不同乳酸菌发酵海军豆蛋白降解及产ace活性肽研究
摘要：杂豆有高蛋白、高淀粉、低脂肪、多纤维等特点。杂豆中含有多种生物活性肽，其中血管紧张素转移酶[Angiotensin Converting Enzyme ,简称ACE]抑制肽由于具有显著的降低血压的功能,是近几年来国内外研究的热点课题。本文研究目的在于利用保加利亚乳杆菌，瑞士乳杆菌MB2-1，植物乳杆菌70810，和植物乳杆菌B1-6四株乳酸菌发酵海军豆豆乳，以提高海军豆的ACE抑制活性。研究发现保加利亚乳杆菌，植物乳杆菌70810和植物乳杆菌B1-6在发酵海军豆豆乳过程中增殖和产酸能力良好，呈现出良好的蛋白质分解性能，并且有效释放了ACE抑制肽，对降低人体血压有一定作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
1.1 材料 3
1.2 方法 3
1.2.1 接种物制备3
1.2.2 海军豆豆浆制备3
1.2.3 乳酸菌数分析3
1.2.4 产酸能力分析3
1.2.5 Bradford测定法测定蛋白含量3
1.2.6 SDSPAGE电泳4
1.2.7 反相高效液相色谱法（RPHPLC）4
1.2.8 ACE抑制活性4
1.2.9 体外胃肠消化模拟试验（GIS）4
1.2.10 统计分析4
2 结果与分析5
2.1所选择的菌株的增殖和产酸能力5
2.2 蛋白质含量6
2.3 SDSPAGE电泳7
2.4反相高效液相色谱法（RPHPLC）9
2.5 ACE抑制活性10
2.6体外胃肠消化模拟试验（GIS）11
3 讨论 12
3.1菌种选择12
3.2 SDSPAGE电泳12
3.3反相高效液相色谱（RPHPLC）12
3.4 ACE抑制活性12
3.5体外胃肠消化模拟试验（GIS）12
4 总结 12
致谢13
参考文献1
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
3
不同乳酸菌发酵海军豆蛋白降解及产ACE活性肽研究
引言
引言：随着公众对慢性疾病尤其是生活方式疾病意识的提高，人们对食品与保健食品功能特性的研究也越来越广泛。高血压，是世界上最常见的高风险疾病之一，影响着世界上约22%的人口，被认为是心血管疾病（CVD）如中风，心肌梗塞，心脏衰竭等的主要危险因素[1]。
在人的生理过程中, 血压的调节主要受到肾素血管紧张素系统（RAS）和激肽激肽生成酶系统（KKS）相互作用的控制。肾素进入血液, 将血浆中的血管紧张素原水解为血管紧张素I(AspArgValTyrIleHisLeuValIleHis), 然后在血管紧张素转化酶（AngiotensinI converting enzyme,简称ACE）的作用下, 将末端的二肽切下来, 转换成血管紧张素II(AspArgValTyrIleHisProPhe), 血管紧张素II可加强心肌的收缩力, 并同时使血管平滑肌收缩, 造成血压上升。另一方面, 激肽激肽生成酶系统也受到血管紧张素转移酶[AngiotensinI Converting Enzyme (ACE)]的调控,它可使具有血管舒张作用的舒缓激肽转变为没有活力的缓释肽[2]。两个系统在ACE 的协同作用下, 造成了人体内血压的升高。
RAS和KKS在血压调节方面是一对相互拮抗的体系，其平衡对维持正常血压有重要作用，平衡失调是高血压发病的重要因素之一。由于ACE 在RAS 和KKS 系统中对血压调节起重要作用，抑制ACE 活性对降低血压有积极的影响。ACE 拥有两个具有活性的作用位置，分别为N区和C区，它们具有几乎相同的功能。ACE 抑制肽是对ACE 活性区域亲和力较强的竞争性抑制剂，与ACE 的亲和力比Ang I或舒缓激肽的亲和力强，而且不易从ACE 结合区释放，从而阻碍ACE 催化水解Ang I转化为Ang II，及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程，起降低血压作用[3]。
然而ACE抑制肽不能称为降血压肽，只有经动物实验或人体实验证明具有抗高血压作用的肽类物质称为降血压肽，ACE经体外活性检测方法证明的称为ACE抑制肽。降血压肽和ACE抑制肽并不完全一致，降血压肽强调对人体的作用，能够使高血压患者血压降低，ACE抑制肽只是在体外对ACE有抑制作用，它并不一定能保证经口服或其它方式进入人体后一定具有降血压作用。一些在体外实验中ACE抑制活性并不高的肽，却能显著降压，许多学者认为这是由于这些肽类物质经过人体消化道时会被体内的蛋白质水解酶水解，可能被水解成抑制活性较高的片段，ACE一些具有较高ACE抑制活性的肽可能会被水解成抑制活性较低或几乎没有活性的小片段。ACE抑制肽与其它ACE抑制剂比较有一个很大的优点，ACE抑制肽不会有副作用，当人体服用ACE抑制肽后血压降低到正常水平后血压不会因继续服用ACE抑制肽继续降低，ACE是把血压维持在正常水平。
在植物蛋白ACE抑制肽制备的研究中，主要有酶法和微生物发酵法两种。微生物发酵法主要利用的是发酵菌株的产酶及酶解能力，目前应用较广的微生物主要有乳酸菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉和米曲霉等。与直接酶解法相比，微生物发酵法成本低廉、工艺过程简便、条件温和，得率提高10%～20%，成本却仅为直接酶解法的50%～60%。通过微生物作用对某些苦味肽基团进行修饰和重组，使小肽与小肽之间、小肽与氨基酸之间发生移接、重排。制得的植物蛋白蛋白活性肽具有溶解性好，无苦味和异味，口感好，受热不凝固等优点，具有良好的应用前景和经济性[4]。
食物蛋白源的降血压肽安全性很高，只对高血压患者起到降压效果，而对血压正常者无降压作用，降压作用平稳而温和。同时还具有多功能生理活性和易吸收的特点，所以开发具有降血压功能的功能性食品具有非常广阔的前景。
1 材料与方法
1．1 材料
选取加拿大的海军豆种子储存于4℃直至使用。木瓜蛋白酶（P4762），胃蛋白酶（P6887），胰蛋白酶（T0303），α胰凝乳蛋白酶（C4129），血管紧张素转换酶试剂（A6778），马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL）（H1635）购自SigmaAldrich公司，分子量标准是由BioRad实验室提供，制胶缓冲液使用的是TrisHCl缓冲系统，浓缩胶是pH 6.7，分离胶pH 8.9；而电泳缓冲液使用的Tris甘氨酸缓冲系统。使用的所有其他试剂均为分析纯。
植物乳杆菌70810是由中国泡菜与发酵白菜[5]中分离；植物乳杆菌B16从新疆谷物发酵饮料Boza中分离；瑞士乳杆菌MB21是传统的新疆赛里木酸奶中获得[6]；保加利亚乳杆菌是从中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）获得。
1．2 方法
1．2．1 接种物制备
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
1.1 材料 3
1.2 方法 3
1.2.1 接种物制备3
1.2.2 海军豆豆浆制备3
1.2.3 乳酸菌数分析3
1.2.4 产酸能力分析3
1.2.5 Bradford测定法测定蛋白含量3
1.2.6 SDSPAGE电泳4
1.2.7 反相高效液相色谱法（RPHPLC）4
1.2.8 ACE抑制活性4
1.2.9 体外胃肠消化模拟试验（GIS）4
1.2.10 统计分析4
2 结果与分析5
2.1所选择的菌株的增殖和产酸能力5
2.2 蛋白质含量6
2.3 SDSPAGE电泳7
2.4反相高效液相色谱法（RPHPLC）9
2.5 ACE抑制活性10
2.6体外胃肠消化模拟试验（GIS）11
3 讨论 12
3.1菌种选择12
3.2 SDSPAGE电泳12
3.3反相高效液相色谱（RPHPLC）12
3.4 ACE抑制活性12
3.5体外胃肠消化模拟试验（GIS）12
4 总结 12
致谢13
参考文献1
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
3
不同乳酸菌发酵海军豆蛋白降解及产ACE活性肽研究
引言
引言：随着公众对慢性疾病尤其是生活方式疾病意识的提高，人们对食品与保健食品功能特性的研究也越来越广泛。高血压，是世界上最常见的高风险疾病之一，影响着世界上约22%的人口，被认为是心血管疾病（CVD）如中风，心肌梗塞，心脏衰竭等的主要危险因素[1]。
在人的生理过程中, 血压的调节主要受到肾素血管紧张素系统（RAS）和激肽激肽生成酶系统（KKS）相互作用的控制。肾素进入血液, 将血浆中的血管紧张素原水解为血管紧张素I(AspArgValTyrIleHisLeuValIleHis), 然后在血管紧张素转化酶（AngiotensinI converting enzyme,简称ACE）的作用下, 将末端的二肽切下来, 转换成血管紧张素II(AspArgValTyrIleHisProPhe), 血管紧张素II可加强心肌的收缩力, 并同时使血管平滑肌收缩, 造成血压上升。另一方面, 激肽激肽生成酶系统也受到血管紧张素转移酶[AngiotensinI Converting Enzyme (ACE)]的调控,它可使具有血管舒张作用的舒缓激肽转变为没有活力的缓释肽[2]。两个系统在ACE 的协同作用下, 造成了人体内血压的升高。
RAS和KKS在血压调节方面是一对相互拮抗的体系，其平衡对维持正常血压有重要作用，平衡失调是高血压发病的重要因素之一。由于ACE 在RAS 和KKS 系统中对血压调节起重要作用，抑制ACE 活性对降低血压有积极的影响。ACE 拥有两个具有活性的作用位置，分别为N区和C区，它们具有几乎相同的功能。ACE 抑制肽是对ACE 活性区域亲和力较强的竞争性抑制剂，与ACE 的亲和力比Ang I或舒缓激肽的亲和力强，而且不易从ACE 结合区释放，从而阻碍ACE 催化水解Ang I转化为Ang II，及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程，起降低血压作用[3]。
然而ACE抑制肽不能称为降血压肽，只有经动物实验或人体实验证明具有抗高血压作用的肽类物质称为降血压肽，ACE经体外活性检测方法证明的称为ACE抑制肽。降血压肽和ACE抑制肽并不完全一致，降血压肽强调对人体的作用，能够使高血压患者血压降低，ACE抑制肽只是在体外对ACE有抑制作用，它并不一定能保证经口服或其它方式进入人体后一定具有降血压作用。一些在体外实验中ACE抑制活性并不高的肽，却能显著降压，许多学者认为这是由于这些肽类物质经过人体消化道时会被体内的蛋白质水解酶水解，可能被水解成抑制活性较高的片段，ACE一些具有较高ACE抑制活性的肽可能会被水解成抑制活性较低或几乎没有活性的小片段。ACE抑制肽与其它ACE抑制剂比较有一个很大的优点，ACE抑制肽不会有副作用，当人体服用ACE抑制肽后血压降低到正常水平后血压不会因继续服用ACE抑制肽继续降低，ACE是把血压维持在正常水平。
在植物蛋白ACE抑制肽制备的研究中，主要有酶法和微生物发酵法两种。微生物发酵法主要利用的是发酵菌株的产酶及酶解能力，目前应用较广的微生物主要有乳酸菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉和米曲霉等。与直接酶解法相比，微生物发酵法成本低廉、工艺过程简便、条件温和，得率提高10%～20%，成本却仅为直接酶解法的50%～60%。通过微生物作用对某些苦味肽基团进行修饰和重组，使小肽与小肽之间、小肽与氨基酸之间发生移接、重排。制得的植物蛋白蛋白活性肽具有溶解性好，无苦味和异味，口感好，受热不凝固等优点，具有良好的应用前景和经济性[4]。
食物蛋白源的降血压肽安全性很高，只对高血压患者起到降压效果，而对血压正常者无降压作用，降压作用平稳而温和。同时还具有多功能生理活性和易吸收的特点，所以开发具有降血压功能的功能性食品具有非常广阔的前景。
1 材料与方法
1．1 材料
选取加拿大的海军豆种子储存于4℃直至使用。木瓜蛋白酶（P4762），胃蛋白酶（P6887），胰蛋白酶（T0303），α胰凝乳蛋白酶（C4129），血管紧张素转换酶试剂（A6778），马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL）（H1635）购自SigmaAldrich公司，分子量标准是由BioRad实验室提供，制胶缓冲液使用的是TrisHCl缓冲系统，浓缩胶是pH 6.7，分离胶pH 8.9；而电泳缓冲液使用的Tris甘氨酸缓冲系统。使用的所有其他试剂均为分析纯。
植物乳杆菌70810是由中国泡菜与发酵白菜[5]中分离；植物乳杆菌B16从新疆谷物发酵饮料Boza中分离；瑞士乳杆菌MB21是传统的新疆赛里木酸奶中获得[6]；保加利亚乳杆菌是从中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）获得。
1．2 方法
1．2．1 接种物制备
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