人参花多糖的超声提取及抗氧化能力的研究
人参花多糖的超声提取及抗氧化能力的研究[20200509182352]
摘要：近年来从人参花蕾中提取出的有效成分，表明皂苷含量多于人参其余各部，从而引起了对人参花中多糖的研究。本实验首先通过单因素试验研究超声功率、超声时间以及超声料液比，确定相对较优的参数，然后通过响应面分析方法确定最佳参数。将提取出的粗多糖及不同浓度的NaCl洗脱冻干样品分别配制成五种浓度。首先通过电镜扫描和红外光谱分析确定形态和结构组成，然后通过不同的实验方案，测定多糖的金属离子螯合能力，清除羟自由基的能力，对DPPH·自由基的清除能力，对超氧阴离子的清除能力。同时以维生素C（抗坏血酸）为阳性对照，以微孔板为反应容器，通过酶标仪测得吸光度，换算成清除率或螯合率。整理成散点曲线图，观察趋势走向。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
关键字:人参花多糖；单因素分析；响应面；抗氧化活性；自由基
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法Y
1.1 材料与试剂 Y
1.2 仪器与装备 Y
1.3 方法 Y
1.3.1 超声提取人参花多糖Y
1.3.1.1 单因素试验Y
1.3.1.2 响应面法优化超声提取人参花多糖工艺 Y
1.3.2 人参花多糖抗氧化能力的研究 Y
1.3.2.1人参花多糖的电镜扫描Y
1.3.2.2人参花多糖的结构表征Y
1.3.2.3人参花多糖的抗氧化能力分析 Y
2 结果与分析Y
2.1 单因素试验Y
2.1.1超声功率对人参花多糖提取率的影响Y
2.1.2超声时间对人参花多糖提取率的影响Y
2.1.3超声料液比对人参花多糖提取率的影响Y
2.2 响应面法优化提取条件Y
2.2.1 Box-Behnken实验设计方案及结果Y
2.2.2建立模型及检验Y
2.2.3因素水平优化 Y
2.3 人参花多糖抗氧化能力的研究Y
2.3.1人参花多糖的电镜扫描图片Y
2.3.2人参花多糖的结构表征Y
2.3.3人参花多糖抗氧化能力的分析Y
2.3.3.1 DDPH自由基清除活性测定结果 Y
2.3.3.2 清除超氧阴离子自由基活性测定结果Y
2.3.3.3 清除羟自由基的活性测定结果Y
2.3.3.4金属离子螯合能力测定结果 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
Y
3 讨论与小结 Y
致谢Y
参考文献Y
人参花多糖的超声提取及抗氧化能力的研究
班级：食品科学与工程101 姓名：刘丹
引言
引言：近年来从人参花蕾中提取出的有效成分，表明皂苷含量多于人参其余各部，因此人参花蕾的药用价值值得关注。目前从人参花中所提取出的人参花水溶性粗多糖GFL经过DEAE-Cellulose柱层析分级，分别用纯水，0.1M，0.2M，0.3M，0.5M的NaCl洗脱。冻干后分别记为0，0.1，0.2，0.3，0.5；加上粗多糖及阳性对照抗坏血酸Vc，本实验共有样品七组。参考其他论文，将七组样品分别配置成4000ug/ml，2000ug/ml，1000ug/ml，500ug/ml，250ug/ml五个浓度。多糖普遍活性有：调节免疫功能、抗肿瘤作用、抗病毒活性、降血糖功能、抗氧化、抗疲劳功能、清除自由基抗衰老功能、抗慢性肝炎作用、对血脂的调节作用等。
人类对衰老的研究已经有2000多年的历史，迄今有超过100多种不同的衰老学说，其中以1956年Johnson JE 及Harman D的衰老自由基说最具有广阔的前景，主要依据是体内自由基的产生和消失处于动态平衡，一旦失衡即趋于老化，最终导致衰老[1]。为了延缓衰老，人工研究和合成的多种抗氧化剂如丁基羟基茴香醚（BHA）、二叔丁基对甲酚（BHT）、没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）等。但是这些人工合成的抗氧化剂对人体有一定的副作用，所以需要我们去寻找天然的有效的多糖。
研究表明，多糖具有清除自由基和抗氧化的活性[2,3]，而多糖又是一种天然、安全的物质，因此可以合理有效地开发利用多糖，更好地为人类服务。鉴于此，本文对人参花多糖的体外抗氧化活性进行了研究。
国内外目前对人参花的研究主要以皂甙为主，从1976年Yahara等从人参花蕾中分离出三种皂甙Rd、Re、Rg[4] 后，多人把目光放在皂甙之上，其中包括皂甙的分离和一些动物体研究实验，对人参花多糖的研究较少，在人参花多糖提取实验中也多以水溶性提取为主，因此本文对人参花的超声提取进行研究，确定最佳的超声条件，并对超声后多糖的抗氧化能力进行研究。
随着近些年研究的深入,人们已经发现多糖具有许多生物活性作用。它不仅能激活巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞等免疫细胞，还能促进细胞因子生成，活化补体，从而在抗病毒、抗肿瘤以及抗衰老等方面具有有效的、独特的功效。目前人们已成功地从植物中提取出多种多糖，并广泛地应用于医药和保健食品的研究和开发中[5]，所以对于人参花多糖的研究具有广阔的市场前景。
1 材料与方法
1．1材料与试剂
人参花（选择当年采购，无霉变、无损伤的人参花）、无水乙醇（分析纯）、氯仿、正丁醇、氯化钠、抗坏血酸、无水乙醇、DPPH、蒸馏水、NaH2PO42H2O 、Na2HPO412H2O、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、还原型辅酶(NADH)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)、PBS、邻二氮菲、FeSO47H2O、H2O2（30%）、FeCl34H2O（M：198.83）、菲洛嗪。
1．2仪器与装备
装备：中草药粉碎机、电子天平、超声细胞粉碎机 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
、离心机、旋转蒸发仪、冻干机、通风橱、柱子和收集器、酶标仪、冰箱
仪器：微孔板、枪头、玻璃棒、离心管、计时器、称量勺、天平、容量瓶、量筒、称量纸、烧杯、移液枪、胶头滴管、冰盒、锥形瓶。
1． 3方法
1.3.1超声提取人参花多糖
1.3.1.1单因素试验
确定影响超声提取人参花多糖的四因素试验的基本参数为料液比1：20（g/ml）、提取时间20min、超升功率600W，改变其中一个因素，固定另外两个因素，在冰浴下进行单因素试验。
1.3.1.2响应面法优化超声提取人参花多糖工艺
响应面分析法是利用合理的设计并通过试验得到一定数据，采用多元二次逐步回归
方差拟合因素与响应面值之间的函数关系，采用回归方程分析寻找最佳工艺参数，解决多变量问题的一种统计方法[6]。试验在单因素试验结果基础上，以料液比、提取时间、超升功率为参考变量，以提取率为响应值，采用响应面分析方法求取优化的工艺参数。
1.3.2人参花多糖抗氧化能力的研究
人参花多糖抗氧化能力分析主要是将人参花超声提取后，用分析纯提取多糖，并悬蒸掉有机溶剂，用冻干设备冻干后配置成一定浓度的溶液，用Sevage试剂脱蛋白，脱蛋白五次后再次悬蒸冻干，分别用蒸馏水，0.1mol/l、0.2 mol/l、0.3 mol/l、0.5 mol/l的氯化钠溶液进行洗脱，分批次进行洗脱后将同一浓度氯化钠的洗脱液进行浓缩，最后进行冻干得到样品。
1.3.2.1人参花多糖的电镜扫描
对不同浓度氯化钠溶液洗脱的人参花多糖样品进行电镜扫描，观测其形态结构。
1.3.2.2人参花多糖的结构表征
对不同浓度氯化钠溶液洗脱的人参花多糖样品进行红外线扫描，观测红外光谱，分析样品的多糖组成。
2.1.2超声时间对人参花多糖提取率的影响
图二 超声提取时间对人参花多糖提取率的影响
从图二可以看出，提取时间在10-30min内，提取率随着时间的延长而显著提高，在20min提取率达到最大值，这表明人参花多糖的提取过程与时间密切相关，提取时间较短时，产物不充分溶解；时间过长，大分子多糖在超声波的强剪切作用下发生断裂，在后期处理时出现损失现象，影响提取效果。因此最佳提取时间在20min附近，选取20min为自变量提取时间的零水平(B)。
摘要：近年来从人参花蕾中提取出的有效成分，表明皂苷含量多于人参其余各部，从而引起了对人参花中多糖的研究。本实验首先通过单因素试验研究超声功率、超声时间以及超声料液比，确定相对较优的参数，然后通过响应面分析方法确定最佳参数。将提取出的粗多糖及不同浓度的NaCl洗脱冻干样品分别配制成五种浓度。首先通过电镜扫描和红外光谱分析确定形态和结构组成，然后通过不同的实验方案，测定多糖的金属离子螯合能力，清除羟自由基的能力，对DPPH·自由基的清除能力，对超氧阴离子的清除能力。同时以维生素C（抗坏血酸）为阳性对照，以微孔板为反应容器，通过酶标仪测得吸光度，换算成清除率或螯合率。整理成散点曲线图，观察趋势走向。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
关键字:人参花多糖；单因素分析；响应面；抗氧化活性；自由基
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法Y
1.1 材料与试剂 Y
1.2 仪器与装备 Y
1.3 方法 Y
1.3.1 超声提取人参花多糖Y
1.3.1.1 单因素试验Y
1.3.1.2 响应面法优化超声提取人参花多糖工艺 Y
1.3.2 人参花多糖抗氧化能力的研究 Y
1.3.2.1人参花多糖的电镜扫描Y
1.3.2.2人参花多糖的结构表征Y
1.3.2.3人参花多糖的抗氧化能力分析 Y
2 结果与分析Y
2.1 单因素试验Y
2.1.1超声功率对人参花多糖提取率的影响Y
2.1.2超声时间对人参花多糖提取率的影响Y
2.1.3超声料液比对人参花多糖提取率的影响Y
2.2 响应面法优化提取条件Y
2.2.1 Box-Behnken实验设计方案及结果Y
2.2.2建立模型及检验Y
2.2.3因素水平优化 Y
2.3 人参花多糖抗氧化能力的研究Y
2.3.1人参花多糖的电镜扫描图片Y
2.3.2人参花多糖的结构表征Y
2.3.3人参花多糖抗氧化能力的分析Y
2.3.3.1 DDPH自由基清除活性测定结果 Y
2.3.3.2 清除超氧阴离子自由基活性测定结果Y
2.3.3.3 清除羟自由基的活性测定结果Y
2.3.3.4金属离子螯合能力测定结果 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
Y
3 讨论与小结 Y
致谢Y
参考文献Y
人参花多糖的超声提取及抗氧化能力的研究
班级：食品科学与工程101 姓名：刘丹
引言
引言：近年来从人参花蕾中提取出的有效成分，表明皂苷含量多于人参其余各部，因此人参花蕾的药用价值值得关注。目前从人参花中所提取出的人参花水溶性粗多糖GFL经过DEAE-Cellulose柱层析分级，分别用纯水，0.1M，0.2M，0.3M，0.5M的NaCl洗脱。冻干后分别记为0，0.1，0.2，0.3，0.5；加上粗多糖及阳性对照抗坏血酸Vc，本实验共有样品七组。参考其他论文，将七组样品分别配置成4000ug/ml，2000ug/ml，1000ug/ml，500ug/ml，250ug/ml五个浓度。多糖普遍活性有：调节免疫功能、抗肿瘤作用、抗病毒活性、降血糖功能、抗氧化、抗疲劳功能、清除自由基抗衰老功能、抗慢性肝炎作用、对血脂的调节作用等。
人类对衰老的研究已经有2000多年的历史，迄今有超过100多种不同的衰老学说，其中以1956年Johnson JE 及Harman D的衰老自由基说最具有广阔的前景，主要依据是体内自由基的产生和消失处于动态平衡，一旦失衡即趋于老化，最终导致衰老[1]。为了延缓衰老，人工研究和合成的多种抗氧化剂如丁基羟基茴香醚（BHA）、二叔丁基对甲酚（BHT）、没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）等。但是这些人工合成的抗氧化剂对人体有一定的副作用，所以需要我们去寻找天然的有效的多糖。
研究表明，多糖具有清除自由基和抗氧化的活性[2,3]，而多糖又是一种天然、安全的物质，因此可以合理有效地开发利用多糖，更好地为人类服务。鉴于此，本文对人参花多糖的体外抗氧化活性进行了研究。
国内外目前对人参花的研究主要以皂甙为主，从1976年Yahara等从人参花蕾中分离出三种皂甙Rd、Re、Rg[4] 后，多人把目光放在皂甙之上，其中包括皂甙的分离和一些动物体研究实验，对人参花多糖的研究较少，在人参花多糖提取实验中也多以水溶性提取为主，因此本文对人参花的超声提取进行研究，确定最佳的超声条件，并对超声后多糖的抗氧化能力进行研究。
随着近些年研究的深入,人们已经发现多糖具有许多生物活性作用。它不仅能激活巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞等免疫细胞，还能促进细胞因子生成，活化补体，从而在抗病毒、抗肿瘤以及抗衰老等方面具有有效的、独特的功效。目前人们已成功地从植物中提取出多种多糖，并广泛地应用于医药和保健食品的研究和开发中[5]，所以对于人参花多糖的研究具有广阔的市场前景。
1 材料与方法
1．1材料与试剂
人参花（选择当年采购，无霉变、无损伤的人参花）、无水乙醇（分析纯）、氯仿、正丁醇、氯化钠、抗坏血酸、无水乙醇、DPPH、蒸馏水、NaH2PO42H2O 、Na2HPO412H2O、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、还原型辅酶(NADH)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)、PBS、邻二氮菲、FeSO47H2O、H2O2（30%）、FeCl34H2O（M：198.83）、菲洛嗪。
1．2仪器与装备
装备：中草药粉碎机、电子天平、超声细胞粉碎机 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
、离心机、旋转蒸发仪、冻干机、通风橱、柱子和收集器、酶标仪、冰箱
仪器：微孔板、枪头、玻璃棒、离心管、计时器、称量勺、天平、容量瓶、量筒、称量纸、烧杯、移液枪、胶头滴管、冰盒、锥形瓶。
1． 3方法
1.3.1超声提取人参花多糖
1.3.1.1单因素试验
确定影响超声提取人参花多糖的四因素试验的基本参数为料液比1：20（g/ml）、提取时间20min、超升功率600W，改变其中一个因素，固定另外两个因素，在冰浴下进行单因素试验。
1.3.1.2响应面法优化超声提取人参花多糖工艺
响应面分析法是利用合理的设计并通过试验得到一定数据，采用多元二次逐步回归
方差拟合因素与响应面值之间的函数关系，采用回归方程分析寻找最佳工艺参数，解决多变量问题的一种统计方法[6]。试验在单因素试验结果基础上，以料液比、提取时间、超升功率为参考变量，以提取率为响应值，采用响应面分析方法求取优化的工艺参数。
1.3.2人参花多糖抗氧化能力的研究
人参花多糖抗氧化能力分析主要是将人参花超声提取后，用分析纯提取多糖，并悬蒸掉有机溶剂，用冻干设备冻干后配置成一定浓度的溶液，用Sevage试剂脱蛋白，脱蛋白五次后再次悬蒸冻干，分别用蒸馏水，0.1mol/l、0.2 mol/l、0.3 mol/l、0.5 mol/l的氯化钠溶液进行洗脱，分批次进行洗脱后将同一浓度氯化钠的洗脱液进行浓缩，最后进行冻干得到样品。
1.3.2.1人参花多糖的电镜扫描
对不同浓度氯化钠溶液洗脱的人参花多糖样品进行电镜扫描，观测其形态结构。
1.3.2.2人参花多糖的结构表征
对不同浓度氯化钠溶液洗脱的人参花多糖样品进行红外线扫描，观测红外光谱，分析样品的多糖组成。
2.1.2超声时间对人参花多糖提取率的影响
图二 超声提取时间对人参花多糖提取率的影响
从图二可以看出，提取时间在10-30min内，提取率随着时间的延长而显著提高，在20min提取率达到最大值，这表明人参花多糖的提取过程与时间密切相关，提取时间较短时，产物不充分溶解；时间过长，大分子多糖在超声波的强剪切作用下发生断裂，在后期处理时出现损失现象，影响提取效果。因此最佳提取时间在20min附近，选取20min为自变量提取时间的零水平(B)。
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