鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备及流变学性质研究
摘要：鼎湖鳞伞菌（Pholiota dinghuensis Bi）是一种大型真菌，是中国鳞伞属的特有种。近几年来的研究结果表明鼎湖鳞伞菌丝体多糖具有一定的抑菌作用、体外抗氧及抑制肿瘤细胞增殖的活性。本研究采用液体发酵制备鼎湖鳞伞菌丝体，用热水提取、乙醇沉淀的方法获得粗多糖，通过DEAE-凝胶阴离子交换柱进行初步的分离，并对鼎湖鳞伞菌丝体粗多糖进行流变学性质的研究，以了解多糖在溶液中的链构象和构象转变以及其他物理性质，为研究多糖的构效关系提供重要的理论依据。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料2
1.1.1 菌种2
1.1.2 试剂2
1.1.3 仪器与设备2
1.2 方法2
1.2.1 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备2
1.2.2 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的分离纯化3
1.2.3 静态流变学性质测试3
2 结果与分析4
2.1 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备4
2.2 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的DEAE凝胶柱分离4
2.3 静态流变学性质5
2.3.1 多糖浓度对PDP 表观粘度的影响5
2.3.2 温度对PDP 表观粘度的影响6
2.3.3 盐浓度对PDP 表观粘度的影响6
2.3.4 蔗糖浓度对PDP 表观粘度的影响7
2.3.5 pH值对PDP表观粘度的影响8
3 讨论8
致谢9
参考文献9
鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备及流变学性质研究
食品质量与安全 邱丽淳
引言
多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接成的一种天然高分子聚合物，其中真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的，能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的生物活性物质，具有促进机体免疫功能、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等作用[1]。目前，对于多糖的结构、物理化学性质和生物活性都进行了大量的研究和报导[2,3
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
]，对多糖的研究已经成为现代研究的一个热点。多糖流变学性质对多糖的提取工艺、结构性质和加工过程中的稳定性都具有重要的作用[4]。通过流变学性质的研究可以了解多糖在溶液中的链构象和构象转变以及其他物理性质[5]，为研究多糖的构效关系提供重要的工具。
鼎湖鳞伞菌（Pholiota dinghuensis Bi）是一种大型真菌，1985年在我国广东省发现，为中国鳞伞属的特有种[68]。目前对鼎湖鳞伞菌中活性物质的报道较少，特别是鼎湖鳞伞菌丝体多糖，主要是甘聃[911]、李作美[1214]对其菌丝体多糖的液体发酵条件优化、分离纯化、单糖组成等理化性质、抗肿瘤等生物活性的研究。其研究表明鼎湖鳞伞菌丝体多糖具有一定的抑菌作用、体外抗氧及体外抑制肿瘤细胞增殖的活性，预示了该多糖在食品、药品及保健品中的应用前景。本研究采用液体深层发酵的方法制备鼎湖鳞伞菌丝体多糖，用热水提取、乙醇沉淀的方法获得粗多糖，然后通过DEAE凝胶阴离子交换柱进行初步的分离，并进一步研究鼎湖鳞伞菌丝体粗多糖溶液的流变学性质。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种
本论文中使用的微生物菌种——鼎湖鳞伞（Pholiotadinghuensis Bi）来源于广东微生物研究所菌种保藏中心（中国，广州）。
1.1.2 试剂
葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、MgSO4、琼脂、乙醇、丙酮、乙醚、浓硫酸、苯酚、氯化钠、氯化钙、氢氧化钠、盐酸、蔗糖等均为国产分析纯试剂；
土豆采购于苏果超市（江苏，南京）；
麦芽购于三九药店（江苏，南京）；
DEAE Sepharose Fast Flow
透析袋（14000 Da）
美国GE Healthcare公司
上海绿鸟科技发展有限公司
1.1.3 仪器与设备
AY120电子精密天平
BL220H分析天平
日本Shimadzu公司
日本Shimadzu公司
DELTA320 pH计
德国METTLER公司
DHG9140A型电热恒温鼓风干燥箱
上海一恒科技有限公司
LDZX50KBS立式高压灭菌锅
上海申安医疗器械厂
SWCJ1BU型洁净工作台
苏州安泰空气技术有限公司
GRP9080型隔水式恒温培养箱
上海森信实验仪器有限公司
HYGA型全温摇瓶柜
太仓市华美生化仪器厂
Anke TDL5/TGL16G低速离心机
上海安亭科学仪器厂
HH4型数显恒温水浴锅
常州国华电器有限公司
Heidolph Laborota 4000 efficient真空旋转蒸发仪SHBIII型循环水式真空泵
层析柱(2.6×60 cm)
DBS100A型电脑全自动部份收集器
Power dry LL3000型冷冻干燥机
HYQ2121A型漩涡混匀器
722S型可见分光光度计
德国Heidolph公司
郑州长城科工贸有限公司
上海亚荣生化仪器有限公司上海沪西分析仪器厂
美国Heto公司
苏州捷美电子有限公司
上海菁华科技仪器有限公司
ARES 流变仪
美国TA 公司
1.2 方法
1.2.1 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备
1.2.1.1 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基：200 g土豆切成1 cm2左右的小块煮至软烂（2030 min），四层纱布过滤，加葡萄糖、琼脂各20 g，加热熔化并搅拌均匀，稍冷加水至1000 mL，分装试管，加塞、包扎，于121°C灭菌20 min，摆成斜面，冷凝备用。
种子培养基：葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L，酵母膏4 g/L，KH2PO4 1 g/L，MgSO4 1 g/L，去离子水1000 mL。
发酵培养基：葡萄糖45 g/L，酵母膏6 g/L，无机盐KH2PO4和MgSO4分别为1.5 g/L和0.5 g/L，马铃薯100 g/L，麦芽粉2.5 g/L。
1.2.1.2 培养方法
鼎湖鳞伞菌种保藏于马铃薯斜面培养基上(4 ℃冰箱)，每隔60天传代一次。菌种传代或活化菌种时，取鼎湖鳞伞菌丝块接种于马铃薯斜面培养基上，于隔水式恒温培养箱中28 ℃培养810天，直至菌丝长满斜面。然后挑取0.5 cm2大小的母种块，接种于液体培养基中，每只三角瓶接种4块，置于28 ℃的摇床上，转速为150 r/min，培养1015天。将培养好的鼎湖鳞伞菌种子液按15%的接种比例加入到发酵培养基中，在28 ℃、120 rpm的条件下震荡培养10天，进行液体深层发酵培养。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料2
1.1.1 菌种2
1.1.2 试剂2
1.1.3 仪器与设备2
1.2 方法2
1.2.1 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备2
1.2.2 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的分离纯化3
1.2.3 静态流变学性质测试3
2 结果与分析4
2.1 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备4
2.2 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的DEAE凝胶柱分离4
2.3 静态流变学性质5
2.3.1 多糖浓度对PDP 表观粘度的影响5
2.3.2 温度对PDP 表观粘度的影响6
2.3.3 盐浓度对PDP 表观粘度的影响6
2.3.4 蔗糖浓度对PDP 表观粘度的影响7
2.3.5 pH值对PDP表观粘度的影响8
3 讨论8
致谢9
参考文献9
鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备及流变学性质研究
食品质量与安全 邱丽淳
引言
多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接成的一种天然高分子聚合物，其中真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的，能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的生物活性物质，具有促进机体免疫功能、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等作用[1]。目前，对于多糖的结构、物理化学性质和生物活性都进行了大量的研究和报导[2,3
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]，对多糖的研究已经成为现代研究的一个热点。多糖流变学性质对多糖的提取工艺、结构性质和加工过程中的稳定性都具有重要的作用[4]。通过流变学性质的研究可以了解多糖在溶液中的链构象和构象转变以及其他物理性质[5]，为研究多糖的构效关系提供重要的工具。
鼎湖鳞伞菌（Pholiota dinghuensis Bi）是一种大型真菌，1985年在我国广东省发现，为中国鳞伞属的特有种[68]。目前对鼎湖鳞伞菌中活性物质的报道较少，特别是鼎湖鳞伞菌丝体多糖，主要是甘聃[911]、李作美[1214]对其菌丝体多糖的液体发酵条件优化、分离纯化、单糖组成等理化性质、抗肿瘤等生物活性的研究。其研究表明鼎湖鳞伞菌丝体多糖具有一定的抑菌作用、体外抗氧及体外抑制肿瘤细胞增殖的活性，预示了该多糖在食品、药品及保健品中的应用前景。本研究采用液体深层发酵的方法制备鼎湖鳞伞菌丝体多糖，用热水提取、乙醇沉淀的方法获得粗多糖，然后通过DEAE凝胶阴离子交换柱进行初步的分离，并进一步研究鼎湖鳞伞菌丝体粗多糖溶液的流变学性质。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种
本论文中使用的微生物菌种——鼎湖鳞伞（Pholiotadinghuensis Bi）来源于广东微生物研究所菌种保藏中心（中国，广州）。
1.1.2 试剂
葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、MgSO4、琼脂、乙醇、丙酮、乙醚、浓硫酸、苯酚、氯化钠、氯化钙、氢氧化钠、盐酸、蔗糖等均为国产分析纯试剂；
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1.2 方法
1.2.1 鼎湖鳞伞菌丝体多糖的制备
1.2.1.1 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基：200 g土豆切成1 cm2左右的小块煮至软烂（2030 min），四层纱布过滤，加葡萄糖、琼脂各20 g，加热熔化并搅拌均匀，稍冷加水至1000 mL，分装试管，加塞、包扎，于121°C灭菌20 min，摆成斜面，冷凝备用。
种子培养基：葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L，酵母膏4 g/L，KH2PO4 1 g/L，MgSO4 1 g/L，去离子水1000 mL。
发酵培养基：葡萄糖45 g/L，酵母膏6 g/L，无机盐KH2PO4和MgSO4分别为1.5 g/L和0.5 g/L，马铃薯100 g/L，麦芽粉2.5 g/L。
1.2.1.2 培养方法
鼎湖鳞伞菌种保藏于马铃薯斜面培养基上(4 ℃冰箱)，每隔60天传代一次。菌种传代或活化菌种时，取鼎湖鳞伞菌丝块接种于马铃薯斜面培养基上，于隔水式恒温培养箱中28 ℃培养810天，直至菌丝长满斜面。然后挑取0.5 cm2大小的母种块，接种于液体培养基中，每只三角瓶接种4块，置于28 ℃的摇床上，转速为150 r/min，培养1015天。将培养好的鼎湖鳞伞菌种子液按15%的接种比例加入到发酵培养基中，在28 ℃、120 rpm的条件下震荡培养10天，进行液体深层发酵培养。
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