叶菜类胡萝卜素含量测定研究
叶菜类胡萝卜素含量测定研究[20200509183606]
摘要：用纸层析法对五个不同菜市场的空心菜、小白菜、香菜、菠菜、韭菜提取其中的胡萝卜素，并对胡萝卜素含量进行测定。得出样品中胡萝卜素含量：空心菜为4272μg/100g，小白菜为3072μg/100g，香菜为2716.5μg/100g，菠菜为4089μg/100g，韭菜为3042μg/100g。实验结果表明：纸层析法测定样品中的胡萝卜素含量具有较高的准确性和精确度，操作方便，易于掌握。
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关键字:纸层析；胡萝卜素；测定
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 材料 1
1.2 方法 2
1.2.1 试样预处理2
1.2.2 皂化2
1.2.3 洗涤2
1.2.4 浓缩与定容2
1.2.5 纸层析2
1.2.6 测定2
1.2.7 标准工作曲线绘制2
1.2.8 结果计算3
2 结果与分析3
2.1 β胡萝卜素标准贮备液3
2.2 标准工作曲线3
2.3 样品胡萝卜素含量4
3 讨论 7
致谢7
参考文献7
图一 胡萝卜素标准曲线图3
图二 空心菜的平均吸光值柱形图4
图三 小白菜的平均吸光值柱形图5
图四 香菜的平均吸光值柱形图5
图五 菠菜的平均吸光值柱形图6
图六 韭菜的平均吸光值柱形图6
表七 样品中胡萝卜素含量7
表八 胡萝卜素含量对比7
叶菜类胡萝卜素含量测定研究
引言
引言 胡萝卜素是一种重要的天然色素，存在于有色植物中，有α、β、γ等几种异构体。由于天然胡萝卜素具有合成品所没有的独有特性[1-9]。近年来，由于β胡萝卜素在防癌、抗癌方面的显著作用，使得胡萝卜素的研究更趋重要[10]。目前，对植物性食品中的胡萝卜素含量的测定，可以用生物学鉴定法、溶剂分配法和层析法[11]。50年代色层分析测定胡萝卜素已成为 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
世界广泛采用，中国医学科学院当时亦采用柱层析法[12]。直至1975年，AOAC仍为柱层析法[13]，但已不断改进。1952年Bauer曾提出类胡萝卜素的纸上层析[14]。纸上层析比柱层析更为简便。柱层析法操作复杂，时间长，本实验采用纸层析法对胡萝卜素的含量进行测定。
1 材料与方法
1．1 材料
空心菜，小白菜，香菜，菠菜，韭菜（五个样品购于南农西门菜市场、南农北门苏果社区店、沃尔玛新街口店、家乐福大行宫店、瑞金路菜市场）
试剂：石油醚（沸程30℃~60℃）：同时是展开剂；氢氧化钾溶液（1+1）：取50g氢氧化钾溶于50mL水；无水乙醇：不得含有醛类物质；无水硫酸钠
β-胡萝卜素标准溶液
β-胡萝卜素标准贮备液：准确称取50.0mgβ胡萝卜素标准品，溶于100.0ml三氯甲烷中，浓度约为500μg/ml，准确测其浓度。标定浓度的方法如下：
取标准贮备液10.0μL，加正己烷3.00mL，混匀。测其吸光度值，比色杯厚度为1cm，以正己烷为空白，射入波长450nm，平行测定三份，取均值。
按公式计算溶液浓度：
式中：
X——胡萝卜素标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）；
A——吸光度值；
E——β胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度1cm，溶液浓度为1mg/L的吸光系数，为0.2638。
3.01/0.01——测定过程中稀释倍数的换算系数。
β-胡萝卜素标准使用液：将以标定的标准液用石油醚准确稀释10倍，使每毫升溶液相当于50μg，避光保存于冰箱中。
仪器：玻璃层析缸；分光光度计（UV-120-02）；旋转蒸发仪：具配套150ml球形瓶；恒温水浴锅；皂化回馏装置；滤纸：18cm×30cm.定性，快速或中速。
1．2 方法
1．2．1 试样预处理 取可食部用水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，切碎，用匀浆器制成匀浆，贮于塑料瓶中，冰箱内保存备用。
1．2．2 皂化 蔬菜、水果中的类胡萝卜素主要以脂肪酸酯的形式存在，其酯化程度依叶黄素中羟基数目的多少而变化。单羟基类胡萝卜素，如β-隐黄质，以游离状态或单酯形式存在；双羟基类胡萝卜素，如黄体素和玉米黄质，可以以游离状态存在。用于胡萝卜素定量分析的方法首先都要对提取液进行皂化处理。取适量样品<10g（各5g），加脱醛乙醇30ml，再加10ml 1+1氢氧化钾溶液，回流加热30min，然后用冰水使之迅速冷却，皂化后样品用石油醚提取，直至提取液无色为止，每次提取石油醚用量为15ml-25ml。
1．2．3 洗涤 取将提取液静置分层，弃去下层水溶液，反复用5%硫酸钠溶液振摇洗涤，每次约15ml，直至下层水溶液清亮为止。 将皂化后样品提取液用水洗涤至中性。 将提取液通过盛有10g无水硫酸钠的小漏斗，漏入球形瓶，用少量石油醚分数次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤液并入球形瓶内。
1．2．4 浓缩与定容 将上述球形瓶内的提取液于旋转蒸发器上减压蒸发，水浴温度为60℃，蒸发至约1ml时，取下球形瓶，吹干，立即加入2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
.00ml石油醚定容（定容体积为15ml），备层析用。
1．2．5 纸层析
1．2．5．1 点样 在18cm×30cm滤纸下端距底边4cm处做一基线，在基线上取A、B、C、D四点，吸取0.400ml浓缩液在AB和CD间迅速点样。
1．2．5．2 展开 待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于预先用石油醚饱和的层析缸中，进行上行展开。
1．2．5．3 洗脱 待胡萝卜素与其他色素完全分开后，取出滤纸，自然挥发干石油醚，将位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带剪下，立即放入盛有5ml石油醚的具塞试管中，用力振摇，使胡萝卜素完全溶入试剂中。
1．2．6 测定 用1cm比色杯，以石油醚调零点，于450nm波长下，测吸光度值，以其值从标准曲线上查出β-胡萝卜素的含量，供计算时使用。
1．2．7 标准工作曲线绘制 取β-胡萝卜素标准使用液（浓度为50μg/ml）1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00ml，分别置于100ml具塞锥形瓶中，按样品测定步骤进行提取、洗涤、纸层析等操作，点样体积为0.100ml，标准曲线各点胡萝卜素含量依次为2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00μg。以胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1．2．8 结果计算 为试样中胡萝卜素含量按公式计算
试中：
X——试样中胡萝卜素的含量（以β-胡萝卜素计），单位为微克每百克（μg/100g）
M1——在标准曲线上查得的胡萝卜素质量，单位为微克（μg）
V1——点样体积，单位为毫升（ml）
V2——试样提取液浓缩后的定容体积，单位为毫升（ml）
M——试样质量，单位为克（g）
计算结果保留三位有效数字。
2 结果与分析
小白菜5 0.0918 0.0906 0.0912 0.0912 0.0003464
摘要：用纸层析法对五个不同菜市场的空心菜、小白菜、香菜、菠菜、韭菜提取其中的胡萝卜素，并对胡萝卜素含量进行测定。得出样品中胡萝卜素含量：空心菜为4272μg/100g，小白菜为3072μg/100g，香菜为2716.5μg/100g，菠菜为4089μg/100g，韭菜为3042μg/100g。实验结果表明：纸层析法测定样品中的胡萝卜素含量具有较高的准确性和精确度，操作方便，易于掌握。
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关键字:纸层析；胡萝卜素；测定
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Abstract1
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引言1
1 材料与方法1
1.1 材料 1
1.2 方法 2
1.2.1 试样预处理2
1.2.2 皂化2
1.2.3 洗涤2
1.2.4 浓缩与定容2
1.2.5 纸层析2
1.2.6 测定2
1.2.7 标准工作曲线绘制2
1.2.8 结果计算3
2 结果与分析3
2.1 β胡萝卜素标准贮备液3
2.2 标准工作曲线3
2.3 样品胡萝卜素含量4
3 讨论 7
致谢7
参考文献7
图一 胡萝卜素标准曲线图3
图二 空心菜的平均吸光值柱形图4
图三 小白菜的平均吸光值柱形图5
图四 香菜的平均吸光值柱形图5
图五 菠菜的平均吸光值柱形图6
图六 韭菜的平均吸光值柱形图6
表七 样品中胡萝卜素含量7
表八 胡萝卜素含量对比7
叶菜类胡萝卜素含量测定研究
引言
引言 胡萝卜素是一种重要的天然色素，存在于有色植物中，有α、β、γ等几种异构体。由于天然胡萝卜素具有合成品所没有的独有特性[1-9]。近年来，由于β胡萝卜素在防癌、抗癌方面的显著作用，使得胡萝卜素的研究更趋重要[10]。目前，对植物性食品中的胡萝卜素含量的测定，可以用生物学鉴定法、溶剂分配法和层析法[11]。50年代色层分析测定胡萝卜素已成为 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
世界广泛采用，中国医学科学院当时亦采用柱层析法[12]。直至1975年，AOAC仍为柱层析法[13]，但已不断改进。1952年Bauer曾提出类胡萝卜素的纸上层析[14]。纸上层析比柱层析更为简便。柱层析法操作复杂，时间长，本实验采用纸层析法对胡萝卜素的含量进行测定。
1 材料与方法
1．1 材料
空心菜，小白菜，香菜，菠菜，韭菜（五个样品购于南农西门菜市场、南农北门苏果社区店、沃尔玛新街口店、家乐福大行宫店、瑞金路菜市场）
试剂：石油醚（沸程30℃~60℃）：同时是展开剂；氢氧化钾溶液（1+1）：取50g氢氧化钾溶于50mL水；无水乙醇：不得含有醛类物质；无水硫酸钠
β-胡萝卜素标准溶液
β-胡萝卜素标准贮备液：准确称取50.0mgβ胡萝卜素标准品，溶于100.0ml三氯甲烷中，浓度约为500μg/ml，准确测其浓度。标定浓度的方法如下：
取标准贮备液10.0μL，加正己烷3.00mL，混匀。测其吸光度值，比色杯厚度为1cm，以正己烷为空白，射入波长450nm，平行测定三份，取均值。
按公式计算溶液浓度：
式中：
X——胡萝卜素标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）；
A——吸光度值；
E——β胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度1cm，溶液浓度为1mg/L的吸光系数，为0.2638。
3.01/0.01——测定过程中稀释倍数的换算系数。
β-胡萝卜素标准使用液：将以标定的标准液用石油醚准确稀释10倍，使每毫升溶液相当于50μg，避光保存于冰箱中。
仪器：玻璃层析缸；分光光度计（UV-120-02）；旋转蒸发仪：具配套150ml球形瓶；恒温水浴锅；皂化回馏装置；滤纸：18cm×30cm.定性，快速或中速。
1．2 方法
1．2．1 试样预处理 取可食部用水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，切碎，用匀浆器制成匀浆，贮于塑料瓶中，冰箱内保存备用。
1．2．2 皂化 蔬菜、水果中的类胡萝卜素主要以脂肪酸酯的形式存在，其酯化程度依叶黄素中羟基数目的多少而变化。单羟基类胡萝卜素，如β-隐黄质，以游离状态或单酯形式存在；双羟基类胡萝卜素，如黄体素和玉米黄质，可以以游离状态存在。用于胡萝卜素定量分析的方法首先都要对提取液进行皂化处理。取适量样品<10g（各5g），加脱醛乙醇30ml，再加10ml 1+1氢氧化钾溶液，回流加热30min，然后用冰水使之迅速冷却，皂化后样品用石油醚提取，直至提取液无色为止，每次提取石油醚用量为15ml-25ml。
1．2．3 洗涤 取将提取液静置分层，弃去下层水溶液，反复用5%硫酸钠溶液振摇洗涤，每次约15ml，直至下层水溶液清亮为止。 将皂化后样品提取液用水洗涤至中性。 将提取液通过盛有10g无水硫酸钠的小漏斗，漏入球形瓶，用少量石油醚分数次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤液并入球形瓶内。
1．2．4 浓缩与定容 将上述球形瓶内的提取液于旋转蒸发器上减压蒸发，水浴温度为60℃，蒸发至约1ml时，取下球形瓶，吹干，立即加入2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
.00ml石油醚定容（定容体积为15ml），备层析用。
1．2．5 纸层析
1．2．5．1 点样 在18cm×30cm滤纸下端距底边4cm处做一基线，在基线上取A、B、C、D四点，吸取0.400ml浓缩液在AB和CD间迅速点样。
1．2．5．2 展开 待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于预先用石油醚饱和的层析缸中，进行上行展开。
1．2．5．3 洗脱 待胡萝卜素与其他色素完全分开后，取出滤纸，自然挥发干石油醚，将位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带剪下，立即放入盛有5ml石油醚的具塞试管中，用力振摇，使胡萝卜素完全溶入试剂中。
1．2．6 测定 用1cm比色杯，以石油醚调零点，于450nm波长下，测吸光度值，以其值从标准曲线上查出β-胡萝卜素的含量，供计算时使用。
1．2．7 标准工作曲线绘制 取β-胡萝卜素标准使用液（浓度为50μg/ml）1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00ml，分别置于100ml具塞锥形瓶中，按样品测定步骤进行提取、洗涤、纸层析等操作，点样体积为0.100ml，标准曲线各点胡萝卜素含量依次为2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00μg。以胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1．2．8 结果计算 为试样中胡萝卜素含量按公式计算
试中：
X——试样中胡萝卜素的含量（以β-胡萝卜素计），单位为微克每百克（μg/100g）
M1——在标准曲线上查得的胡萝卜素质量，单位为微克（μg）
V1——点样体积，单位为毫升（ml）
V2——试样提取液浓缩后的定容体积，单位为毫升（ml）
M——试样质量，单位为克（g）
计算结果保留三位有效数字。
2 结果与分析
小白菜5 0.0918 0.0906 0.0912 0.0912 0.0003464
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