体外胃消化对玫瑰多酚生物活性的影响
摘要：本文旨在检测体外胃消化对玫瑰多酚生理活性的影响，检测体外胃消化对玫瑰多酚生理活性的影响，通过模拟体外胃消化实验、致病菌生物膜抑制试验和玫瑰多酚抗氧化实验，对玫瑰多酚在胃消化前后生理活性的比较，研究体外胃消化对玫瑰多酚的影响，结果如下：经过体外胃消化，玫瑰多酚的含量下降，由消化前106.38mg/mL至81.91mg/mL，玫瑰多酚对致病菌生物膜的抑制作用在各浓度范围均减弱，但仍具有很强的抑制性，玫瑰多酚的抗氧化作用在各浓度范围均减弱，但仍具有很强的抗氧化活性。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 材料 1
1.1.1 实验材料 1
1.1.2 试剂1
1.1.3 设备2
1.2 实验方法2
1.2.1 玫瑰多酚的制备2
1.2.2模拟胃消化实验 3
1.2.3玫瑰多酚抑制被测菌株生物膜形成的检验3
1.2.4 DPPH自由基清除能力的测定3
1.2.5 ABTS自由基清除活性的测定3
1.2.6 铁离子还原力（FRAP）的测定4
1.2.7还原力测定4
1.2.8羟基自由基清除活性的测定4
2 结果与分析 5
2.1 玫瑰多酚的提取与分离纯化5
2.1.1 玫瑰多酚对致病菌生物膜形成的抑制作用5
2.2 玫瑰多酚的体外抗氧化活性研究 7
2.2.1 DPPH自由基清除活性 8
2.2.2 铁离子还原能力8
2.2.3 羟基自由基清除活性 8
3讨论9
致谢9
参考文献10
体外胃消化对玫瑰多酚生物活性的影响
引言
引言
人类对植物多酚的利用先于认识，最初只发现动物皮与某些植物用水一起浸泡后转变成革，而且这种革的特性来源于植物的“涩性”。真正认识这种植物的涩性物质则是在18世纪末期，并在1796年由Seguin首次提出“单
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宁”一词以表示植物水浸提物中能使生皮转变成革的“涩性”物质[1]。1962年Smith定义“单宁是分子量500～3000的能沉淀生物碱、明胶及蛋白质的水溶性酚类化合物”。之后，较多的工作集中于对植物单宁组分、结构以及基本性质的研究。后来人们发现，无论从化学、生物、药学等方面的活性作用，还是从应用领域来看，有效成分不仅仅限于上述定义中的“单宁”。1981年，Haslam根据单宁的分子结构及分子量提出“植物多酚”这一术语[2]。
多酚是一种植物内的天然成份，具有高抗氧化活性，它在植物体内的功能是帮助植物抵抗紫外线的侵害、对抗入侵植物体内的细菌、抑制植物体过度氧化作用[3]。早在很早之前，人们就习惯喝茶或咖啡来养生，不过那时候并不了解多酚的机能作用；现在，多酚已经被广泛运用到各种的保养品及保健食品上面，并且有各种植物萃取的多酚产品，来帮助人体体内或皮肤进行修复及保护的作用。
氧化损伤是导致许多慢性病，如心血管病，癌症和衰老的重要原因。多酚的抗氧化功能可以对这些慢性病起到预防作用。玫瑰多酚的抗氧化作用主要表现在：直接清除活性氧自由基，抑制脂质过氧化反应，整合金属离子，激活细胞内抗氧化防御系统[4]。
玫瑰多酚的抑菌作用已经被人们所认知。在众多的抗菌试验中，人们发现玫瑰多酚对大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌等许多致病菌，尤其是对胃肠道致病菌具有不同程度的抑制和杀伤作用[5]。玫瑰多酚的抗菌机制，主要有以下3种方式：①破坏细菌细胞膜的脂质层，使细菌发生形态学改变；②抑制有害细菌分泌毒素的活性；③抑制有害细菌的侵染。玫瑰多酚一方面对胃肠道内细菌有十分强大的杀伤和抑制作用，另一方面对肠道内有益菌却起着保护作用[6]。改善机体肠道内微生物结构，提高肠道免疫功能，对增进健康有积极作用。
细菌的生理特性受到种群密度及与其他微生物相互作用的极大影响，而附着性是其显著特征之一。单种的细菌的生物膜形成过程被认为是一种向多细胞生活方式发展的形式（有研究者将之比作组织）[7]。有机分子(主要是多糖和蛋白质)会在几分钟的之内覆盖于任何置于海水中的物体表面，形成一层临时性膜。细菌在物体表面定植的起始步骤，通常包括细菌向物体表面的移动和微粘度的改变，而微粘度的改变会引起细菌在靠近表面时移动性下降[8]。
本实验通过进行玫瑰多酚体外胃消化实验，检测玫瑰多酚在胃消化前后生物活性的变化，检测玫瑰多酚对各致病菌种生物膜清除能力以及玫瑰多酚抗氧化活性的改变，分析玫瑰多酚在经过体外胃消化之后，生物活性的变化。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 实验材料
玫瑰花蕾：购自南京市农贸市场。
大孔吸附树脂：HPD600购自郑州勤朴科技有限公司。
1．1．2 试剂
0.4mmol/L的1,1二苯基2三硝基苯肼（DPPH）溶液；10 mmol/L2,4,6三吡啶基三嗪（TPTZ）溶液；胃蛋白酶；LB培养基。
1．1．3 设备
SHBIII 循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司
Heidolph Laborota 4000真空旋转蒸发仪 德国Heidolph
电子天平 德国Sartoriius公司
Anke TDL5低速离心机 上海安亭科学仪器厂
DK8D型电热恒温水槽 上海森信实验仪器有限公司
Alpha1101m型可见分光光度计 上海谱元仪器有限公司
高压蒸汽灭菌器SX500 日本TOMY公司
1．1．4 实验菌株
紫色杆菌CV026：由美国德克萨斯州立大学Robert J. C. McLean教授惠赠。
铜绿假单胞菌PAO1：购自上海水产研究所。
沙门氏菌50013：购自江苏省中国疾病预防控制中心。
大肠杆菌ATCC8099：购自南京市疾病控制预防中心。
大肠杆菌O157：H7：购自南京市疾病控制预防中心。
1．2 实验方法
1．2．1?玫瑰多酚含量的测定
?? 取玫瑰花蕾，经中草药粉碎机粉碎后100目筛，所得粉末置于4℃保藏，备用。称取玫瑰花渣粉末5g，按照1：20的料液比加入提取剂后置于超声萃取仪中，50%乙醇水溶液作提取剂，超声处理30min，超声功率为250W，制备玫瑰花粗提物。
室温下，称取30g活化好的HPD600大孔树脂，用乙醇湿法装入16mm × 30cm的玻璃柱中，再用去60%乙醇水溶液等速洗脱。操作的工艺条件为上样流速1mL/min，上样量为200mL，洗脱速度1mL/min，洗脱剂用量为300mL。收集洗脱组分，旋转蒸发除去洗脱剂至干，用水复溶后置于真空冷冻干燥机，35℃冻干成粉末，20℃冻藏备用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 材料 1
1.1.1 实验材料 1
1.1.2 试剂1
1.1.3 设备2
1.2 实验方法2
1.2.1 玫瑰多酚的制备2
1.2.2模拟胃消化实验 3
1.2.3玫瑰多酚抑制被测菌株生物膜形成的检验3
1.2.4 DPPH自由基清除能力的测定3
1.2.5 ABTS自由基清除活性的测定3
1.2.6 铁离子还原力（FRAP）的测定4
1.2.7还原力测定4
1.2.8羟基自由基清除活性的测定4
2 结果与分析 5
2.1 玫瑰多酚的提取与分离纯化5
2.1.1 玫瑰多酚对致病菌生物膜形成的抑制作用5
2.2 玫瑰多酚的体外抗氧化活性研究 7
2.2.1 DPPH自由基清除活性 8
2.2.2 铁离子还原能力8
2.2.3 羟基自由基清除活性 8
3讨论9
致谢9
参考文献10
体外胃消化对玫瑰多酚生物活性的影响
引言
引言
人类对植物多酚的利用先于认识，最初只发现动物皮与某些植物用水一起浸泡后转变成革，而且这种革的特性来源于植物的“涩性”。真正认识这种植物的涩性物质则是在18世纪末期，并在1796年由Seguin首次提出“单
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宁”一词以表示植物水浸提物中能使生皮转变成革的“涩性”物质[1]。1962年Smith定义“单宁是分子量500～3000的能沉淀生物碱、明胶及蛋白质的水溶性酚类化合物”。之后，较多的工作集中于对植物单宁组分、结构以及基本性质的研究。后来人们发现，无论从化学、生物、药学等方面的活性作用，还是从应用领域来看，有效成分不仅仅限于上述定义中的“单宁”。1981年，Haslam根据单宁的分子结构及分子量提出“植物多酚”这一术语[2]。
多酚是一种植物内的天然成份，具有高抗氧化活性，它在植物体内的功能是帮助植物抵抗紫外线的侵害、对抗入侵植物体内的细菌、抑制植物体过度氧化作用[3]。早在很早之前，人们就习惯喝茶或咖啡来养生，不过那时候并不了解多酚的机能作用；现在，多酚已经被广泛运用到各种的保养品及保健食品上面，并且有各种植物萃取的多酚产品，来帮助人体体内或皮肤进行修复及保护的作用。
氧化损伤是导致许多慢性病，如心血管病，癌症和衰老的重要原因。多酚的抗氧化功能可以对这些慢性病起到预防作用。玫瑰多酚的抗氧化作用主要表现在：直接清除活性氧自由基，抑制脂质过氧化反应，整合金属离子，激活细胞内抗氧化防御系统[4]。
玫瑰多酚的抑菌作用已经被人们所认知。在众多的抗菌试验中，人们发现玫瑰多酚对大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌等许多致病菌，尤其是对胃肠道致病菌具有不同程度的抑制和杀伤作用[5]。玫瑰多酚的抗菌机制，主要有以下3种方式：①破坏细菌细胞膜的脂质层，使细菌发生形态学改变；②抑制有害细菌分泌毒素的活性；③抑制有害细菌的侵染。玫瑰多酚一方面对胃肠道内细菌有十分强大的杀伤和抑制作用，另一方面对肠道内有益菌却起着保护作用[6]。改善机体肠道内微生物结构，提高肠道免疫功能，对增进健康有积极作用。
细菌的生理特性受到种群密度及与其他微生物相互作用的极大影响，而附着性是其显著特征之一。单种的细菌的生物膜形成过程被认为是一种向多细胞生活方式发展的形式（有研究者将之比作组织）[7]。有机分子(主要是多糖和蛋白质)会在几分钟的之内覆盖于任何置于海水中的物体表面，形成一层临时性膜。细菌在物体表面定植的起始步骤，通常包括细菌向物体表面的移动和微粘度的改变，而微粘度的改变会引起细菌在靠近表面时移动性下降[8]。
本实验通过进行玫瑰多酚体外胃消化实验，检测玫瑰多酚在胃消化前后生物活性的变化，检测玫瑰多酚对各致病菌种生物膜清除能力以及玫瑰多酚抗氧化活性的改变，分析玫瑰多酚在经过体外胃消化之后，生物活性的变化。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 实验材料
玫瑰花蕾：购自南京市农贸市场。
大孔吸附树脂：HPD600购自郑州勤朴科技有限公司。
1．1．2 试剂
0.4mmol/L的1,1二苯基2三硝基苯肼（DPPH）溶液；10 mmol/L2,4,6三吡啶基三嗪（TPTZ）溶液；胃蛋白酶；LB培养基。
1．1．3 设备
SHBIII 循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司
Heidolph Laborota 4000真空旋转蒸发仪 德国Heidolph
电子天平 德国Sartoriius公司
Anke TDL5低速离心机 上海安亭科学仪器厂
DK8D型电热恒温水槽 上海森信实验仪器有限公司
Alpha1101m型可见分光光度计 上海谱元仪器有限公司
高压蒸汽灭菌器SX500 日本TOMY公司
1．1．4 实验菌株
紫色杆菌CV026：由美国德克萨斯州立大学Robert J. C. McLean教授惠赠。
铜绿假单胞菌PAO1：购自上海水产研究所。
沙门氏菌50013：购自江苏省中国疾病预防控制中心。
大肠杆菌ATCC8099：购自南京市疾病控制预防中心。
大肠杆菌O157：H7：购自南京市疾病控制预防中心。
1．2 实验方法
1．2．1?玫瑰多酚含量的测定
?? 取玫瑰花蕾，经中草药粉碎机粉碎后100目筛，所得粉末置于4℃保藏，备用。称取玫瑰花渣粉末5g，按照1：20的料液比加入提取剂后置于超声萃取仪中，50%乙醇水溶液作提取剂，超声处理30min，超声功率为250W，制备玫瑰花粗提物。
室温下，称取30g活化好的HPD600大孔树脂，用乙醇湿法装入16mm × 30cm的玻璃柱中，再用去60%乙醇水溶液等速洗脱。操作的工艺条件为上样流速1mL/min，上样量为200mL，洗脱速度1mL/min，洗脱剂用量为300mL。收集洗脱组分，旋转蒸发除去洗脱剂至干，用水复溶后置于真空冷冻干燥机，35℃冻干成粉末，20℃冻藏备用。
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