一种葡萄籽片中生物活性物质的测定.及其抗氧化活性研究.
摘要：葡萄籽有良好的抗氧化、抗肿瘤、抗过敏、降血压、降血脂的功效，是目前市场上比较受欢迎的保健品之一。本研究以某品牌保健品葡萄籽提取物为样品，测定其中的主要活性成分——原花青素和黄酮类化合物的含量及其抗氧化性。利用正丁醇盐酸法测定原花青素的含量，三氯化铝比色法测定总黄酮的含量，铁还原/抗氧化能力法，DPPH法及ABTS法对以上两种活性成分的抗氧化活性进行评价。结果表明样品中原花青素的含量为20.16g/100g，黄酮含量为0.65g/100g，相对标准偏差分别为3.11，2.01；抗氧化活性测定结果表明样品中两种生物活性物质的抗氧化能力均强于阳性对照VE，且有剂量依赖关系，说明原花青素和黄酮均有很强的抗氧化活性，是该保健品中的主要抗氧化活性成分。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 引言 1
2 材料与方法 2
2．1 材料与仪器 2
2．1．1 材料 2
2．1．2 仪器 3
2．2 生物活性物质的含量测定 3
2．2．1 活性物质的提取 3
2．2．2 原花青素含量测定 3
2．2．3 黄酮含量测定 3
2．3 生物活性物质的抗氧化活性评价 4
2．3．1 FRAP法评价抗氧化活性 4
2．3．2 DPPH法评价抗氧化活性 4
2．3．3 ABTS法评价抗氧化活性 4
3 结果与分析 5
3．1 原花青素的含量 5
3．2 黄酮的含量 5
3．3 原花青素抗氧化活性测定 5
3．3．1 FPAR法对样品中原花青素抗氧化活性评价结果 6
3．3．2 DPPH法对样品中原花青素抗氧化活性评价结果 6
3．3．3 ABTS法对样品中原花青素抗氧化活性评价结果 6
3．4 黄酮抗氧化活性测定 7
3．4．1 FPAR法对样品中黄酮抗氧化活性评价结果 7
3．4．2 DPPH法对样品中黄酮抗氧化活性评价结
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果 7
3．4．3 ABTS法对样品中黄酮抗氧化活性评价结果 8
4 讨论 8
致谢 9
参考文献： 10
一种葡萄籽片中生物活性物质的测定及其抗氧化活性研究
引言
1 引言
在我国，葡萄的种植面积和产量均居世界首位，其中葡萄籽占整颗葡萄4%6%的质量[1]，是葡萄酒等葡萄类产品的主要废弃物。近年来，有关葡萄籽的研究不断深入，其营养价值和保健价值被发现并加以利用。葡萄籽中含有丰富的营养物质，如蛋白质、氨基酸、矿物质、膳食纤维等多种营养素[2]，并且还含有很多功能性成分，如原花青素、黄酮、白藜芦醇、维生素[3]等,尤其是多酚的含量占有极高的比重[4]。这些成分使得葡萄籽具有抗氧化、抗肿瘤、降血压、降血脂等保健价值。
原花青素作为主要的功能性成分大量存在于葡萄籽中。原花青素（Proanthocyanidins，PC）一类由黄烷3,4二醇和黄烷3醇为基本单位的缩合单宁，有抗氧化、抗肿瘤、抗过敏、抑菌、降血压、降血脂等多种生物活性。黄烷3,4二醇与黄烷3醇之间可以缩合成二聚原花青素，二聚体有亲电性，可连续与黄烷3,4二醇结合，形成三聚体、四聚体、多聚体和高聚体[5]。目前有关原花青素的研究十分广泛，其含量测定、生物活性评价、应用等方面的研究均较为成熟。原花青素的提取主要有超临界萃取、酶解、溶剂提取等方法。分离主要有液相或固相萃取、柱层析、分子烙印、高速逆流色谱、微生物发酵等方法。检测主要有比色、蛋白质沉降、苄硫醇(或间苯三酚)酸降解、酶解降度等方法。其中比色法较为常用，具体有Folin酚法、PB法、芳香醛强酸法和正丁醇盐酸法等。但对于原花青素的研究也存在不足之处，比如许多植物的原花青素成分不明确，原花青素的结构、聚合度与其生物活性之间的关系仍有待研究。原花青素高聚体不易被人体利用，这类原花青素该如何经济有效的处理、利用仍是问题。在技术方面，如何高效地提取、分离纯化和检测原花青素，并将技术应用到工业生产中也亟待解决。
黄酮是葡萄籽中另一种功能性成分。黄酮类化合物（Flavonoids）以2苯基色原酮类为基本组成，由三碳链联结A、B芳环,以C6—C3—C6为基本结构的一类化合物；植物中黄酮大多数与糖结合形成甙，少数游离存在。按照C3成环和取代基的不同，黄酮类化合物共分为黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类等13种，另外还有4中以CC和COC方式连接的双黄酮类化合物。黄酮有多方面的生理功能,如止咳祛痰、改善心血管、抗菌、抗癌、抗氧化、镇痛等。黄酮的提取主要有溶剂萃取、碱溶酸沉、吸附、超临界提取、微波辅助提取、酶解等方法。分离纯化主要利用柱色谱、溶剂萃取、高效液相色谱等方法。测定主要有色谱法、比色法、核磁共振法、和质谱法等方法[6]。目前黄酮的研究如结构测定、提取分离、合成等都比较成熟。但有关黄酮的吸收和代谢机制、生理活性作用机理等还需更深入的研究。
原花青素和黄酮是葡萄籽中最主要的两类活性成分，二者最显著的活性为抗氧化活性。目前已有许多评价抗氧化剂抗氧化能力的方法，如抗脂质氧化、清除自由基、还原及螯合金属离子能力等方法。抗脂质氧化分解能力评价方法中有过氧化值法、硫氰酸铁法、共轭二烯法等。清除自由基能力评价方法中有超氧阴离子法、羟自由基清除法、DDPH法、ABTS法等。还原能力评价方法有铁离子还原法、总酚测定法等。螯合金属离子评价方法有铁离子螯合法、铜离子螯合法等。目前比较常用的的方法主要有FRAP法、DPPH法和ABTS法[7]。
本实验中测定样品中原花青素的含量采用正丁醇盐酸法，测定总黄酮的含量采用三氯化铝比色法，评价原花青素和黄酮的抗氧化活性采用铁还原/抗氧化能力法，DPPH法及ABTS法，以验证原花青素和黄酮是否为葡萄籽提取物产品中的主要抗氧化活性成分。
2 材料与方法
2．1 材料与仪器
2．1．1 材料
葡萄籽片（江苏天美健大自然生物工程有限公司）
甲醇 分析纯（南京化学试剂有限公司）
乙醇 分析纯（南京化学试剂有限公司）
正丁醇 分析纯（南京化学试剂有限公司）
盐酸 分析纯（南京化学试剂有限公司）
乙酸 分析纯（南京化学试剂有限公司）
十二水合硫酸铁铵（南京化学试剂有限公司）
乙酸钾（西陇化工股份有限公司）
三氯化铝（西陇化工股份有限公司）
六水合三氯化铁（西陇化工股份有限公司）
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 引言 1
2 材料与方法 2
2．1 材料与仪器 2
2．1．1 材料 2
2．1．2 仪器 3
2．2 生物活性物质的含量测定 3
2．2．1 活性物质的提取 3
2．2．2 原花青素含量测定 3
2．2．3 黄酮含量测定 3
2．3 生物活性物质的抗氧化活性评价 4
2．3．1 FRAP法评价抗氧化活性 4
2．3．2 DPPH法评价抗氧化活性 4
2．3．3 ABTS法评价抗氧化活性 4
3 结果与分析 5
3．1 原花青素的含量 5
3．2 黄酮的含量 5
3．3 原花青素抗氧化活性测定 5
3．3．1 FPAR法对样品中原花青素抗氧化活性评价结果 6
3．3．2 DPPH法对样品中原花青素抗氧化活性评价结果 6
3．3．3 ABTS法对样品中原花青素抗氧化活性评价结果 6
3．4 黄酮抗氧化活性测定 7
3．4．1 FPAR法对样品中黄酮抗氧化活性评价结果 7
3．4．2 DPPH法对样品中黄酮抗氧化活性评价结
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
果 7
3．4．3 ABTS法对样品中黄酮抗氧化活性评价结果 8
4 讨论 8
致谢 9
参考文献： 10
一种葡萄籽片中生物活性物质的测定及其抗氧化活性研究
引言
1 引言
在我国，葡萄的种植面积和产量均居世界首位，其中葡萄籽占整颗葡萄4%6%的质量[1]，是葡萄酒等葡萄类产品的主要废弃物。近年来，有关葡萄籽的研究不断深入，其营养价值和保健价值被发现并加以利用。葡萄籽中含有丰富的营养物质，如蛋白质、氨基酸、矿物质、膳食纤维等多种营养素[2]，并且还含有很多功能性成分，如原花青素、黄酮、白藜芦醇、维生素[3]等,尤其是多酚的含量占有极高的比重[4]。这些成分使得葡萄籽具有抗氧化、抗肿瘤、降血压、降血脂等保健价值。
原花青素作为主要的功能性成分大量存在于葡萄籽中。原花青素（Proanthocyanidins，PC）一类由黄烷3,4二醇和黄烷3醇为基本单位的缩合单宁，有抗氧化、抗肿瘤、抗过敏、抑菌、降血压、降血脂等多种生物活性。黄烷3,4二醇与黄烷3醇之间可以缩合成二聚原花青素，二聚体有亲电性，可连续与黄烷3,4二醇结合，形成三聚体、四聚体、多聚体和高聚体[5]。目前有关原花青素的研究十分广泛，其含量测定、生物活性评价、应用等方面的研究均较为成熟。原花青素的提取主要有超临界萃取、酶解、溶剂提取等方法。分离主要有液相或固相萃取、柱层析、分子烙印、高速逆流色谱、微生物发酵等方法。检测主要有比色、蛋白质沉降、苄硫醇(或间苯三酚)酸降解、酶解降度等方法。其中比色法较为常用，具体有Folin酚法、PB法、芳香醛强酸法和正丁醇盐酸法等。但对于原花青素的研究也存在不足之处，比如许多植物的原花青素成分不明确，原花青素的结构、聚合度与其生物活性之间的关系仍有待研究。原花青素高聚体不易被人体利用，这类原花青素该如何经济有效的处理、利用仍是问题。在技术方面，如何高效地提取、分离纯化和检测原花青素，并将技术应用到工业生产中也亟待解决。
黄酮是葡萄籽中另一种功能性成分。黄酮类化合物（Flavonoids）以2苯基色原酮类为基本组成，由三碳链联结A、B芳环,以C6—C3—C6为基本结构的一类化合物；植物中黄酮大多数与糖结合形成甙，少数游离存在。按照C3成环和取代基的不同，黄酮类化合物共分为黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类等13种，另外还有4中以CC和COC方式连接的双黄酮类化合物。黄酮有多方面的生理功能,如止咳祛痰、改善心血管、抗菌、抗癌、抗氧化、镇痛等。黄酮的提取主要有溶剂萃取、碱溶酸沉、吸附、超临界提取、微波辅助提取、酶解等方法。分离纯化主要利用柱色谱、溶剂萃取、高效液相色谱等方法。测定主要有色谱法、比色法、核磁共振法、和质谱法等方法[6]。目前黄酮的研究如结构测定、提取分离、合成等都比较成熟。但有关黄酮的吸收和代谢机制、生理活性作用机理等还需更深入的研究。
原花青素和黄酮是葡萄籽中最主要的两类活性成分，二者最显著的活性为抗氧化活性。目前已有许多评价抗氧化剂抗氧化能力的方法，如抗脂质氧化、清除自由基、还原及螯合金属离子能力等方法。抗脂质氧化分解能力评价方法中有过氧化值法、硫氰酸铁法、共轭二烯法等。清除自由基能力评价方法中有超氧阴离子法、羟自由基清除法、DDPH法、ABTS法等。还原能力评价方法有铁离子还原法、总酚测定法等。螯合金属离子评价方法有铁离子螯合法、铜离子螯合法等。目前比较常用的的方法主要有FRAP法、DPPH法和ABTS法[7]。
本实验中测定样品中原花青素的含量采用正丁醇盐酸法，测定总黄酮的含量采用三氯化铝比色法，评价原花青素和黄酮的抗氧化活性采用铁还原/抗氧化能力法，DPPH法及ABTS法，以验证原花青素和黄酮是否为葡萄籽提取物产品中的主要抗氧化活性成分。
2 材料与方法
2．1 材料与仪器
2．1．1 材料
葡萄籽片（江苏天美健大自然生物工程有限公司）
甲醇 分析纯（南京化学试剂有限公司）
乙醇 分析纯（南京化学试剂有限公司）
正丁醇 分析纯（南京化学试剂有限公司）
盐酸 分析纯（南京化学试剂有限公司）
乙酸 分析纯（南京化学试剂有限公司）
十二水合硫酸铁铵（南京化学试剂有限公司）
乙酸钾（西陇化工股份有限公司）
三氯化铝（西陇化工股份有限公司）
六水合三氯化铁（西陇化工股份有限公司）
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