热空气结合拮抗酵母处理对番茄采后病害防治和贮藏品质的影响
摘要：研究38℃热空气处理12h、108 CFU/mL罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）悬浮液对灰葡萄孢霉（B.cinerea）及链格孢霉（A.alternata）孢子萌发及菌丝生长的影响，并将研究应用于番茄采后病害防治上。结果表明，热空气和拮抗酵母单独处理均能抑制番茄采后人工接种病害及自然病害，两者结合处理的防治效果更为显著。同时研究热空气处理及拮抗酵母处理对常温20℃贮藏条件和低温4℃贮藏条件下番茄品质的影响，结果表明，热处理可以保持番茄硬度、颜色，降低其呼吸速率；酵母处理可以延缓可滴定酸含量的下降。综上，热空气结合拮抗酵母处理可应用于番茄采后病害防治及品质保持。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1.1 实验材料 2
1.2 实验处理与方法 2
1.2.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对病原菌孢子萌发和菌丝生长的影响 2
1.2.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对不同番茄采后接种病害的防治试验 3
1.2.3 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄贮藏品质的影响 3
1.2.4 品质指标测定方法 3
2 结果与分析 4
2.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对病原菌体外生长的抑制效果 4
2.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄采后接种病害的防治效果 5
2.2.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄处理前病害的防治效果 5
2.2.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄处理后病害的防治效果 6
2.3 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄贮藏品质的影响 6
2.3.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄自然病害的控制 6
2.3.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄硬度变化的影响 8
2.3.3 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄颜色变化的影响 8
2.3.4 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄可溶性固形物的影响 9
2.3.5 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄可滴定酸含量的影响 10<
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br /> 2.3.6 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄呼吸速率的影响 10
3 讨论 11
致谢 12
参考文献 12
热空气结合拮抗酵母处理对番茄采后病害防治和贮藏品质的影响
引言
番茄作为深受我国国民喜爱的果蔬，随着农业科技的进步，其生产己经实现了周年供应，种植和推广番茄可创造巨大的经济和社会效益，是农民增收致富的新亮点。另一方面，由于其果实为浆果类，皮薄肉嫩，易受病原微生物侵染而腐烂，在贮藏及运输过程中，给果农和相关企业造成巨大的经济损失[]，因此研究番茄采后病害防治和品质保持具有非常实际的经济意义。
目前控制果蔬类产品采后病害最有效的措施是低温贮藏结合化学防腐剂的应用[]。尽管化学药剂防治番茄采后病害效果明显，但长期的使用会导致病原菌产生抗药性而降低其抑菌效果，同时化学药剂对人体健康及环境会产生不良影响，影响我国果蔬的出口[]；同时，低温处理需要较大的投资，成本较高，且我国目前的冷链运输系统并不健全，容易造成番茄贮藏过程中的冷害问题。因此，寻求绿色环保高效的病害防治方法成为研究热点，且具有广阔市场前景。
采后热处理作为一种无毒、无污染、无残留的物理方法，近年来成为研究热点。该技术绿色安全，成本也比低温杀菌低，能控制水果采后病虫害的发生,降低水果的呼吸作用和乙烯的释放量,延缓水果衰老,改善果实品质,延长水果保鲜期。目前热处理技术已应用于多种水果的贮藏研究中，部分已用于商业生产。传统的热处理根据其传播介质的不同，可以分为热空气处理、热水处理（以热水浸泡为主）、热蒸汽处理[]。但由于热处理单独使用难以取得较好的防治效果，目前热处理与其它处理方式结合的研究成为趋势[]。
自从20世纪50年代Gutte[]等首次报道枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 对水果病原菌具有生防作用以来，国内外学者对水果采后病害的生物防治进行了广泛的研究，拮抗酵母因具有以下特点：①繁殖速度快，能够在伤口处充分利用营养快速大量地繁殖；②抗逆能力强，产生的胞外多糖具有增强其生存能力和抵御病原菌侵染的作用[]；③安全性高，不会产生对人和寄主有害的代谢产物；④遗传稳定；⑤抑菌谱较广而逐渐受到人们的认可并被广泛的应用于果蔬的采后病害防治。其中，罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）由于拮抗效力强，能有效抑制果实的多种真菌病害，是国内外较广泛研究的用于采后病害生物防治的拮抗酵母[]。
研究表明：拮抗菌生物防治的功效是防止果蔬在贮藏过程中被病原菌所侵染，而对于已经潜伏于果蔬上的病原菌作用甚微；而热处理可以杀死或抑制已经存在于果蔬上的病原微生物，但对于热处理之后侵染果实的病原菌作用甚微，难以对果蔬进行长久有效的保护。由于采后热处理与拮抗酵母生物防治各有优缺点，两者之间具有互补性，目前已有一些研究报道了拮抗酵母结合适宜的热处理条件能有效地防治梨[]、枇杷[]等果蔬采后病害。因此本试验将两种防治方法结合，优势互补，研究其对番茄采后病害防治及其品质的影响，为实际生产应用提供实验基础。
1 材料与方法
1．1 实验材料
番茄果实采自南京六合东沟有机种植基地，品种为“千禧”樱桃番茄，采摘绿熟（Mature Green）期的番茄果实，采摘后立即运回实验室。选取大小和颜色一致，无病虫害和机械损伤的果实以供试验。
罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供，参照Yu等[]的方法，接种至NYDB培养基（牛肉膏8g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，水1000mL），28℃下200rpm振荡培养24h，酵母细胞于4oC、6 000×g下冷冻离心10 min，并用无菌水清洗两次后用无菌水将酵母细胞的浓度调整为108 CFU/mL。
灰葡萄孢霉(B.cinerea)和链格孢霉（A.alternata）分离自发病的番茄果实，转接至PDA培养基25℃下培养10d，用无菌水冲洗孢子，制成浓度为105个/mL的孢子悬浮液。
1．2 实验处理与方法
1. 2. 1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对病原菌孢子萌发和菌丝生长的影响
参照Feng[]等方法稍作修改。试验分为以下四组：（1）对照组CK：在含有5mLPDB的无菌试管加入100μL浓度为105个/mL的病原菌（B.cinerea和A.alternata）孢子悬浮液；（2）热空气处理组H：在含有5mLPDB的无菌试管加入100μL浓度为105个/mL的病原菌孢子悬浮液，之后用38℃热空气处理12h；(3)酵母处理组C：将100μL浓度为108CFU/mL的菌悬液和浓度为105个/mL的病原菌孢子悬浮液加入到含有5mLPDB的试管；(4)结合处理组H+C：含有5mLPDB的无菌试管加入100μL浓度为105个/mL的病原菌孢子悬浮液，之后用38℃热空气处理12h，加入100μL浓度为108CFU/mL酵母菌悬液。处理结束后于25℃振荡培养20h，显微镜观察测定病原菌孢子萌发情况（孢子的芽管长度大于孢子直径视为萌发），每次观察孢子不少于100个，萌发率=萌发的孢子数/孢子总数，整个试验重复三次。
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摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1.1 实验材料 2
1.2 实验处理与方法 2
1.2.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对病原菌孢子萌发和菌丝生长的影响 2
1.2.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对不同番茄采后接种病害的防治试验 3
1.2.3 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄贮藏品质的影响 3
1.2.4 品质指标测定方法 3
2 结果与分析 4
2.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对病原菌体外生长的抑制效果 4
2.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄采后接种病害的防治效果 5
2.2.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄处理前病害的防治效果 5
2.2.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄处理后病害的防治效果 6
2.3 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄贮藏品质的影响 6
2.3.1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄自然病害的控制 6
2.3.2 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄硬度变化的影响 8
2.3.3 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄颜色变化的影响 8
2.3.4 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄可溶性固形物的影响 9
2.3.5 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄可滴定酸含量的影响 10<
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br /> 2.3.6 热空气结合罗伦隐球酵母处理对番茄呼吸速率的影响 10
3 讨论 11
致谢 12
参考文献 12
热空气结合拮抗酵母处理对番茄采后病害防治和贮藏品质的影响
引言
番茄作为深受我国国民喜爱的果蔬，随着农业科技的进步，其生产己经实现了周年供应，种植和推广番茄可创造巨大的经济和社会效益，是农民增收致富的新亮点。另一方面，由于其果实为浆果类，皮薄肉嫩，易受病原微生物侵染而腐烂，在贮藏及运输过程中，给果农和相关企业造成巨大的经济损失[]，因此研究番茄采后病害防治和品质保持具有非常实际的经济意义。
目前控制果蔬类产品采后病害最有效的措施是低温贮藏结合化学防腐剂的应用[]。尽管化学药剂防治番茄采后病害效果明显，但长期的使用会导致病原菌产生抗药性而降低其抑菌效果，同时化学药剂对人体健康及环境会产生不良影响，影响我国果蔬的出口[]；同时，低温处理需要较大的投资，成本较高，且我国目前的冷链运输系统并不健全，容易造成番茄贮藏过程中的冷害问题。因此，寻求绿色环保高效的病害防治方法成为研究热点，且具有广阔市场前景。
采后热处理作为一种无毒、无污染、无残留的物理方法，近年来成为研究热点。该技术绿色安全，成本也比低温杀菌低，能控制水果采后病虫害的发生,降低水果的呼吸作用和乙烯的释放量,延缓水果衰老,改善果实品质,延长水果保鲜期。目前热处理技术已应用于多种水果的贮藏研究中，部分已用于商业生产。传统的热处理根据其传播介质的不同，可以分为热空气处理、热水处理（以热水浸泡为主）、热蒸汽处理[]。但由于热处理单独使用难以取得较好的防治效果，目前热处理与其它处理方式结合的研究成为趋势[]。
自从20世纪50年代Gutte[]等首次报道枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 对水果病原菌具有生防作用以来，国内外学者对水果采后病害的生物防治进行了广泛的研究，拮抗酵母因具有以下特点：①繁殖速度快，能够在伤口处充分利用营养快速大量地繁殖；②抗逆能力强，产生的胞外多糖具有增强其生存能力和抵御病原菌侵染的作用[]；③安全性高，不会产生对人和寄主有害的代谢产物；④遗传稳定；⑤抑菌谱较广而逐渐受到人们的认可并被广泛的应用于果蔬的采后病害防治。其中，罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）由于拮抗效力强，能有效抑制果实的多种真菌病害，是国内外较广泛研究的用于采后病害生物防治的拮抗酵母[]。
研究表明：拮抗菌生物防治的功效是防止果蔬在贮藏过程中被病原菌所侵染，而对于已经潜伏于果蔬上的病原菌作用甚微；而热处理可以杀死或抑制已经存在于果蔬上的病原微生物，但对于热处理之后侵染果实的病原菌作用甚微，难以对果蔬进行长久有效的保护。由于采后热处理与拮抗酵母生物防治各有优缺点，两者之间具有互补性，目前已有一些研究报道了拮抗酵母结合适宜的热处理条件能有效地防治梨[]、枇杷[]等果蔬采后病害。因此本试验将两种防治方法结合，优势互补，研究其对番茄采后病害防治及其品质的影响，为实际生产应用提供实验基础。
1 材料与方法
1．1 实验材料
番茄果实采自南京六合东沟有机种植基地，品种为“千禧”樱桃番茄，采摘绿熟（Mature Green）期的番茄果实，采摘后立即运回实验室。选取大小和颜色一致，无病虫害和机械损伤的果实以供试验。
罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供，参照Yu等[]的方法，接种至NYDB培养基（牛肉膏8g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，水1000mL），28℃下200rpm振荡培养24h，酵母细胞于4oC、6 000×g下冷冻离心10 min，并用无菌水清洗两次后用无菌水将酵母细胞的浓度调整为108 CFU/mL。
灰葡萄孢霉(B.cinerea)和链格孢霉（A.alternata）分离自发病的番茄果实，转接至PDA培养基25℃下培养10d，用无菌水冲洗孢子，制成浓度为105个/mL的孢子悬浮液。
1．2 实验处理与方法
1. 2. 1 热空气结合罗伦隐球酵母处理对病原菌孢子萌发和菌丝生长的影响
参照Feng[]等方法稍作修改。试验分为以下四组：（1）对照组CK：在含有5mLPDB的无菌试管加入100μL浓度为105个/mL的病原菌（B.cinerea和A.alternata）孢子悬浮液；（2）热空气处理组H：在含有5mLPDB的无菌试管加入100μL浓度为105个/mL的病原菌孢子悬浮液，之后用38℃热空气处理12h；(3)酵母处理组C：将100μL浓度为108CFU/mL的菌悬液和浓度为105个/mL的病原菌孢子悬浮液加入到含有5mLPDB的试管；(4)结合处理组H+C：含有5mLPDB的无菌试管加入100μL浓度为105个/mL的病原菌孢子悬浮液，之后用38℃热空气处理12h，加入100μL浓度为108CFU/mL酵母菌悬液。处理结束后于25℃振荡培养20h，显微镜观察测定病原菌孢子萌发情况（孢子的芽管长度大于孢子直径视为萌发），每次观察孢子不少于100个，萌发率=萌发的孢子数/孢子总数，整个试验重复三次。
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