生鲜禽肉中金黄色葡萄球菌微生物学特性研究
摘要：生鲜鸡肉是指经严格检疫检验合格的活禽被屠宰后温度迅速降至8℃，12 h内降至4℃，并在后续加工、运输和销售过程中始终保持0-4℃之间的鸡肉类产品。由于经过了一定时间的冷却，鸡肉经充分解僵成熟，且始终处于低温，故其在卫生、口感方面优于冻鸡肉，深受消费者欢迎。目前由于技术方面的原因，我国生鲜鸡肉的货架期较短，因而分析生鲜鸡肉中微生物的污染状况具有非常重要的意义。本研究在南京各大菜市场和超市取样，采用传统培养技术对从生鲜鸡肉中分离出的细菌进行培养，并通过Baird-Parker平板和血平板、血浆凝固酶试验分离和鉴定出金黄色葡萄球菌。然后，以提取的单菌落的DNA为模板，进行16SrDNA测序，检查是否有肠毒素基因存在。最后，使用PCR技术检测金黄色葡萄球菌中的毒力基因类型。通过对生鲜鸡肉中金黄色葡萄球菌污染状况分析及毒力基因鉴定，能够为食品安全提供数据资料。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料与试剂 2
1.1.1材料 2
1.1.2 试剂 2
1.1.3 培养基 2
1.2 仪器与设备 2
1.3 方法2
1.3.1 金黄色葡萄球菌的分离与鉴定2
1.3.1.1 样品处理2
1.3.1.2 金黄色葡萄球菌的增菌和分离培养2
1.3.1.3 金黄色葡萄球菌的鉴定3
1.3.2 16SrDNA测序3
1.3.2.1 提取DNA3
1.3.2.2 PCR扩增3
1.3.3 毒力基因检测 4
2 结果与分析4
2.1 金黄色葡萄球菌在生鲜鸡肉中的污染状况 4
2.2 16Sr测序结果 5
2.3 毒力基因检测结果 6
3 讨论 6
3.1 分离到的金黄色葡萄球菌数量少的原因分析6
3.2 PCR技术的优缺点 6
3.3 金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布 6
致谢7
r /> 参考文献7
生鲜禽肉中金黄色葡萄球菌微生物学特性研究
引言
引言
自上世纪80年代以来，随着我国经济发展，人民水平提高，肉鸡产业发展迅速。使我国成为肉鸡生产和消费大国，同时人们对肉鸡的安全和品质提出了更高的要求[1]。目前鸡肉类产品分为冷冻鸡肉和生鲜鸡肉，生鲜鸡肉是指经检疫检验合格的活禽宰后l h内中心温度降至8℃，12 h内降至4℃，04℃下包装、储藏、运输的鸡肉类产品，由于经过了一定时间的冷却，鸡肉经充分的解僵成熟过程，且在加工、流通和分销过程中始终保持在04℃范围的冷链中，低温条件下有害微生物的生长会受到抑制，故其在营养、口感、卫生等方面均优于冷冻鸡肉，因此具有广阔的发展前景。然而鸡肉是高度易腐的产品，适合许多细菌繁殖，而细菌性食物中毒最为多见[2]，且我国屠宰冷却工艺、保鲜技术等的应用仍然比较落后，微生物污染不可避免，从而导致生鲜鸡肉产品货架期短，安全性难以保证，因此在屠宰、分割、冷藏、运输和销售一系列过程中关注生鲜禽类产品的微生物污染状况，采取有效的措施减轻污染程度并防止二次污染，同时开展各种保鲜技术的研究并应用于规模化生产中，具有非常重要的现实意义。
金黄色葡萄球菌是一种普遍存在于自然界中的人兽共患病菌，在微生物污染菌中占据重要地位，这种食源性致病菌对人们的健康和生命造成了巨大的威胁，因此，对金黄色葡萄球菌的潜在危害的研究已成为食品安全领域和医学领域的重点研究课题[3]。鉴于目前这种状况,本课题着重研究生鲜鸡肉中金黄色葡萄球菌的自然分布状况,通过采集各种来源的超市或菜市场中的鸡的各个部分的样品,通过对金黄色葡萄球菌进行鉴定分析,研究金黄色葡萄球菌的污染情况,为食品安全标准的制定,食品安全检测提供依据。在此基础上,利用PCR技术[4,5,6]，鉴定金黄色葡萄球菌基因的致病性，为金黄色葡萄球菌的监控、爆发流行的检测及追踪污染源提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 材料
南京各大超市与菜市场的鸡胸、鸡腿、鸡翅及全鸡，4℃保存。鸡一般为白羽鸡和黄羽鸡，白羽鸡年龄为4049天，黄羽鸡年龄为100120天，宰后48小时以内。
1.1.2 试剂
细菌基因组DNA提取试剂盒：天根生化有限公司；血平板：北京陆桥技术有限公司；冻干兔血浆：北京陆桥技术有限公司。
1.1.3 培养基
BairdParker培养基；血平板；TSB(Tryptone Soy Broth)培养基。
1.2 仪器与设备
洁净工作台：SWCJ2FD 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司；均质器：Bag Mixer400 法国Interscience公司；生物安全柜：The Baker Company；生化培养箱：SPX250BZ型上海博讯实业有限公司；凝胶成像系统：美国伯乐公司；PCR扩增仪：德国eppendorf公司 美国Veriti公司；高速离心机：TG16WS 湘仪离心机仪器有限公司；蒸汽灭菌锅：HVE50 日本Hirayama公司；电泳仪：美国伯乐公司。
1.3 方法
1.3.1 金黄色葡萄球菌的分离与鉴定
1.3.1.1 样品处理
用无菌剪刀从鸡胸、鸡腿、鸡翅及全鸡上分别取下约20g样品，编号，放入盛有180mL生理盐水（0.85%NaCl，0.1%蛋白胨）的均质袋中，用均质器拍打至一定浑浊，放入37℃生化培养箱培养约3h。
1.3.1.2 金黄色葡萄球菌的增菌和分离培养
参照GB 4789.102010金黄色葡萄球菌检验以及杨红等[7]的方法，先根据BairdParker培养基的成分要求配成BP培养基，灭菌后（121℃，15min）倒平板，每个平板约20mL，将菌液通过涂布或划线的方法接种到培养基上，一开始一份菌液可涂两个平板以大致了解生鲜鸡肉的金黄色葡萄球菌的污染情况，之后可一份菌液划一个平板。将菌液接种完成后，将平板倒置于37℃生化培养箱培养约1824h。1824h后，观察菌落形态，由于金黄色葡萄球菌在BairdParker平板上，菌落直径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈，用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无浑浊带及透明圈，将这种菌落形态找出。用干净灭菌后的枪头将菌挑出接种至血平板，若为有明显特征的单菌落，可直接点一个点在血平板上。若不为单菌落，可点23个点以便确定。点与点之间距离适中，若是涂布的BP平板，可挑不同类型的菌落35个/BP平板，若是划线的平板，每个区域可挑2个菌落，即6个菌落/BP平板。接种完成后将血平板倒置于37℃生化培养箱培养约1824h。1824h后，观察血平板。由于在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。找出有这种特征的菌落并记录。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料与试剂 2
1.1.1材料 2
1.1.2 试剂 2
1.1.3 培养基 2
1.2 仪器与设备 2
1.3 方法2
1.3.1 金黄色葡萄球菌的分离与鉴定2
1.3.1.1 样品处理2
1.3.1.2 金黄色葡萄球菌的增菌和分离培养2
1.3.1.3 金黄色葡萄球菌的鉴定3
1.3.2 16SrDNA测序3
1.3.2.1 提取DNA3
1.3.2.2 PCR扩增3
1.3.3 毒力基因检测 4
2 结果与分析4
2.1 金黄色葡萄球菌在生鲜鸡肉中的污染状况 4
2.2 16Sr测序结果 5
2.3 毒力基因检测结果 6
3 讨论 6
3.1 分离到的金黄色葡萄球菌数量少的原因分析6
3.2 PCR技术的优缺点 6
3.3 金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布 6
致谢7
r /> 参考文献7
生鲜禽肉中金黄色葡萄球菌微生物学特性研究
引言
引言
自上世纪80年代以来，随着我国经济发展，人民水平提高，肉鸡产业发展迅速。使我国成为肉鸡生产和消费大国，同时人们对肉鸡的安全和品质提出了更高的要求[1]。目前鸡肉类产品分为冷冻鸡肉和生鲜鸡肉，生鲜鸡肉是指经检疫检验合格的活禽宰后l h内中心温度降至8℃，12 h内降至4℃，04℃下包装、储藏、运输的鸡肉类产品，由于经过了一定时间的冷却，鸡肉经充分的解僵成熟过程，且在加工、流通和分销过程中始终保持在04℃范围的冷链中，低温条件下有害微生物的生长会受到抑制，故其在营养、口感、卫生等方面均优于冷冻鸡肉，因此具有广阔的发展前景。然而鸡肉是高度易腐的产品，适合许多细菌繁殖，而细菌性食物中毒最为多见[2]，且我国屠宰冷却工艺、保鲜技术等的应用仍然比较落后，微生物污染不可避免，从而导致生鲜鸡肉产品货架期短，安全性难以保证，因此在屠宰、分割、冷藏、运输和销售一系列过程中关注生鲜禽类产品的微生物污染状况，采取有效的措施减轻污染程度并防止二次污染，同时开展各种保鲜技术的研究并应用于规模化生产中，具有非常重要的现实意义。
金黄色葡萄球菌是一种普遍存在于自然界中的人兽共患病菌，在微生物污染菌中占据重要地位，这种食源性致病菌对人们的健康和生命造成了巨大的威胁，因此，对金黄色葡萄球菌的潜在危害的研究已成为食品安全领域和医学领域的重点研究课题[3]。鉴于目前这种状况,本课题着重研究生鲜鸡肉中金黄色葡萄球菌的自然分布状况,通过采集各种来源的超市或菜市场中的鸡的各个部分的样品,通过对金黄色葡萄球菌进行鉴定分析,研究金黄色葡萄球菌的污染情况,为食品安全标准的制定,食品安全检测提供依据。在此基础上,利用PCR技术[4,5,6]，鉴定金黄色葡萄球菌基因的致病性，为金黄色葡萄球菌的监控、爆发流行的检测及追踪污染源提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 材料
南京各大超市与菜市场的鸡胸、鸡腿、鸡翅及全鸡，4℃保存。鸡一般为白羽鸡和黄羽鸡，白羽鸡年龄为4049天，黄羽鸡年龄为100120天，宰后48小时以内。
1.1.2 试剂
细菌基因组DNA提取试剂盒：天根生化有限公司；血平板：北京陆桥技术有限公司；冻干兔血浆：北京陆桥技术有限公司。
1.1.3 培养基
BairdParker培养基；血平板；TSB(Tryptone Soy Broth)培养基。
1.2 仪器与设备
洁净工作台：SWCJ2FD 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司；均质器：Bag Mixer400 法国Interscience公司；生物安全柜：The Baker Company；生化培养箱：SPX250BZ型上海博讯实业有限公司；凝胶成像系统：美国伯乐公司；PCR扩增仪：德国eppendorf公司 美国Veriti公司；高速离心机：TG16WS 湘仪离心机仪器有限公司；蒸汽灭菌锅：HVE50 日本Hirayama公司；电泳仪：美国伯乐公司。
1.3 方法
1.3.1 金黄色葡萄球菌的分离与鉴定
1.3.1.1 样品处理
用无菌剪刀从鸡胸、鸡腿、鸡翅及全鸡上分别取下约20g样品，编号，放入盛有180mL生理盐水（0.85%NaCl，0.1%蛋白胨）的均质袋中，用均质器拍打至一定浑浊，放入37℃生化培养箱培养约3h。
1.3.1.2 金黄色葡萄球菌的增菌和分离培养
参照GB 4789.102010金黄色葡萄球菌检验以及杨红等[7]的方法，先根据BairdParker培养基的成分要求配成BP培养基，灭菌后（121℃，15min）倒平板，每个平板约20mL，将菌液通过涂布或划线的方法接种到培养基上，一开始一份菌液可涂两个平板以大致了解生鲜鸡肉的金黄色葡萄球菌的污染情况，之后可一份菌液划一个平板。将菌液接种完成后，将平板倒置于37℃生化培养箱培养约1824h。1824h后，观察菌落形态，由于金黄色葡萄球菌在BairdParker平板上，菌落直径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈，用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无浑浊带及透明圈，将这种菌落形态找出。用干净灭菌后的枪头将菌挑出接种至血平板，若为有明显特征的单菌落，可直接点一个点在血平板上。若不为单菌落，可点23个点以便确定。点与点之间距离适中，若是涂布的BP平板，可挑不同类型的菌落35个/BP平板，若是划线的平板，每个区域可挑2个菌落，即6个菌落/BP平板。接种完成后将血平板倒置于37℃生化培养箱培养约1824h。1824h后，观察血平板。由于在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。找出有这种特征的菌落并记录。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/swgc/spkxygc/363.html
