鹰嘴豆多糖的制备与抗氧化活性研究
鹰嘴豆多糖的制备与抗氧化活性研究[20200509182407]
摘要：鹰嘴豆属于豆科，耐干旱、耐贫瘠，非常适于我国西部地区种植，因此研究开发利用鹰嘴豆对中国西部地区经济发展具有重要意义。目前对鹰嘴豆的研究资料较少，特别对鹰嘴豆多糖的研究非常有限。本文采用酸性热水浸提的方法提取鹰嘴豆多糖，最终得到鹰嘴豆粗多糖的得率为24.50%。运用化学分析方法分析了鹰嘴豆粗多糖的体外抗氧化活性。研究结果表明，鹰嘴豆粗多糖能够体外清除H2O2、清除O2·自由基、清除DPPH·自由基、鳌合Fe2+、还原Fe3+，具有一定的体外抗氧化活性。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
关键字:鹰嘴豆；多糖；提取；抗氧化活性
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 鹰嘴豆多糖的提取 2
1．1．1 实验材料及预处理 2
1．1．2 主要仪器设备及试剂 2
1．1．3 实验方法 2
1．1．4 产品成分测定 3
1．2 鹰嘴豆多糖体外抗氧化活性研究 3
1．2．1 实验材料 3
1．2．2 主要仪器设备及试剂 3
1．2．3 实验方法 3
1．2．3．1 清除DPPH自由基活性测定 3
1．2．3．2 清除超氧阴离子自由基活性测定 4
1．2．3．3 金属离子螯合能力测定 4
1．2．3．4 清除过氧化氢活性测定 4
1．2．3．5 还原潜力测定 4
1．2．3．6 铁离子还原力（FRAP）测定 4
2 结果与分析 5
2．1．1 粗多糖的得率 5
2．1．2 总糖含量的测定 6
2．2．1 清除DPPH自由基活性测定 6
2．2．2 清除超氧阴离子自由基活性测定 7
2．2．3 金属离子螯合能力测定 7
2．2．4 清除过氧化氢活性测定 8
2．2．5 还原潜力测定 8
2．2．6 铁离子还原力（FRAP）测定 9
3 讨论 9
致谢 10
参考文献 11
鹰嘴豆多糖的制备与抗氧化活性研究
引言< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
br /> 引言 鹰嘴豆(Cicer arietinum L.)为一年生或越年生草本植物，豆科鹰嘴豆属中的栽培种，因其外形尖如鹰嘴，故名鹰嘴豆，别名桃豆、鸡碗豆，新疆俗称“诺胡提”。鹰嘴豆耐干旱、耐贫瘠，非常适于我国西部地区种植。鹰嘴豆富含人类所需的多种糖类、植物蛋白和氨基酸、纤维素、维生素及无机盐，并有明显的药理保健作用。鹰嘴豆对预防高血压、动脉硬化、胆固醇、降低血脂和血糖有一定疗效，是维吾尔族人常用的药食两用食品[1]。因此研究开发利用鹰嘴豆对中国西部地区经济发展具有重要意义。
需氧生物在自身的新陈代谢过程中，由于受到内外环境的刺激，在机体内不可避免地会持续产生活性氧( reactive oxygen species, ROS)[3]。活性氧极不稳定，容易与其邻近分子反应产生新的自由基。当人体中活性氧产生过多或清除过慢，就会引起机体在分子、细胞和组织器官水平的损伤，诱发如老年化、癌症、动脉粥样硬化、神经退化性病、白内障、炎症等各种慢性疾病[4]。为减少自由基对人体的损害，一些人工合成的抗氧化剂如丁基羟基茴香醚（BHA）、二叔丁基对甲酚（BHT）、没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）等被应用于食品与药品中。但是这些人工合成的抗氧化剂对人体有一定的副作用[5]。因此，寻找安全、有效、天然的抗氧化剂具有重大的意义。
近年来，对多糖的活性研究表明，其中部分多糖对物理、化学以及生物来源的多种活性氧具有清除作用[6]。目前，一些豆类多糖已经被证实具有潜在的抗氧化活性，然而鹰嘴豆多糖的抗氧化作用目前未见报道。鹰嘴豆多糖是一种酸性多糖，主要含半乳糖( Ga1)、阿拉伯糖( Ara)、半乳糖醛酸( GalA )、鼠李糖( Rha)、海藻糖( Fuc)、木糖( Xy1)以及葡萄糖( Glc)等多种成分，具有多种生物活性，是一种天然的功能性成分，它可以改善食品的食用品质、加工特性及感官特性[2]，因此研究鹰嘴豆多糖的抗氧化活性具有非常重要的意义。
1 材料与方法
1．1 鹰嘴豆多糖的提取
1．1．1 实验材料及预处理
鹰嘴豆。
用九阳豆浆机粉碎鹰嘴豆，置于干燥容器中保存备用。
1．1．2 主要仪器设备及试剂
HH-4 数显恒温水浴锅(江苏国华电器有限公司)；
电热恒温鼓风干燥箱DHG-9030A 型(上海一恒科技有限公司)；
AY-120电子精密天平、BL-220H分析天平(日本Shimadzu)；
Heidolph Laborota 4000真空旋转蒸发仪(德国Heidolph)；
SHB-III 循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；
TDL-5型台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；
722可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)；
冷冻干燥机 Alpha 1-2, 英国LABCONCO公司。
浓硫酸、苯酚、工业乙醇、葡萄糖、氢氧化钠、三氯乙酸等均为常规分析纯。
1．1．3 实验方法
1．1．3．1 材料预处理
取一定量的鹰嘴豆粉末，按 1:5(w/v) 的比例加入工业乙醇，于40℃ 下处理 1h[7]，移去上清液后重复处理2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
次，干燥，以除去鹰嘴豆中的脂肪、醇溶多糖、皂甙、色素等醇溶性物质[8]。
1．1．3．2 多糖提取
鹰嘴豆多糖的提取参照熊杰等[9]报道的方法稍作改动。取一定量经过预处理的鹰嘴豆粉末，然后加去离子水进行热水浸提，Ph 4.0-5.0，料液比1:15，水浴温度 95℃，浸提时间 3 h，浸提次数 3 次。将浸提液离心（4000 rpm，10 min）取上清液，沉淀物用相同方法重新提取，重提液再离心（4000 rpm，10 min）取上清液。在上清液中滴加10%的三氯乙酸至终浓度为5%，在5℃条件下静置过夜，离心去除沉淀即可除去蛋白，最后将上清液调节Ph至4.0-5.0。将去除蛋白的上清液，置于旋转蒸发器中50 ℃ 左右减压浓缩至原体积的 1/4以下，置于透析袋中，于流水中透析48h。透析后的提取液用冻干机进行冷冻干燥，得到鹰嘴豆粗多糖。粗多糖于干燥容器中保存，以备进一步分析用。
粗多糖得率计算公式：
粗多糖的质量(g)
粗多糖得率(%)= ×100%
鹰嘴豆粉的质量(g)
1．1．4 产品成分测定
总糖含量测定[10]：苯酚-硫酸法，以葡萄糖作标准曲线。
DPPH自由基清除活性的测定参照Li（2006）[11]和 Luo（2010）等[12]报道的方法稍作修改。
取不同浓度的样品溶液1.0mol于试管中，分别加入0.2molDPPH溶液(0.4mmol/L)，再加入2.0ml水。混匀反应体系，30min后于分光光度计517nm处测吸光值。DPPH溶液用无水乙醇配制。以水代替样品溶液、无水乙醇代替DPPH溶液，作空白实验调零用。
致谢
对于给予本文转载和引用权的资料、文献、研究思想的所有者表示真心的感谢。
摘要：鹰嘴豆属于豆科，耐干旱、耐贫瘠，非常适于我国西部地区种植，因此研究开发利用鹰嘴豆对中国西部地区经济发展具有重要意义。目前对鹰嘴豆的研究资料较少，特别对鹰嘴豆多糖的研究非常有限。本文采用酸性热水浸提的方法提取鹰嘴豆多糖，最终得到鹰嘴豆粗多糖的得率为24.50%。运用化学分析方法分析了鹰嘴豆粗多糖的体外抗氧化活性。研究结果表明，鹰嘴豆粗多糖能够体外清除H2O2、清除O2·自由基、清除DPPH·自由基、鳌合Fe2+、还原Fe3+，具有一定的体外抗氧化活性。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
关键字:鹰嘴豆；多糖；提取；抗氧化活性
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 鹰嘴豆多糖的提取 2
1．1．1 实验材料及预处理 2
1．1．2 主要仪器设备及试剂 2
1．1．3 实验方法 2
1．1．4 产品成分测定 3
1．2 鹰嘴豆多糖体外抗氧化活性研究 3
1．2．1 实验材料 3
1．2．2 主要仪器设备及试剂 3
1．2．3 实验方法 3
1．2．3．1 清除DPPH自由基活性测定 3
1．2．3．2 清除超氧阴离子自由基活性测定 4
1．2．3．3 金属离子螯合能力测定 4
1．2．3．4 清除过氧化氢活性测定 4
1．2．3．5 还原潜力测定 4
1．2．3．6 铁离子还原力（FRAP）测定 4
2 结果与分析 5
2．1．1 粗多糖的得率 5
2．1．2 总糖含量的测定 6
2．2．1 清除DPPH自由基活性测定 6
2．2．2 清除超氧阴离子自由基活性测定 7
2．2．3 金属离子螯合能力测定 7
2．2．4 清除过氧化氢活性测定 8
2．2．5 还原潜力测定 8
2．2．6 铁离子还原力（FRAP）测定 9
3 讨论 9
致谢 10
参考文献 11
鹰嘴豆多糖的制备与抗氧化活性研究
引言< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
br /> 引言 鹰嘴豆(Cicer arietinum L.)为一年生或越年生草本植物，豆科鹰嘴豆属中的栽培种，因其外形尖如鹰嘴，故名鹰嘴豆，别名桃豆、鸡碗豆，新疆俗称“诺胡提”。鹰嘴豆耐干旱、耐贫瘠，非常适于我国西部地区种植。鹰嘴豆富含人类所需的多种糖类、植物蛋白和氨基酸、纤维素、维生素及无机盐，并有明显的药理保健作用。鹰嘴豆对预防高血压、动脉硬化、胆固醇、降低血脂和血糖有一定疗效，是维吾尔族人常用的药食两用食品[1]。因此研究开发利用鹰嘴豆对中国西部地区经济发展具有重要意义。
需氧生物在自身的新陈代谢过程中，由于受到内外环境的刺激，在机体内不可避免地会持续产生活性氧( reactive oxygen species, ROS)[3]。活性氧极不稳定，容易与其邻近分子反应产生新的自由基。当人体中活性氧产生过多或清除过慢，就会引起机体在分子、细胞和组织器官水平的损伤，诱发如老年化、癌症、动脉粥样硬化、神经退化性病、白内障、炎症等各种慢性疾病[4]。为减少自由基对人体的损害，一些人工合成的抗氧化剂如丁基羟基茴香醚（BHA）、二叔丁基对甲酚（BHT）、没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）等被应用于食品与药品中。但是这些人工合成的抗氧化剂对人体有一定的副作用[5]。因此，寻找安全、有效、天然的抗氧化剂具有重大的意义。
近年来，对多糖的活性研究表明，其中部分多糖对物理、化学以及生物来源的多种活性氧具有清除作用[6]。目前，一些豆类多糖已经被证实具有潜在的抗氧化活性，然而鹰嘴豆多糖的抗氧化作用目前未见报道。鹰嘴豆多糖是一种酸性多糖，主要含半乳糖( Ga1)、阿拉伯糖( Ara)、半乳糖醛酸( GalA )、鼠李糖( Rha)、海藻糖( Fuc)、木糖( Xy1)以及葡萄糖( Glc)等多种成分，具有多种生物活性，是一种天然的功能性成分，它可以改善食品的食用品质、加工特性及感官特性[2]，因此研究鹰嘴豆多糖的抗氧化活性具有非常重要的意义。
1 材料与方法
1．1 鹰嘴豆多糖的提取
1．1．1 实验材料及预处理
鹰嘴豆。
用九阳豆浆机粉碎鹰嘴豆，置于干燥容器中保存备用。
1．1．2 主要仪器设备及试剂
HH-4 数显恒温水浴锅(江苏国华电器有限公司)；
电热恒温鼓风干燥箱DHG-9030A 型(上海一恒科技有限公司)；
AY-120电子精密天平、BL-220H分析天平(日本Shimadzu)；
Heidolph Laborota 4000真空旋转蒸发仪(德国Heidolph)；
SHB-III 循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；
TDL-5型台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；
722可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)；
冷冻干燥机 Alpha 1-2, 英国LABCONCO公司。
浓硫酸、苯酚、工业乙醇、葡萄糖、氢氧化钠、三氯乙酸等均为常规分析纯。
1．1．3 实验方法
1．1．3．1 材料预处理
取一定量的鹰嘴豆粉末，按 1:5(w/v) 的比例加入工业乙醇，于40℃ 下处理 1h[7]，移去上清液后重复处理2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
次，干燥，以除去鹰嘴豆中的脂肪、醇溶多糖、皂甙、色素等醇溶性物质[8]。
1．1．3．2 多糖提取
鹰嘴豆多糖的提取参照熊杰等[9]报道的方法稍作改动。取一定量经过预处理的鹰嘴豆粉末，然后加去离子水进行热水浸提，Ph 4.0-5.0，料液比1:15，水浴温度 95℃，浸提时间 3 h，浸提次数 3 次。将浸提液离心（4000 rpm，10 min）取上清液，沉淀物用相同方法重新提取，重提液再离心（4000 rpm，10 min）取上清液。在上清液中滴加10%的三氯乙酸至终浓度为5%，在5℃条件下静置过夜，离心去除沉淀即可除去蛋白，最后将上清液调节Ph至4.0-5.0。将去除蛋白的上清液，置于旋转蒸发器中50 ℃ 左右减压浓缩至原体积的 1/4以下，置于透析袋中，于流水中透析48h。透析后的提取液用冻干机进行冷冻干燥，得到鹰嘴豆粗多糖。粗多糖于干燥容器中保存，以备进一步分析用。
粗多糖得率计算公式：
粗多糖的质量(g)
粗多糖得率(%)= ×100%
鹰嘴豆粉的质量(g)
1．1．4 产品成分测定
总糖含量测定[10]：苯酚-硫酸法，以葡萄糖作标准曲线。
DPPH自由基清除活性的测定参照Li（2006）[11]和 Luo（2010）等[12]报道的方法稍作修改。
取不同浓度的样品溶液1.0mol于试管中，分别加入0.2molDPPH溶液(0.4mmol/L)，再加入2.0ml水。混匀反应体系，30min后于分光光度计517nm处测吸光值。DPPH溶液用无水乙醇配制。以水代替样品溶液、无水乙醇代替DPPH溶液，作空白实验调零用。
致谢
对于给予本文转载和引用权的资料、文献、研究思想的所有者表示真心的感谢。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/swgc/spkxygc/506.html
