超高效液相色谱法同时测定牛肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留
氟喹诺酮类和磺胺类药物是人工合成的高效广谱抗菌药，已被广泛用于动物性食品饲料添加剂和病畜的疾病检测。不合理用药、滥用药物现象的发生导致氟喹诺酮类和磺胺类药物在动物性食品中残留超标，对消费者构成潜在威胁。本试验建立了用超高效液相色谱法同时检测牛肉中3种氟喹诺酮类药物（环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星）和5种磺胺类药物（磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲异恶唑）的方法，用磷酸盐缓冲液提取绞碎的牛肉组织样品，混合型阳离子交换固相萃取柱（MCX柱）进行净化，超高效液相色谱-紫外串联荧光检测器检测。本方法检测限低、分离度好，节省人力与试剂耗材，缩短检测时间，可实现兽药残留的多通道高通量分析。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1试验材料 2
1.1.2标准溶液及提取液配置2
1.2试验方法2
1.2.1样品前处理3
1.2.2检测方法的建立3
1.2.3标准曲线及检出限的确定3
1.2.4 精密度及添加回收率试验3
2结果与分析3
2.1标准品色谱图3
2.2标准曲线及检出限4
2.3 加标回收及精密度4
3 讨论 6
3.1色谱条件的选择6
3.2方法的回收率、精密度、检出限 6
致谢6
参考文献7
超高效液相色谱法同时测定牛肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留
食品科学与工程 李珊珊
引言
近年来，随着我国养殖业现代化、规模化发展，兽药得到广泛应用。兽药在降低动物发病率与死亡率，促进动物生长和改善产品质量上起到重要作用，但兽药使用易导致药物残留。兽药残留作为食品污染中的一大类，是指给动物使用兽药后积聚在组织或细胞内的药物原形和代谢产物[1]。尽管动物性食品中兽药残留水平通常很低，消费者食用后发生急性中毒的可能性很小，但这种长期、低水平的接触方式主要产生各种慢性、蓄积毒性，对消费者健康和环 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
境的危害具有隐蔽性，易造成实质性和难以逆转的危害。目前市场上常见的兽药主要有：氟喹诺酮类、磺胺类、硝基呋喃类、硝基咪唑类、四环素类和大环内酯类等。
畜肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留检测是我国近年来食品安全检测的重要内容。氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones, FQs），又称沙星类、吡啶酮酸类，属于第三代喹诺酮类化学合成抗生素。FQs作为人畜共用的高效广谱抗菌药，具有抗菌效果强，作用时间长，不良反应小等优点，与其它常用抗菌药物共同使用时无交叉耐药性[2]，适用于临床常见的多种感染性疾病[3]。消费者长期食用含有残留FQs的食品，相当于持续摄入低 剂量FQs，会产生精神异常、变态反应、肝脏损害、细菌耐药性等危害[4]。磺胺类药物（Sulfonamides, SAs）是养殖市场常用的一类消炎抗菌药。SAs在动物生长过程中常用于防治球虫病、盲肠炎、白痢、肝炎及其他细菌性疾病[5]。SAs在动物体内的作用和代谢时间相对较长，往往造成可食性组织中有药物残留[6]。SAs残留能够破坏人的造血系统，产生白细胞减少症、粒细胞减少症，并可致溶血性贫血引起人的过敏反应，严重者甚至出现死亡。此外，SAs的不合理使用还能导致许多细菌产生抗药性，从而影响临床治疗[7]。我国农业部在《动物源性食品中兽药最高残留限量》（农业部235号公告2002）中规定磺胺类药物在所有动物源性食品中的最高残留限量为100 μg/kg，氟喹诺酮类药物为10~1900 μg/kg[8]。
目前氟喹诺酮类和磺胺类药物残留检测的主要方法有微生物法、免疫分析法、光学分析法、色谱分析法和毛细管电泳法等。微生物法操作简单，所需费用成本低，但检测限过高，特异性不强，灵敏度低，易受其它抗菌药物影响，适合快速筛选；免疫分析法具有一定灵敏度和特异性，不需要昂贵的仪器设备，但易受交叉反应影响，适用于大量样品初步筛选；光学分析法操作简单，使用廉价，但检测灵敏度较低，稳定性较差，线性范围窄，在使用过程中也存在一定限制；色谱分析法简便、快捷，但前处理复杂，仪器昂贵，操作中需使用大量有毒试剂，易对环境造成污染。
超高效液相色谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography, UPLC）相较于传统的检测方法而言，具有速度快、分离度高的明显优势。本试验选用牛肉作为研究对象，建立了用超高效液相色谱法同时检测牛肉中3种氟喹诺酮类药物（环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星）和5种磺胺类药物（磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲异恶唑）的方法，旨在实现兽药残留的多通道高通量分析。
1 材料与方法
材料
1.1.1试验材料
供试材料为市售鲜牛肉，购于南京市苏果超市。
盐酸环丙沙星（ciprofloxacin, CIP）、恩诺沙星（enrofloxacin, ENR）、沙拉沙星（sarafloxacin, SAR）、磺胺噻唑（sulfathiazole, ST）、磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine, SM2）、磺胺二甲异恶唑（sulfisoxazole, SIZ）、磺胺甲恶唑（sulfamethoxazole, SMZ）、磺胺二甲氧哒嗪（sulfadimethoxine, SDM）购于德国Dr. Ehrenstorfer公司；乙腈、甲醇（色谱纯）购于美国 Fisher 公司；甲酸购于美国ACS恩科化学公司；磷酸氢二钾（K2HPO4?3H2O）购于上海安普生物科技有限公司；磷酸二氢钾（KH2PO4）购于国药集团化学试剂有限公司；MCX固相萃取柱购于美国Waters公司。
Waters Aqulity HClass超高效液相色谱仪（配有PDA、FLR检测器）购于美国Waters公司；NEVAP 24管氮吹仪购于美国Organomation公司；D16C高速离心机、CPA224S电子天平购于德国Sartorius公司；advance EDI纯水仪购于德国Sartorius公司。
1.1.2标准溶液及提取液配制
单标储备液的配制：3种氟喹诺酮和5种磺胺各准确称取10.0 mg标准品，甲醇稀释，定容到10.00 mL容量瓶中，配置成浓度为1.00 mg/mL的标准储备液。
混合标准液的配制：分别准确移取单标储备液并用甲醇定容，混合标准液中3种氟喹诺酮浓度为1.00 μg/mL，5种磺胺浓度为10.0 μg/mL。
提取液的配制：称取8 g磷酸二氢钾（KH2PO4）和2 g磷酸氢二钾（K2HPO4?3H2O），一级水溶解并定容至1000 mL。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1试验材料 2
1.1.2标准溶液及提取液配置2
1.2试验方法2
1.2.1样品前处理3
1.2.2检测方法的建立3
1.2.3标准曲线及检出限的确定3
1.2.4 精密度及添加回收率试验3
2结果与分析3
2.1标准品色谱图3
2.2标准曲线及检出限4
2.3 加标回收及精密度4
3 讨论 6
3.1色谱条件的选择6
3.2方法的回收率、精密度、检出限 6
致谢6
参考文献7
超高效液相色谱法同时测定牛肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留
食品科学与工程 李珊珊
引言
近年来，随着我国养殖业现代化、规模化发展，兽药得到广泛应用。兽药在降低动物发病率与死亡率，促进动物生长和改善产品质量上起到重要作用，但兽药使用易导致药物残留。兽药残留作为食品污染中的一大类，是指给动物使用兽药后积聚在组织或细胞内的药物原形和代谢产物[1]。尽管动物性食品中兽药残留水平通常很低，消费者食用后发生急性中毒的可能性很小，但这种长期、低水平的接触方式主要产生各种慢性、蓄积毒性，对消费者健康和环 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
境的危害具有隐蔽性，易造成实质性和难以逆转的危害。目前市场上常见的兽药主要有：氟喹诺酮类、磺胺类、硝基呋喃类、硝基咪唑类、四环素类和大环内酯类等。
畜肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留检测是我国近年来食品安全检测的重要内容。氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones, FQs），又称沙星类、吡啶酮酸类，属于第三代喹诺酮类化学合成抗生素。FQs作为人畜共用的高效广谱抗菌药，具有抗菌效果强，作用时间长，不良反应小等优点，与其它常用抗菌药物共同使用时无交叉耐药性[2]，适用于临床常见的多种感染性疾病[3]。消费者长期食用含有残留FQs的食品，相当于持续摄入低 剂量FQs，会产生精神异常、变态反应、肝脏损害、细菌耐药性等危害[4]。磺胺类药物（Sulfonamides, SAs）是养殖市场常用的一类消炎抗菌药。SAs在动物生长过程中常用于防治球虫病、盲肠炎、白痢、肝炎及其他细菌性疾病[5]。SAs在动物体内的作用和代谢时间相对较长，往往造成可食性组织中有药物残留[6]。SAs残留能够破坏人的造血系统，产生白细胞减少症、粒细胞减少症，并可致溶血性贫血引起人的过敏反应，严重者甚至出现死亡。此外，SAs的不合理使用还能导致许多细菌产生抗药性，从而影响临床治疗[7]。我国农业部在《动物源性食品中兽药最高残留限量》（农业部235号公告2002）中规定磺胺类药物在所有动物源性食品中的最高残留限量为100 μg/kg，氟喹诺酮类药物为10~1900 μg/kg[8]。
目前氟喹诺酮类和磺胺类药物残留检测的主要方法有微生物法、免疫分析法、光学分析法、色谱分析法和毛细管电泳法等。微生物法操作简单，所需费用成本低，但检测限过高，特异性不强，灵敏度低，易受其它抗菌药物影响，适合快速筛选；免疫分析法具有一定灵敏度和特异性，不需要昂贵的仪器设备，但易受交叉反应影响，适用于大量样品初步筛选；光学分析法操作简单，使用廉价，但检测灵敏度较低，稳定性较差，线性范围窄，在使用过程中也存在一定限制；色谱分析法简便、快捷，但前处理复杂，仪器昂贵，操作中需使用大量有毒试剂，易对环境造成污染。
超高效液相色谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography, UPLC）相较于传统的检测方法而言，具有速度快、分离度高的明显优势。本试验选用牛肉作为研究对象，建立了用超高效液相色谱法同时检测牛肉中3种氟喹诺酮类药物（环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星）和5种磺胺类药物（磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲异恶唑）的方法，旨在实现兽药残留的多通道高通量分析。
1 材料与方法
材料
1.1.1试验材料
供试材料为市售鲜牛肉，购于南京市苏果超市。
盐酸环丙沙星（ciprofloxacin, CIP）、恩诺沙星（enrofloxacin, ENR）、沙拉沙星（sarafloxacin, SAR）、磺胺噻唑（sulfathiazole, ST）、磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine, SM2）、磺胺二甲异恶唑（sulfisoxazole, SIZ）、磺胺甲恶唑（sulfamethoxazole, SMZ）、磺胺二甲氧哒嗪（sulfadimethoxine, SDM）购于德国Dr. Ehrenstorfer公司；乙腈、甲醇（色谱纯）购于美国 Fisher 公司；甲酸购于美国ACS恩科化学公司；磷酸氢二钾（K2HPO4?3H2O）购于上海安普生物科技有限公司；磷酸二氢钾（KH2PO4）购于国药集团化学试剂有限公司；MCX固相萃取柱购于美国Waters公司。
Waters Aqulity HClass超高效液相色谱仪（配有PDA、FLR检测器）购于美国Waters公司；NEVAP 24管氮吹仪购于美国Organomation公司；D16C高速离心机、CPA224S电子天平购于德国Sartorius公司；advance EDI纯水仪购于德国Sartorius公司。
1.1.2标准溶液及提取液配制
单标储备液的配制：3种氟喹诺酮和5种磺胺各准确称取10.0 mg标准品，甲醇稀释，定容到10.00 mL容量瓶中，配置成浓度为1.00 mg/mL的标准储备液。
混合标准液的配制：分别准确移取单标储备液并用甲醇定容，混合标准液中3种氟喹诺酮浓度为1.00 μg/mL，5种磺胺浓度为10.0 μg/mL。
提取液的配制：称取8 g磷酸二氢钾（KH2PO4）和2 g磷酸氢二钾（K2HPO4?3H2O），一级水溶解并定容至1000 mL。
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