黑茶提取物对肠道菌群的影响
黑茶提取物对肠道菌群的影响[20200509182345]
摘要：黑茶是我国历史悠久的茶类之一，它属于后发酵茶品。近年来，关于黑茶活性成分及其益生作用的分析在茶叶研究领域呈现增长趋势。据研究报道，黑茶中存在茶多糖、茶色素和茶多酚等化学成分，同时在黑茶后发酵过程中，微生物及其代谢产物也发挥了重要的作用，但是国内对黑茶提取物对肠道微生态调节作用的研究较少。本课题以黑茶为原料，利用体外厌氧粪样混合培养方式进行发酵培养，再使用高效液相色谱技术和荧光原位杂交技术对发酵过程中短链脂肪酸的种类、含量和肠道中的菌群变化进行测定，研究黑茶提取物对肠道微生态的调节作用。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
关键字:黑茶；短链脂肪酸；菌群；肠道微生态；调节
目录
摘要 1
关键词 1
Abstractnt. 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 材料 3
1.1.1 样品与试剂 3
1.1.2 仪器与设备 3
1.2 方法 3
1.2.1 黑茶样品制备 4
1.2.2 茶多酚含量测定 4
1.2.3 体外厌氧混合培养 4
1.2.4 厌氧发酵液的组织固定与保存 4
1.2.5 菌群变化分析 4
1.2.6 短链脂肪酸（Short Chain Fatty Acids，SCFA）测定 5
1.2.7 数据分析 5
2 结果与分析 5
2.1 样品制备及含量测定 5
2.2 肠道菌体计数 6
2.2.1 总菌群数量变化 7
2.2.2 有益菌（双歧杆菌和乳酸菌）数量变化 8
2.2.3 有害菌（拟杆菌、溶组织梭状菌、梭状芽胞杆菌）数量变化 8
2.3 HPLC分析 9
3 讨论 11
3.1 实验分析 11
3.1.1 肠道菌体计数 11
3.1.2 HPLC分析 12
3.2 意义 13
致谢 14
参考文献 14
黑茶提取物对肠道菌群的影响
食品科学与工程 刘天囡
引言
引言
黑茶属于我国六大茶类之一，是后发酵茶，也是我国特有的茶类。它是利用微生物发酵以及湿热作用的方式制成的一种茶叶，距今已有四百多年 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
的历史。黑茶根据原料以及制作工艺被分为普洱茶、茯砖茶、青砖茶、六堡茶等，主销西北和西南地区,是我国边疆少数民族必不可缺的饮品。黑茶与其他茶类一样, 富含多种不同的生物活性物质，如茶多糖、茶色素、茶多酚和有机酸等[1]。茶多糖是茶叶中提取的活性多糖的总称，既有酸性多糖又有中性多糖，大多是与蛋白质紧密结合的糖蛋白复合物。其中蛋白部分主要由20种常见的氨基酸组成，糖的部分主要有阿拉伯糖、木糖、岩藻糖等。黑茶中的茶多糖主要有两个来源，一是茶叶本身所固有的及加工过程中转化的；二是由微生物代谢所生成的，如酵母菌的细胞壁含有甘露聚糖、葡聚糖成分等。据研究报道可知，黑茶的茶多糖含量是所有茶类中最高的，且活性最强。这说明，黑茶中的茶多糖活性最优，可能是因为黑茶中长度较短的糖链和肽链较多，使其更易吸收。茶色素是一种水溶性色素混合物，它是在茶叶加工过程中经氧化聚合而生成的以儿茶素为主的多酚类化合物，主要包括茶黄素、茶红素和茶褐素。在黑茶渥堆和干燥的过程中，多酚类有色氧化产物的转化与积累最快。茶多酚包括黄烷醇类、黄酮类、花色苷类和酚酸类等，是茶叶中多酚类物质的总称，是形成茶叶色香味的主要成分之一，也是使茶叶具有益生作用的成分之一。从量上来看，黑茶中茶多酚总量一般低于红茶、绿茶和乌龙茶。黑茶加工过程中，在以酯型儿茶素为主的多酚类成分氧化衍生成茶色素的同时，会伴随着没食子酸的大量生成，使得黑茶中的没食子酸含量普遍高于其他茶类。
从微生物角度来看，黑曲霉、青霉属、酵母属和根霉属是从各类黑茶中分离出的较为常见的微生物，其中黑曲霉、青霉属和酵母属对黑茶品质化合物的形成起着重要的作用。另外值得关注的是在茯砖茶中存在检出率较高的冠突散囊菌，它是表征茯砖茶品质的重要指标之一，也是茯砖茶区别于其他黑茶的重要特征。另外，活性物质他汀类化合物已在部分黑茶中被发现，如普洱熟茶中的洛伐他汀，是普洱茶的重要活性成分之一。另外，黑茶中常见的微量元素如铬（Cr）、锰（Mn）、硒（Se）、锌（Zn）等均是对人体有益的。
此外，据现代科学研究表明，在茶叶加工过程中可以生成活性物质，它们对人体有多种益生作用。黑茶主要可以通过调节胆固醇的代谢和甘油三酯代谢，从而起到降血脂的作用。茶多酚通过自身被氧化而避免了不饱和脂肪和胆固醇被氧化[2]，这样就有利于不饱和脂肪对胆固醇的清除，并且也减少胆固醇及其氧化物在动脉壁上沉积，在一定程度上起到了降血脂的作用。另有学者[3]做了一系列普洱茶的抗氧化试验，如总抗氧化能力测试、脂质氧化，蛋白的氧化等等。所有这些实验表明，普洱茶提取物对体外氧化损伤的保护作用强。此外，普洱茶的水提取物对脂质和非脂质的氧化表现出明显的抑制作用。类似绿茶，乌龙茶和红茶提取物，黑茶中主要的抗氧化物质为表儿茶素，黄酮类化合物，抗坏血酸，并且黑茶中含量较其他茶类要低。这些结果表明，在黑茶的后发酵过程有其他的抗氧化化合物生成。另据研究报道，黑茶可以通过多种机制抑制肿瘤细胞生长。其中起到主要作用的是儿茶素、茶多酚及其组成中的各种儿茶素单体和茶多酚的氧化产物茶色素[4]。
总的来说，黑茶和其他茶类的主要区别在于它的后发酵工艺。在后发酵过程中，由于微生物的作用使得茶叶中的某些成分发生特有的变化，最终使黑茶中的化学成分在含量、结构、活性等各方面不同于红茶等其他茶类，造就黑茶的特殊品质[1]。目前国内外的研究报道主要集中于红茶和绿茶，而对于黑茶则主要集中其活性物质组 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
分、微生物以及保健功能等。
另外，人类复杂的肠道微生物群落有500～1000种，达1013～1014个，10倍于人自身细胞总数[5]。在正常的情况下，肠道菌群都处于动态平衡的状态，一旦平衡状态被破坏，会导致一系列疾病的发生。有报道7[4]指出摄入人体内的茶叶多酚类物质小部分被小肠壁吸收到人体的内循环中进行生物转化或被小肠内的微生物分解、代谢，而绝大部分多酚则进入大肠，由大肠里的微生物分解代谢后，才发挥特有的生理作用，并且这些多酚对肠道菌群的种类及数量也会造成一定的影响。也有学者 [6]通过研究得到富含多酚的蓝莓水提取物在体内可以发挥类似于益生元作用的结论。由上述可以推测富含多酚类物质的黑茶提取物对肠道菌群有一定作用，为本课题研究提供了理论基础。此次实验将通过一系列技术分析，研究黑茶提取物对肠道菌群及其产物的影响，从而探究黑茶提取物对人体的益生作用，为黑茶提取物的综合利用提供理论基础，例如作为食品添加剂、药用价值的深入探究和应用于畜牧业及饲料加工业等，有助于茶叶功能性产品的研发利用和中国茶业资源的开发，具有良好的前景。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1样品与试剂
黑砖茶（购自湖南）
甲醇、乙醇、福林酚、无水碳酸钠、没食子酸、碳酸氢钠、胆汁酸盐、L-半胱氨酸、氯化血红素、磷酸氢二钾、氯化钙、硫酸镁、刃天青、吐温80、Vk、多聚甲醛（南京寿德试验器材有限公司）
厌氧混合气体(10% H2、10% CO2和80% N2)和高纯N2（南京特种气体厂）
磷酸（汕头市西陇化工厂有限公司）
XW-80A型漩涡混合器（上海青浦沪西仪器厂）
Laborota 4000真空旋转蒸发仪 （德国Heidolph公司）
冷冻干燥机（英国Labconco公司）
YQX-I型厌氧培养箱、活性钯粒、乳胶手套（上海跃进医疗器械厂）
0 12 24 36 48
DAPI Control 8.68 8.75 8.94 9.02 9.18
摘要：黑茶是我国历史悠久的茶类之一，它属于后发酵茶品。近年来，关于黑茶活性成分及其益生作用的分析在茶叶研究领域呈现增长趋势。据研究报道，黑茶中存在茶多糖、茶色素和茶多酚等化学成分，同时在黑茶后发酵过程中，微生物及其代谢产物也发挥了重要的作用，但是国内对黑茶提取物对肠道微生态调节作用的研究较少。本课题以黑茶为原料，利用体外厌氧粪样混合培养方式进行发酵培养，再使用高效液相色谱技术和荧光原位杂交技术对发酵过程中短链脂肪酸的种类、含量和肠道中的菌群变化进行测定，研究黑茶提取物对肠道微生态的调节作用。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
关键字:黑茶；短链脂肪酸；菌群；肠道微生态；调节
目录
摘要 1
关键词 1
Abstractnt. 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 材料 3
1.1.1 样品与试剂 3
1.1.2 仪器与设备 3
1.2 方法 3
1.2.1 黑茶样品制备 4
1.2.2 茶多酚含量测定 4
1.2.3 体外厌氧混合培养 4
1.2.4 厌氧发酵液的组织固定与保存 4
1.2.5 菌群变化分析 4
1.2.6 短链脂肪酸（Short Chain Fatty Acids，SCFA）测定 5
1.2.7 数据分析 5
2 结果与分析 5
2.1 样品制备及含量测定 5
2.2 肠道菌体计数 6
2.2.1 总菌群数量变化 7
2.2.2 有益菌（双歧杆菌和乳酸菌）数量变化 8
2.2.3 有害菌（拟杆菌、溶组织梭状菌、梭状芽胞杆菌）数量变化 8
2.3 HPLC分析 9
3 讨论 11
3.1 实验分析 11
3.1.1 肠道菌体计数 11
3.1.2 HPLC分析 12
3.2 意义 13
致谢 14
参考文献 14
黑茶提取物对肠道菌群的影响
食品科学与工程 刘天囡
引言
引言
黑茶属于我国六大茶类之一，是后发酵茶，也是我国特有的茶类。它是利用微生物发酵以及湿热作用的方式制成的一种茶叶，距今已有四百多年 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
的历史。黑茶根据原料以及制作工艺被分为普洱茶、茯砖茶、青砖茶、六堡茶等，主销西北和西南地区,是我国边疆少数民族必不可缺的饮品。黑茶与其他茶类一样, 富含多种不同的生物活性物质，如茶多糖、茶色素、茶多酚和有机酸等[1]。茶多糖是茶叶中提取的活性多糖的总称，既有酸性多糖又有中性多糖，大多是与蛋白质紧密结合的糖蛋白复合物。其中蛋白部分主要由20种常见的氨基酸组成，糖的部分主要有阿拉伯糖、木糖、岩藻糖等。黑茶中的茶多糖主要有两个来源，一是茶叶本身所固有的及加工过程中转化的；二是由微生物代谢所生成的，如酵母菌的细胞壁含有甘露聚糖、葡聚糖成分等。据研究报道可知，黑茶的茶多糖含量是所有茶类中最高的，且活性最强。这说明，黑茶中的茶多糖活性最优，可能是因为黑茶中长度较短的糖链和肽链较多，使其更易吸收。茶色素是一种水溶性色素混合物，它是在茶叶加工过程中经氧化聚合而生成的以儿茶素为主的多酚类化合物，主要包括茶黄素、茶红素和茶褐素。在黑茶渥堆和干燥的过程中，多酚类有色氧化产物的转化与积累最快。茶多酚包括黄烷醇类、黄酮类、花色苷类和酚酸类等，是茶叶中多酚类物质的总称，是形成茶叶色香味的主要成分之一，也是使茶叶具有益生作用的成分之一。从量上来看，黑茶中茶多酚总量一般低于红茶、绿茶和乌龙茶。黑茶加工过程中，在以酯型儿茶素为主的多酚类成分氧化衍生成茶色素的同时，会伴随着没食子酸的大量生成，使得黑茶中的没食子酸含量普遍高于其他茶类。
从微生物角度来看，黑曲霉、青霉属、酵母属和根霉属是从各类黑茶中分离出的较为常见的微生物，其中黑曲霉、青霉属和酵母属对黑茶品质化合物的形成起着重要的作用。另外值得关注的是在茯砖茶中存在检出率较高的冠突散囊菌，它是表征茯砖茶品质的重要指标之一，也是茯砖茶区别于其他黑茶的重要特征。另外，活性物质他汀类化合物已在部分黑茶中被发现，如普洱熟茶中的洛伐他汀，是普洱茶的重要活性成分之一。另外，黑茶中常见的微量元素如铬（Cr）、锰（Mn）、硒（Se）、锌（Zn）等均是对人体有益的。
此外，据现代科学研究表明，在茶叶加工过程中可以生成活性物质，它们对人体有多种益生作用。黑茶主要可以通过调节胆固醇的代谢和甘油三酯代谢，从而起到降血脂的作用。茶多酚通过自身被氧化而避免了不饱和脂肪和胆固醇被氧化[2]，这样就有利于不饱和脂肪对胆固醇的清除，并且也减少胆固醇及其氧化物在动脉壁上沉积，在一定程度上起到了降血脂的作用。另有学者[3]做了一系列普洱茶的抗氧化试验，如总抗氧化能力测试、脂质氧化，蛋白的氧化等等。所有这些实验表明，普洱茶提取物对体外氧化损伤的保护作用强。此外，普洱茶的水提取物对脂质和非脂质的氧化表现出明显的抑制作用。类似绿茶，乌龙茶和红茶提取物，黑茶中主要的抗氧化物质为表儿茶素，黄酮类化合物，抗坏血酸，并且黑茶中含量较其他茶类要低。这些结果表明，在黑茶的后发酵过程有其他的抗氧化化合物生成。另据研究报道，黑茶可以通过多种机制抑制肿瘤细胞生长。其中起到主要作用的是儿茶素、茶多酚及其组成中的各种儿茶素单体和茶多酚的氧化产物茶色素[4]。
总的来说，黑茶和其他茶类的主要区别在于它的后发酵工艺。在后发酵过程中，由于微生物的作用使得茶叶中的某些成分发生特有的变化，最终使黑茶中的化学成分在含量、结构、活性等各方面不同于红茶等其他茶类，造就黑茶的特殊品质[1]。目前国内外的研究报道主要集中于红茶和绿茶，而对于黑茶则主要集中其活性物质组 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
分、微生物以及保健功能等。
另外，人类复杂的肠道微生物群落有500～1000种，达1013～1014个，10倍于人自身细胞总数[5]。在正常的情况下，肠道菌群都处于动态平衡的状态，一旦平衡状态被破坏，会导致一系列疾病的发生。有报道7[4]指出摄入人体内的茶叶多酚类物质小部分被小肠壁吸收到人体的内循环中进行生物转化或被小肠内的微生物分解、代谢，而绝大部分多酚则进入大肠，由大肠里的微生物分解代谢后，才发挥特有的生理作用，并且这些多酚对肠道菌群的种类及数量也会造成一定的影响。也有学者 [6]通过研究得到富含多酚的蓝莓水提取物在体内可以发挥类似于益生元作用的结论。由上述可以推测富含多酚类物质的黑茶提取物对肠道菌群有一定作用，为本课题研究提供了理论基础。此次实验将通过一系列技术分析，研究黑茶提取物对肠道菌群及其产物的影响，从而探究黑茶提取物对人体的益生作用，为黑茶提取物的综合利用提供理论基础，例如作为食品添加剂、药用价值的深入探究和应用于畜牧业及饲料加工业等，有助于茶叶功能性产品的研发利用和中国茶业资源的开发，具有良好的前景。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1样品与试剂
黑砖茶（购自湖南）
甲醇、乙醇、福林酚、无水碳酸钠、没食子酸、碳酸氢钠、胆汁酸盐、L-半胱氨酸、氯化血红素、磷酸氢二钾、氯化钙、硫酸镁、刃天青、吐温80、Vk、多聚甲醛（南京寿德试验器材有限公司）
厌氧混合气体(10% H2、10% CO2和80% N2)和高纯N2（南京特种气体厂）
磷酸（汕头市西陇化工厂有限公司）
XW-80A型漩涡混合器（上海青浦沪西仪器厂）
Laborota 4000真空旋转蒸发仪 （德国Heidolph公司）
冷冻干燥机（英国Labconco公司）
YQX-I型厌氧培养箱、活性钯粒、乳胶手套（上海跃进医疗器械厂）
0 12 24 36 48
DAPI Control 8.68 8.75 8.94 9.02 9.18
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