大多数厂家也只局限于甘草酸的提取及其应用，黄酮类化合物及其它成分经常被忽视掉。因此，加强对黄酮类化合物的提取及其应用是我国大多数生产厂家的首要任务。由于不同黄酮类化合物的组成不同、提取方法不同，所以提取出来的甘草总黄酮的成分与性质也会有所不同。本文主要选取了超声波辅助提取法分离提取甘草样品中的总黄酮，并研究它对自由基和亚硝酸盐的清除效果，从而可以进一步为甘草总黄酮在食品中的实际应用提供理论依据。
1.1 黄酮类化合物的理化性质
1.1.1 结构
黄酮类化合物是以黄酮为母核而衍生的一类色素，包括同分异构体
1.1.2 颜色
黄酮类化合物的颜色与其分子中存在的交叉共轭体系
1.1.3 溶解性
黄酮类化合物一般不溶或难溶于水，易溶
1.2 甘草总黄酮的提取工艺
如今黄酮类化合物的提取方法有很多，它们的基本原理都是以物理或化学方法来破坏样品的细胞壁，然后根据黄酮类化合物不同的极性及溶解性对其进行分离提取。
1.2.1 水提法
水提法是人们通常用来提取甘草总黄酮的方法，它的主要原理是利用甘草黄酮的水溶性进而来提取的。这种方法虽然简单，但因为提取时杂质太多、所需的提取时间较长、提取完以后的液体不易存放和后续的过滤操作较困难、收率较低等缺点，所以不常被使用[9]。
1.2.2 有机萃取法
目前提取甘草总黄酮使用最普遍的方法是有机萃取法。由于黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，所以在很多研究中人们常采用有机溶剂来提取黄酮类化合物。该方法可分为加热抽提法和冷浸法提取，不同的有机溶剂对不同的黄酮类化合物的提取效果也不同，而目前大多采用乙醇和甲醇作为提取溶剂[10]，并且常用70 %的乙醇提取天然黄酮类化合物，因为乙醇相对其他有机溶剂来讲较为廉价，且容易挥发，它的溶剂残留对人体也相对安全。然而使用有机溶剂提取黄酮类物质仍然存在着较大的安全隐患，故在实验操作时需谨慎对待。
1.2.3 超声辅助提取法
1.2.4 微波加热提取法
微波加热提取法的原理为：基于物质的介电性质与内部不同电荷的极化不具备跟上交变电场的能力实现的[12]。它可直接作用在分子上，加剧分子的热运动，使温度升高。微波的这种热效应可以穿透到介质内部，加速粉碎植物细胞壁，更快的分离提取甘草中的黄酮类物质。它具有加热均匀、时间短、质量好、易实现控制自动化等一系列优点。
1.2.5 其他提取方法
大孔树脂法、超临界流体提取法、酶法等。
1.3 甘草总黄酮对自由基的清除作用
1.3.1 自由基
自由基是含有一个或一个以上不成对电子的原子团，包括氧自由基、羟自由基和DPPH自由基等。它主要易造成细胞膜的损害最终导致细胞死亡。研究表明[13]：大量产生的自由基超过了机体的自我清除能力，因而引发严重的病理作用，导致机体神经元受损。因此研究从某些天然中草药中提取的抗氧化有效成分具有重要的意义。
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