屎肠球菌细菌素的分离鉴定
目前国内对细菌素的研究还尚不完善，而能广泛利用的细菌素品种尚且不多。传统的抗生素和食品防腐剂等已经越来越不符合人们对食品新鲜和安全的需求，因而需要寻找安全的天然有效的活性抑菌物质即细菌素成了当代研究的内在要求。本论文以单增李斯特菌具有抑制作用的屎肠球菌B1为研究对象，通过对不同细菌素特异性片段扩增，得出屎肠球菌B1分泌的细菌素为肠球菌素A，而后采用硫酸铵沉降法粗提，对粗提产物做抑菌性检测，在保证所提产物为所需细菌素的前提下，采用SDS-PAGE电泳，确定其分子量为4.7 KD，并通过核磁共振初步确定分子结构式为(C30H67O12N)n，为其能早日应用于食品生产中提供重要依据。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 菌种 2
1.1.2 试剂2
1.1.3 仪器3
1.2 试验方法3
1.2.1 菌种的选择3
1.2.2 PCR鉴定4
1.2.3 琼脂糖电泳5
1.2.4 硫酸铵沉降法提取细菌素5
1.2.5 测定样品浓度5
1.2.6 所提细菌素样品对单增李斯特菌生长的抑制效果鉴定6
1.2.7 SDSPAGE电泳测定分子量6
1.2.8 核磁共振测定细菌素结构6
2 结果与分析6
2.1 琼脂扩散法的抑菌圈7
2.2 琼脂糖电泳7
2.3 提取样品对单增李斯特菌抑制试验结果7
2.3.1 琼脂扩散法对粗提产物抑菌性能的测定7
2.3.2 单增李斯特菌的生长试验8
2.4 提取样品浓度测定8
2.5 SDSPAGE电泳结果9
2.6 核磁共振结果9
3 讨论10
致谢11
参考文献12
屎肠球菌细菌素的分离鉴定
引言
表1：乳酸菌在食品中的应用[1]
Table 1: Applicatio *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
n of Lactic Acid Bacteria in Food
产品
乳酸菌菌株
酸乳
嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌
酪乳
乳酸乳球菌、乳脂明串珠菌等
发酵香肠
乳杆菌、片球菌
泡菜
植物乳杆菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、片球菌
酸面包
植物乳杆菌、短杆菌、发酵乳杆菌、
干酪乳杆菌等
由于乳酸菌通常被人们认为是安全的，它产生的细菌素也就被认为对人类是健康无害的，因此学者们对乳酸菌细菌素产生了广泛的关注。国外对乳酸菌细菌素的研究较早，已经从乳酸菌的产物中分离到上百种细菌素，产细菌素的乳酸菌种包括肉杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、明片株菌属、片球菌属等。其中能够抑制食品腐败菌和致病菌、具有广谱抑菌活性的乳酸菌细菌素在食品储藏领域具有广阔的应用潜力，乳链球菌产生的Nisin是世界卫生组织批准的唯一可以作为食品防腐剂的细菌素[2]。SaharF.bulgaricus等研究发现嗜酸乳杆菌DSM 20079所产细菌素DSM 200079对亲缘关系较近的保加利亚乳杆菌Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis DSM 20076具有抑菌活性[3]。
细菌素是由细菌核糖体合成的蛋白质、多肽或前体多肽，能抑制或杀死与之相同或相似的其他微生物，而对产生菌本身无影响[4]。因具有安全性好、效率高、无毒、无抗药性、在体内不易残留等优点，倍受科研与工业领域的关注，因此将其作为食品添加剂应用于食品中也顺应未来食品工业的发展要求与趋势，Nisin是第一个应用于食品工业中的抗菌肽，同时Nisin也是一种商业化细菌素，可作为食品防腐剂用于抑制食品微生物污染，乳酸链球菌素已经被作为治疗一系列感染[56]和作为癌症治疗[7]，并提出作为家禽的生长补充[8]。近几年，科学家们已经成功地鉴定出了很多新型的细菌素，它们是发酵或未发酵食品中的细菌产生的多肽或蛋白质，因此被认作为是天然的产品。许多微生物常用于食品生产中来增加食品风味和延长食品的货架期。此外，许多细菌素产生菌都分离自食品或食品原材料中。Dobson等人[9]认为细菌素具有益生菌的功能特性，可抑制胃肠微生物和致病菌的生长繁殖。当前，日常生活中乳酸菌，酵母菌，芽孢杆菌等益生菌随处可见，产细菌素的菌株或细菌素本身可降低致病菌的数目或改变动物中肠道微生物的组成。
我国是乳酸菌资源丰富的国家，对乳酸菌的研究应用也遍及各行各业，但有关乳酸菌细菌素的研究与国外相比起步较晚，且研究内容并不深入，本课题即以对单增李斯特菌等革兰氏阳性菌具有很强抑制作用的屎肠球菌B1为例，通过对其基因的研究明确其所分泌的细菌素种类，并采取适当的方法进行提取分离，进一步对其结构性质做出鉴定。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌种
单增李斯特菌ATCC 19115；美国典型培养物保藏中心
屎肠球菌B1分离自低温火腿
1．1．2 试剂
PALCAM选择性添加剂（P104）；北京陆桥技术有限责任公司
MRS Broth肉汤；Oxoid，英国
脑心浸液琼脂（BHIAGAR）；北京陆桥技术有限责任公司
脑心浸出液肉汤（BHI）；北京陆桥技术有限责任公司
平板计数琼脂（PCA）；北京陆桥技术有限责任公司
PALCAM琼脂基础；北京陆桥技术有限责任公司
氯化钠（分析纯）；西陇科学股份有限公司
Gelred染色剂；上海捷瑞生物工程有限公司
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 菌种 2
1.1.2 试剂2
1.1.3 仪器3
1.2 试验方法3
1.2.1 菌种的选择3
1.2.2 PCR鉴定4
1.2.3 琼脂糖电泳5
1.2.4 硫酸铵沉降法提取细菌素5
1.2.5 测定样品浓度5
1.2.6 所提细菌素样品对单增李斯特菌生长的抑制效果鉴定6
1.2.7 SDSPAGE电泳测定分子量6
1.2.8 核磁共振测定细菌素结构6
2 结果与分析6
2.1 琼脂扩散法的抑菌圈7
2.2 琼脂糖电泳7
2.3 提取样品对单增李斯特菌抑制试验结果7
2.3.1 琼脂扩散法对粗提产物抑菌性能的测定7
2.3.2 单增李斯特菌的生长试验8
2.4 提取样品浓度测定8
2.5 SDSPAGE电泳结果9
2.6 核磁共振结果9
3 讨论10
致谢11
参考文献12
屎肠球菌细菌素的分离鉴定
引言
表1：乳酸菌在食品中的应用[1]
Table 1: Applicatio *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
n of Lactic Acid Bacteria in Food
产品
乳酸菌菌株
酸乳
嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌
酪乳
乳酸乳球菌、乳脂明串珠菌等
发酵香肠
乳杆菌、片球菌
泡菜
植物乳杆菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、片球菌
酸面包
植物乳杆菌、短杆菌、发酵乳杆菌、
干酪乳杆菌等
由于乳酸菌通常被人们认为是安全的，它产生的细菌素也就被认为对人类是健康无害的，因此学者们对乳酸菌细菌素产生了广泛的关注。国外对乳酸菌细菌素的研究较早，已经从乳酸菌的产物中分离到上百种细菌素，产细菌素的乳酸菌种包括肉杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、明片株菌属、片球菌属等。其中能够抑制食品腐败菌和致病菌、具有广谱抑菌活性的乳酸菌细菌素在食品储藏领域具有广阔的应用潜力，乳链球菌产生的Nisin是世界卫生组织批准的唯一可以作为食品防腐剂的细菌素[2]。SaharF.bulgaricus等研究发现嗜酸乳杆菌DSM 20079所产细菌素DSM 200079对亲缘关系较近的保加利亚乳杆菌Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis DSM 20076具有抑菌活性[3]。
细菌素是由细菌核糖体合成的蛋白质、多肽或前体多肽，能抑制或杀死与之相同或相似的其他微生物，而对产生菌本身无影响[4]。因具有安全性好、效率高、无毒、无抗药性、在体内不易残留等优点，倍受科研与工业领域的关注，因此将其作为食品添加剂应用于食品中也顺应未来食品工业的发展要求与趋势，Nisin是第一个应用于食品工业中的抗菌肽，同时Nisin也是一种商业化细菌素，可作为食品防腐剂用于抑制食品微生物污染，乳酸链球菌素已经被作为治疗一系列感染[56]和作为癌症治疗[7]，并提出作为家禽的生长补充[8]。近几年，科学家们已经成功地鉴定出了很多新型的细菌素，它们是发酵或未发酵食品中的细菌产生的多肽或蛋白质，因此被认作为是天然的产品。许多微生物常用于食品生产中来增加食品风味和延长食品的货架期。此外，许多细菌素产生菌都分离自食品或食品原材料中。Dobson等人[9]认为细菌素具有益生菌的功能特性，可抑制胃肠微生物和致病菌的生长繁殖。当前，日常生活中乳酸菌，酵母菌，芽孢杆菌等益生菌随处可见，产细菌素的菌株或细菌素本身可降低致病菌的数目或改变动物中肠道微生物的组成。
我国是乳酸菌资源丰富的国家，对乳酸菌的研究应用也遍及各行各业，但有关乳酸菌细菌素的研究与国外相比起步较晚，且研究内容并不深入，本课题即以对单增李斯特菌等革兰氏阳性菌具有很强抑制作用的屎肠球菌B1为例，通过对其基因的研究明确其所分泌的细菌素种类，并采取适当的方法进行提取分离，进一步对其结构性质做出鉴定。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌种
单增李斯特菌ATCC 19115；美国典型培养物保藏中心
屎肠球菌B1分离自低温火腿
1．1．2 试剂
PALCAM选择性添加剂（P104）；北京陆桥技术有限责任公司
MRS Broth肉汤；Oxoid，英国
脑心浸液琼脂（BHIAGAR）；北京陆桥技术有限责任公司
脑心浸出液肉汤（BHI）；北京陆桥技术有限责任公司
平板计数琼脂（PCA）；北京陆桥技术有限责任公司
PALCAM琼脂基础；北京陆桥技术有限责任公司
氯化钠（分析纯）；西陇科学股份有限公司
Gelred染色剂；上海捷瑞生物工程有限公司
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