屎肠球菌实时代谢产物对单增李斯特菌抑制机理研究
单增李斯特菌是一种在食品，水源，土壤中大量存在，易污染肉类，蛋类，蔬菜类产品的致病菌。乳酸菌是一类能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌并且某些食品中的乳酸菌可以通过乳酸发酵产生一些抑菌物质从而对食品有防腐作用。本实验主要通过将屎肠球菌与单增李斯特菌培养在一个即用型透析装置中，置入4℃下培养，通过贮藏实验和流式细胞术来探究屎肠球菌代谢产物对单增李斯特菌的抑制效果。贮藏实验中，单增李斯特菌由初始的8Log CFU/mL下降到4Log CFU/mL。流式细胞术检测结果表明单增李斯特菌死亡率高达75%。结果表明经过与屎肠球菌膜隔离培养，单增李斯特菌生长受到了抑制。综上所述，屎肠球菌的代谢产物对单增李斯特菌的抑制效果较好。该研究可以为食品企业保证食品安全提供参考。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1指示菌株2
1.1.2培养基2
1.1.3试剂耗材2
1.2 实验仪器 2
1.3实验方法3
1.3.1 菌体活化3
1.3.2 搭建装置3
1.3.3 靶细菌计数3
1.3.4流式细胞仪分析4
2 结果与分析4
2．1生长曲线4
2.2流式结果分析4
3讨论 6
致谢7
参考文献8 屎肠球菌实时代谢产物对单增李斯特菌抑制机理研究
引言
Inhibition
引言:单增李斯特菌( Listeria monocytogenes ) 是一种嗜冷菌，它广泛存在于肉制品、乳制品和水产品等食品中，能在1～45℃和低pH条件下生长，其中最适生长温度为37℃。因此在冰箱中储存的受过感染的食品是不能抑制其生长。单增李斯特菌还具有一定的耐盐能力。因此，肉制品、乳制品、水产品都属于极易受到单增李斯特菌感染的食品，所以在当下，由单增李斯特菌引起的食物中毒非常普遍。因此，在生产食品的各个生产环节中对单增李斯特菌的控制和预防是现在食品企业生产的较为关键的问题之一[1 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
]。单增李斯特菌感染主要发生在免疫功能低下的群体，比如小孩，孕妇，老人[2]。感染原因主要为食源性感染。单增李斯特菌可引起严重的疾病，分为两种感染形式，侵入型和非侵入型[3]。侵入型会使孕妇出现流产、早产；对于新生儿，可能导致败血症、脑膜炎，对于免疫力低下的人群可能导致脑膜炎、髓膜炎、败血症[4]。非侵入型导致典型的食物中毒症状，如发烧、腹泻以及肠胃炎[5]。
乳酸菌是革兰氏阳性菌，可以发酵代谢产生乳酸。肠道中的乳酸菌是一种益生菌，它能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、毒性反应、免疫反应、衰老过程和突然的应急反应等产生作用[6]。乳酸菌不能运动，呈杆状或球状[7]，广泛的存在于自然界，乳制品、肉制品等载体中。某些食品中的乳酸菌对食品有防腐作用，可以通过乳酸发酵产生一些抑菌物质从而抑制某些会引起食品腐败的微生物的生长，提高产品的稳定性，延长产品的货架期。在目前的食品行业中，为了延长食品货架期经常使用化学方法和物理方法。这些方法虽然能保证食品安全，却容易影响食品风味和营养，目前的消费者对食品的追求不仅要保证食品的安全，高营养，还要保证食品的纯天然和健康[8]。天然生物保藏剂是一类自然的物质、特殊菌种或者其代谢产生的抗菌物质，可以提高食品安全性，并且可以延长保鲜期[9]。乳酸菌的代谢产物中Nisin已经被公认为是纯天然安全无毒的防腐剂，在全球范围内大量使用。在食品中添加益生菌的保藏方式可以很好地减少物理方法或者是化学方法对食品造成的品质上的流失，为消费者生产出高质量的产品。众多学者研究乳酸菌与单增李斯特菌交互作用时，都是进行共培养整体分析出它们之间的抑制效果，因此本实验利用了一个截留量为1000kD的即用型透析装置，将屎肠球菌B1和单增李斯特菌隔开共培养，使得屎肠球菌B1的代谢产物可以实时进入单增李斯特菌菌液中，通过贮藏实验和流式细胞术分析来研究屎肠球菌B1对单增李斯特菌的抑制机理，为食品行业中寻找对单增李斯特菌有抑制作用的物质提供参考。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 指示菌株
LM ATCC 19115 购自美国典型培养物保藏中心。
屎肠球菌B1保存在国家肉品质量安全控制工程技术研究中心。
1．1．2 培养基
MRS Broth肉汤培养基：Oxoid, 英国；
脑心浸出液肉汤（BHI）：北京陆桥技术有限责任公司；
PALCAM培养基基础：北京陆桥技术有限责任公司；
单增李斯特菌选择性添加剂P104：北京陆桥技术有限责任公司；
1．1．3 试剂耗材
异丙醇（分析纯）：南京化学试剂有限公司；
无水乙醇（分析纯）：南京化学试剂有限公司；
氯化钠（分析纯）：西陇科学股份有限公司；
碘化丙啶（PI）：上海翊圣生物科技有限公司；
1×PBS：江苏凯基生物技术股份有限公司；
10×PBS：江苏凯基生物技术股份有限公司；
电镜固定液（2.5%戊二醛溶液）：武汉塞维尔生物科技有限公司；
Spectra/Por? FloatALyzer? G2即用型透析装置1000KD（10 mL）：美国spectra公司；
涂布棒，50ml针孔注射器，15ml离心管，平板
1．2 实验仪器
SPX250BZ生化培养箱
上海博讯实业有限公司
THZD台式恒温振荡器
太仓市实验设备厂
台式高速离心机
长沙湘仪离心机有限公司
PRACTUM6121CN电子天平
德国赛多利斯公司
SG403生物安全柜
美国贝克尔公司
HVE50自动高压灭菌锅
日本Hirayama公司
赛洛捷克MXS混匀仪
美国赛洛捷克公司
贝克曼库尔特Microfuge?高速冷冻离心机
美国贝克曼库尔特公司
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1指示菌株2
1.1.2培养基2
1.1.3试剂耗材2
1.2 实验仪器 2
1.3实验方法3
1.3.1 菌体活化3
1.3.2 搭建装置3
1.3.3 靶细菌计数3
1.3.4流式细胞仪分析4
2 结果与分析4
2．1生长曲线4
2.2流式结果分析4
3讨论 6
致谢7
参考文献8 屎肠球菌实时代谢产物对单增李斯特菌抑制机理研究
引言
Inhibition
引言:单增李斯特菌( Listeria monocytogenes ) 是一种嗜冷菌，它广泛存在于肉制品、乳制品和水产品等食品中，能在1～45℃和低pH条件下生长，其中最适生长温度为37℃。因此在冰箱中储存的受过感染的食品是不能抑制其生长。单增李斯特菌还具有一定的耐盐能力。因此，肉制品、乳制品、水产品都属于极易受到单增李斯特菌感染的食品，所以在当下，由单增李斯特菌引起的食物中毒非常普遍。因此，在生产食品的各个生产环节中对单增李斯特菌的控制和预防是现在食品企业生产的较为关键的问题之一[1 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
]。单增李斯特菌感染主要发生在免疫功能低下的群体，比如小孩，孕妇，老人[2]。感染原因主要为食源性感染。单增李斯特菌可引起严重的疾病，分为两种感染形式，侵入型和非侵入型[3]。侵入型会使孕妇出现流产、早产；对于新生儿，可能导致败血症、脑膜炎，对于免疫力低下的人群可能导致脑膜炎、髓膜炎、败血症[4]。非侵入型导致典型的食物中毒症状，如发烧、腹泻以及肠胃炎[5]。
乳酸菌是革兰氏阳性菌，可以发酵代谢产生乳酸。肠道中的乳酸菌是一种益生菌，它能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、毒性反应、免疫反应、衰老过程和突然的应急反应等产生作用[6]。乳酸菌不能运动，呈杆状或球状[7]，广泛的存在于自然界，乳制品、肉制品等载体中。某些食品中的乳酸菌对食品有防腐作用，可以通过乳酸发酵产生一些抑菌物质从而抑制某些会引起食品腐败的微生物的生长，提高产品的稳定性，延长产品的货架期。在目前的食品行业中，为了延长食品货架期经常使用化学方法和物理方法。这些方法虽然能保证食品安全，却容易影响食品风味和营养，目前的消费者对食品的追求不仅要保证食品的安全，高营养，还要保证食品的纯天然和健康[8]。天然生物保藏剂是一类自然的物质、特殊菌种或者其代谢产生的抗菌物质，可以提高食品安全性，并且可以延长保鲜期[9]。乳酸菌的代谢产物中Nisin已经被公认为是纯天然安全无毒的防腐剂，在全球范围内大量使用。在食品中添加益生菌的保藏方式可以很好地减少物理方法或者是化学方法对食品造成的品质上的流失，为消费者生产出高质量的产品。众多学者研究乳酸菌与单增李斯特菌交互作用时，都是进行共培养整体分析出它们之间的抑制效果，因此本实验利用了一个截留量为1000kD的即用型透析装置，将屎肠球菌B1和单增李斯特菌隔开共培养，使得屎肠球菌B1的代谢产物可以实时进入单增李斯特菌菌液中，通过贮藏实验和流式细胞术分析来研究屎肠球菌B1对单增李斯特菌的抑制机理，为食品行业中寻找对单增李斯特菌有抑制作用的物质提供参考。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 指示菌株
LM ATCC 19115 购自美国典型培养物保藏中心。
屎肠球菌B1保存在国家肉品质量安全控制工程技术研究中心。
1．1．2 培养基
MRS Broth肉汤培养基：Oxoid, 英国；
脑心浸出液肉汤（BHI）：北京陆桥技术有限责任公司；
PALCAM培养基基础：北京陆桥技术有限责任公司；
单增李斯特菌选择性添加剂P104：北京陆桥技术有限责任公司；
1．1．3 试剂耗材
异丙醇（分析纯）：南京化学试剂有限公司；
无水乙醇（分析纯）：南京化学试剂有限公司；
氯化钠（分析纯）：西陇科学股份有限公司；
碘化丙啶（PI）：上海翊圣生物科技有限公司；
1×PBS：江苏凯基生物技术股份有限公司；
10×PBS：江苏凯基生物技术股份有限公司；
电镜固定液（2.5%戊二醛溶液）：武汉塞维尔生物科技有限公司；
Spectra/Por? FloatALyzer? G2即用型透析装置1000KD（10 mL）：美国spectra公司；
涂布棒，50ml针孔注射器，15ml离心管，平板
1．2 实验仪器
SPX250BZ生化培养箱
上海博讯实业有限公司
THZD台式恒温振荡器
太仓市实验设备厂
台式高速离心机
长沙湘仪离心机有限公司
PRACTUM6121CN电子天平
德国赛多利斯公司
SG403生物安全柜
美国贝克尔公司
HVE50自动高压灭菌锅
日本Hirayama公司
赛洛捷克MXS混匀仪
美国赛洛捷克公司
贝克曼库尔特Microfuge?高速冷冻离心机
美国贝克曼库尔特公司
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