穿心莲内酯对食源性致病菌的抑菌活性研究
摘要：食源性致病菌对人类的健康存在着直接或间接的危害，故食源性致病菌的绿色控制是目前食品安全面临的难题和瓶颈。穿心莲为天然草本植物，不仅有消炎、抗病毒、抗肿瘤、解热、防治心血管疾病等药理作用，而且在抑制食源性致病菌方面有很大的潜力。本文研究了穿心莲内酯及其乙酰化衍生物对大肠杆菌、单增李斯特菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌四种常见食源性致病菌的抑菌活性。实验结果表明穿心莲内酯及乙酰化衍生物对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌作用不明显，但乙酰穿心莲内酯对大肠杆菌和单增李斯特菌有较好的抑菌效果。因此，针对这两种菌，进一步进行了抑菌机理研究，结果表明加入乙酰穿心莲内酯后能改变细菌细胞膜的通透性，使细胞内蛋白质和碱性磷酸酶外渗，从而达到抑菌作用。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 3
Key words 3
引言 3
1 材料与方法 4
1．1 材料与设备 4
1．1．1 材料 4
1．1．2 设备 5
1．2 方法 5
1．2．1 抑菌液的配制 5
1．2．2 菌种活化及菌悬液的制备 5
1．2．3 穿心莲内酯抑菌活性研究 5
1．2．4 穿心莲抑菌机理研究 5
2 结果与分析 7
2．1 穿心莲内酯抑菌活性研究 7
2．1．1 大肠杆菌 7
2．1．2 单增李斯特菌 8
2．1．3 沙门氏菌 8
2．1．4 金黄色葡萄球菌 9
2．2 穿心莲内酯抑菌机理研究 9
2．2．1 穿心莲内酯对供试菌培养液中蛋白质浓度的影响 9
2．2．2 穿心莲内酯对供试菌培养液中碱性磷酸酶浓度的影响 10
3 讨论 11
致谢 12
参考文献： 12
穿心莲内酯对食源性致病菌的抑菌活性研究
引言
引言
穿心莲( Andrographis paniculata ( Burm. f ) Nees) 为爵床科植物的干燥地上部分，又名
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
一见喜，苦草，印度草。穿心莲的主要成分有内酯、甾醇、多种黄酮类化合物、生物碱， 还有少量蛋白质和维生素等[] 。穿心莲内酯(andrographolide)为爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物[]，是中药穿心莲的主要有效成分之一，具有清热解毒、凉血消肿等功能[]。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗炎抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管疾病、保肝利胆等作用[]。
穿心莲内酯 （C20H30O5） 结构式见图1[]，呈方棱形或片状结晶（乙醇或甲醇），无臭，味极苦，易溶于丙酮、甲醇、乙醇，在水中几乎不溶。熔点230～231 ℃ ，比旋度 [α]126.6±2 °（冰醋酸）。在水溶液中易水解、开环、异构化，故影响药物稳定性。在对穿心莲内酯的稳定性研究中发现[]，在不同温度、不同pH值环境、不同的生物样品及不同有机溶剂中，穿心莲内酯稳定性都有较明显的差异[]。温度越低，穿心莲内酯的稳定性越好；在碱性条件下不稳定，且随着碱性强度的增加，其不稳定性增强；在pH值为7的条件下，该药并不稳定，其最稳定的pH值为3 ~5；在酸性条件下，该药较稳定，但并非酸性越强，稳定性就越好。低于pH值3时，其稳定性反而降低。穿心莲内酯在氯仿中较为稳定，而在质子性溶剂中稳定性较差；穿心莲内酯在小牛血清中最稳定，在小鼠肝匀浆中稳定性最差。
图1 穿心莲内酯结构式
有很多研究表明穿心莲内酯有一定的抑菌效果[]。廖延智、辛少蓉[]等人对穿心莲抑菌物质提取条件以及抑菌效果进行了研究。穿心莲抑菌的主要有效成分为穿心莲内酯，用滤纸片法测定穿心莲内酯的抑菌活性。结果确定了最佳提取条件并表明穿心莲提取抑菌物质对肠道性致病菌( 大肠杆菌、沙门氏菌) 、水生生物常见致病真菌有较强的抑菌效果。王莉娟[]则用管碟法对穿心莲注射液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌、绿脓杆菌的体外抑菌作用进行了研究，其结果表明对这四种菌都有明显的抑菌效果，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最佳，对绿脓杆菌因作用较弱。卢炜、邱世翠等人[]用KB纸片扩散法探讨穿心莲的体外抑菌作用。结果表明穿心莲对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用。实验结果得出，穿心莲对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用。尤其对甲型链球菌、乙型链球菌抑菌效果更明显。
食源性致病菌导致的疾病是食品安全的关键问题[]，其中动物性食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、单增李斯特菌等引起的食源性疾病是食品安全的主要问题。目前为止，没有文献就穿心莲内酯对四种常见食源性致病菌的抑菌作用进行系统的研究和比较，本文通过测定穿心莲内酯及乙酰穿心莲内酯对这四种菌的抑制作用，了解穿心莲内酯抑菌特性，为进一步探索穿心莲内酯在食品保鲜防腐和食品安全中的应用提供依据。
1 材料与方法
1．1 材料与设备
1．1．1 材料
穿心莲内酯TCM005140919 南京普斯艾么中药研究所
羟丙基β环糊精 泰兴市一鸣生物制品有限公司
营养琼脂培养基 上海盛思生化科技有限公司
胰酪大豆胨肉汤（TSB） 青岛高科园海博生物技术有限公司
单增李斯特菌 CICC公司 （批号21634）
大肠杆菌 ATCC公司 （批号25922）
金黄色葡萄球菌 ATCC公司 （批号25923）
沙门氏菌 ATCC公司 （批号25933）
碱性磷酸酶（AKP）测试盒 Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute
氢氧化钠 分析纯
BCA二钠盐 分析纯
无水碳酸钠 分析纯
酒石酸钠 分析纯
碳酸氢钠 分析纯
CuSO4?5H2O 分析纯
1．1．2 设备
G16WS台式高速离心机 长沙湘智离心机仪器有限公司
H1650W台式微量高速离心机 长沙湘仪离心机仪器有限公司
SWCJID单人净化工作台 苏州净化公司
SHX250B生化培养箱 常州冠军仪器制造有限公司
SHZ82A气浴恒温振荡器 金坛市科析仪器有限公司
T18 digital ULTRA TURRAX IKA公司
紫外可见分光光度计 北京莱伯泰科仪器有限公司
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 3
Key words 3
引言 3
1 材料与方法 4
1．1 材料与设备 4
1．1．1 材料 4
1．1．2 设备 5
1．2 方法 5
1．2．1 抑菌液的配制 5
1．2．2 菌种活化及菌悬液的制备 5
1．2．3 穿心莲内酯抑菌活性研究 5
1．2．4 穿心莲抑菌机理研究 5
2 结果与分析 7
2．1 穿心莲内酯抑菌活性研究 7
2．1．1 大肠杆菌 7
2．1．2 单增李斯特菌 8
2．1．3 沙门氏菌 8
2．1．4 金黄色葡萄球菌 9
2．2 穿心莲内酯抑菌机理研究 9
2．2．1 穿心莲内酯对供试菌培养液中蛋白质浓度的影响 9
2．2．2 穿心莲内酯对供试菌培养液中碱性磷酸酶浓度的影响 10
3 讨论 11
致谢 12
参考文献： 12
穿心莲内酯对食源性致病菌的抑菌活性研究
引言
引言
穿心莲( Andrographis paniculata ( Burm. f ) Nees) 为爵床科植物的干燥地上部分，又名
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一见喜，苦草，印度草。穿心莲的主要成分有内酯、甾醇、多种黄酮类化合物、生物碱， 还有少量蛋白质和维生素等[] 。穿心莲内酯(andrographolide)为爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物[]，是中药穿心莲的主要有效成分之一，具有清热解毒、凉血消肿等功能[]。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗炎抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管疾病、保肝利胆等作用[]。
穿心莲内酯 （C20H30O5） 结构式见图1[]，呈方棱形或片状结晶（乙醇或甲醇），无臭，味极苦，易溶于丙酮、甲醇、乙醇，在水中几乎不溶。熔点230～231 ℃ ，比旋度 [α]126.6±2 °（冰醋酸）。在水溶液中易水解、开环、异构化，故影响药物稳定性。在对穿心莲内酯的稳定性研究中发现[]，在不同温度、不同pH值环境、不同的生物样品及不同有机溶剂中，穿心莲内酯稳定性都有较明显的差异[]。温度越低，穿心莲内酯的稳定性越好；在碱性条件下不稳定，且随着碱性强度的增加，其不稳定性增强；在pH值为7的条件下，该药并不稳定，其最稳定的pH值为3 ~5；在酸性条件下，该药较稳定，但并非酸性越强，稳定性就越好。低于pH值3时，其稳定性反而降低。穿心莲内酯在氯仿中较为稳定，而在质子性溶剂中稳定性较差；穿心莲内酯在小牛血清中最稳定，在小鼠肝匀浆中稳定性最差。
图1 穿心莲内酯结构式
有很多研究表明穿心莲内酯有一定的抑菌效果[]。廖延智、辛少蓉[]等人对穿心莲抑菌物质提取条件以及抑菌效果进行了研究。穿心莲抑菌的主要有效成分为穿心莲内酯，用滤纸片法测定穿心莲内酯的抑菌活性。结果确定了最佳提取条件并表明穿心莲提取抑菌物质对肠道性致病菌( 大肠杆菌、沙门氏菌) 、水生生物常见致病真菌有较强的抑菌效果。王莉娟[]则用管碟法对穿心莲注射液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌、绿脓杆菌的体外抑菌作用进行了研究，其结果表明对这四种菌都有明显的抑菌效果，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最佳，对绿脓杆菌因作用较弱。卢炜、邱世翠等人[]用KB纸片扩散法探讨穿心莲的体外抑菌作用。结果表明穿心莲对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用。实验结果得出，穿心莲对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用。尤其对甲型链球菌、乙型链球菌抑菌效果更明显。
食源性致病菌导致的疾病是食品安全的关键问题[]，其中动物性食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、单增李斯特菌等引起的食源性疾病是食品安全的主要问题。目前为止，没有文献就穿心莲内酯对四种常见食源性致病菌的抑菌作用进行系统的研究和比较，本文通过测定穿心莲内酯及乙酰穿心莲内酯对这四种菌的抑制作用，了解穿心莲内酯抑菌特性，为进一步探索穿心莲内酯在食品保鲜防腐和食品安全中的应用提供依据。
1 材料与方法
1．1 材料与设备
1．1．1 材料
穿心莲内酯TCM005140919 南京普斯艾么中药研究所
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单增李斯特菌 CICC公司 （批号21634）
大肠杆菌 ATCC公司 （批号25922）
金黄色葡萄球菌 ATCC公司 （批号25923）
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氢氧化钠 分析纯
BCA二钠盐 分析纯
无水碳酸钠 分析纯
酒石酸钠 分析纯
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1．1．2 设备
G16WS台式高速离心机 长沙湘智离心机仪器有限公司
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