南苜蓿全草挥发油成分分析及抑菌作用分析食品与生物工程【字数：8053】
摘 要采用气相色谱质谱联仪对南苜蓿全草挥发油进行成分分析，其中主要的成分有植物醇（2.52%）、叶绿醇（48.21%）、亚麻酸乙酯（3.86%）、邻苯二甲酸酯（2.86%）、酚类及多种烷烃。用纸片扩散法和琼脂培养基稀释法测定大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑制浓度MIC，得出南苜蓿挥发油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长有一定的抑制作用，对金黄色葡萄球菌的MIC为0.8 mg/mL，对大肠杆菌的MIC为0.4 mg/mL。通过化学成分分析可知，南苜蓿挥发油富含有多种有益的化学成分；抑菌实验结果表明，南苜蓿挥发油具有显著的抑菌作用。
目录
1.引言 1
2.材料与方法 2
2.1材料与仪器 2
2.1.1材料与菌种 2
2.1.2仪器与试剂 2
2.2南苜蓿全草挥发油的制备 2
2.3南苜蓿全草挥发油成分分析 3
2.4南苜蓿全草挥发油抑菌活性测定 3
2.4.1 LB培养基的制备 3
2.4.2菌种活化 3
2.4.3菌悬液制备 4
2.4.4样液的制备 4
2.4.5抑菌活性测定 4
2.4.6南苜蓿全草挥发油最小抑菌浓度(MIC)的测定 4
3.结果与分析 5
3.1 气相色谱质谱结果分析 5
3.1.1 南苜蓿全草挥发油总离子流色谱图 5
3.1.2 南苜蓿全草挥发油成分组成 5
3.1.3 南苜蓿全草挥发油成分分析 9
3.2 南苜蓿全草挥发油抑菌活性测定结果 10
3.3 南苜蓿全草挥发油最小抑菌浓度（MIC）的测定结果 10
4.讨论 13
参考文献 14
致谢 16
1.引言
南苜蓿（Medicago polymorpha?Linn）又俗称草头，豆科苜蓿属，多数为一年或二年生草本，高可达90厘米。茎近四棱形，基部分枝，叶片卵状长圆形，先端渐尖，基部耳状，边缘具不整齐条裂，脉纹明显；叶柄细长柔软，花序头状伞形，总花梗腋生，纤细无毛，苞片甚小，尾尖；萼齿披针形，花冠黄色，旗瓣倒卵 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
形，翼瓣长圆形，子房长圆形，种子长肾形，35月开花，56月结果。原产地为伊朗，后引种到各个大陆，据《史记大宛列传》记载[1]：汉使取其实来，于是天子始种苜蓿、葡萄肥饶地，可知我国汉代便开始引入苜蓿。现南苜蓿主要分布在我国华东、华南和云贵等地，因其耐寒的特点导致其对种植环境的适应性较强[2]。作为世界上种植历史最为悠久，分布范围最为广泛、栽培面积最大、生产化水平最高、经济价值相当高的草本[3]，素有“牧草之王”的美名。
南苜蓿在荚果成熟期一次性收获的干物质产量高达10.3吨/公顷；在营养期的干物质产量达5.98吨/公顷，茎叶比为1:0.7。营养成分为:蛋白质、脂肪和纤维素等。南苜蓿每100 g鲜茎叶含胡萝卜素约31.5 mg、核黄素0.22 mg，此外还富含维生素B、C、E、矿物质等营养成分，多于大部分蔬菜[4]，且高钾低钠，可见，南苜蓿具有多项的营养优势，加上其幼嫩补位常被人食用，综合评定为“蔬菜之王”[5]。
苜蓿中的功效成分主要包含有黄酮甘类、苜蓿素和挥发油等，它们具有清热利尿、通淋解毒的功效，可用于治疗黄疸、尿路结石、痔疮出血的疾病[6]。目前对挥发油的研究多集中在紫花苜蓿[7]，而很少有对南苜蓿挥发油的研究。
本课题主要是以南苜蓿为原料，利用水蒸气蒸馏法提取南苜蓿全草挥发油，通过GCMS对其主要成分进行分析，同时进行抑菌活性的测定，为植物杀菌剂这一新型道路提供方向，为南苜蓿资源综合开发利用提供一定的理论依据。
2.材料与方法
2.1材料与仪器
2.1.1材料与菌种
南苜蓿采购于常熟安定街菜市场，由生物与食品工程学院鉴定为南苜蓿全草（Medicago polymorpha?Linn）。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）由生物与食品工程学院提供。
2.1.2仪器与试剂
三氯甲烷、石油醚、正构烷烃C7～C30标准品、二甲基亚砜（DMSO）、氢氧化钠、酵母提取物、蒸馏水。
试剂与仪器
厂商
胰蛋白胨
无锡市佳妮化工有限公司
氯化钠
江苏强盛功能化学股份有限公司
琼脂粉
南京茂捷微生物科技有限公司
RE52系列型旋转蒸发仪
上海亚荣生化仪器厂
GCMSQP2010气相色谱质谱联用仪
广州科能仪器设备有限公司
SHB IIIA型循环水式真空泵
临海市永昊真空设备有限公司
PL602E/02型电子天平
上海梅特勒托利多仪器有限公司
YXQ LS 100A型立式压力蒸汽灭菌锅
上海东亚压力容器制造有限公司
DHP 90系列不锈钢胆电热恒温培养箱
上海索普仪器有限公司
2.2南苜蓿全草挥发油的制备
取新鲜南苜蓿均匀铺放进恒温干燥箱中，70℃，烘2天，将干燥南苜蓿常温保存。根据单因素实验和正交实验的结果，选取最佳提取方案，将干燥后的南苜蓿全草碾碎过筛10目筛，称取20 g，置于2000 mL的圆底烧瓶中，按照1：40的物料比加入800 mL蒸馏水静置2~3个小时[8]。浸泡好后把圆底烧瓶放进电热套里，支架固定，安装好冷凝装置后，通入自来水开启电热装置。查看装置连接处是否存在连接不紧密导致的漏气现象，若一切正常，则继续加热。保持持续加热蒸馏9小时后，得到透明淡黄色油状物，用三氯甲烷冲洗仪器壁上的油注入称量瓶内。利用旋转蒸发仪设置24℃将三氯甲烷蒸发干净[9]，称量其中剩余油滴的重量。总挥发油用保鲜膜密封，放入冰箱冷藏室内保存。
2.3南苜蓿全草挥发油成分分析
色谱条件：Rxi5sil柱（30 m，0.25 mm，0.25 μm）；载气为氦气，1.0 mL/min流速；精油溶于石油醚，1.0μL样品，分流比为1:30；柱温设定为40℃（等温4min），升温速度为5℃/min至60℃，60℃等温2min，温度从60℃升至110℃。15℃/min，在110℃保持4min，以5℃/min升高至180℃，在180℃等温5min，从180℃升至280℃，25℃/min，保持在最后280℃，5min。
质谱条件：传输线温度250℃;离子阱温度230℃;70 eV电离能；35500 amu扫描范围。
目录
1.引言 1
2.材料与方法 2
2.1材料与仪器 2
2.1.1材料与菌种 2
2.1.2仪器与试剂 2
2.2南苜蓿全草挥发油的制备 2
2.3南苜蓿全草挥发油成分分析 3
2.4南苜蓿全草挥发油抑菌活性测定 3
2.4.1 LB培养基的制备 3
2.4.2菌种活化 3
2.4.3菌悬液制备 4
2.4.4样液的制备 4
2.4.5抑菌活性测定 4
2.4.6南苜蓿全草挥发油最小抑菌浓度(MIC)的测定 4
3.结果与分析 5
3.1 气相色谱质谱结果分析 5
3.1.1 南苜蓿全草挥发油总离子流色谱图 5
3.1.2 南苜蓿全草挥发油成分组成 5
3.1.3 南苜蓿全草挥发油成分分析 9
3.2 南苜蓿全草挥发油抑菌活性测定结果 10
3.3 南苜蓿全草挥发油最小抑菌浓度（MIC）的测定结果 10
4.讨论 13
参考文献 14
致谢 16
1.引言
南苜蓿（Medicago polymorpha?Linn）又俗称草头，豆科苜蓿属，多数为一年或二年生草本，高可达90厘米。茎近四棱形，基部分枝，叶片卵状长圆形，先端渐尖，基部耳状，边缘具不整齐条裂，脉纹明显；叶柄细长柔软，花序头状伞形，总花梗腋生，纤细无毛，苞片甚小，尾尖；萼齿披针形，花冠黄色，旗瓣倒卵 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
形，翼瓣长圆形，子房长圆形，种子长肾形，35月开花，56月结果。原产地为伊朗，后引种到各个大陆，据《史记大宛列传》记载[1]：汉使取其实来，于是天子始种苜蓿、葡萄肥饶地，可知我国汉代便开始引入苜蓿。现南苜蓿主要分布在我国华东、华南和云贵等地，因其耐寒的特点导致其对种植环境的适应性较强[2]。作为世界上种植历史最为悠久，分布范围最为广泛、栽培面积最大、生产化水平最高、经济价值相当高的草本[3]，素有“牧草之王”的美名。
南苜蓿在荚果成熟期一次性收获的干物质产量高达10.3吨/公顷；在营养期的干物质产量达5.98吨/公顷，茎叶比为1:0.7。营养成分为:蛋白质、脂肪和纤维素等。南苜蓿每100 g鲜茎叶含胡萝卜素约31.5 mg、核黄素0.22 mg，此外还富含维生素B、C、E、矿物质等营养成分，多于大部分蔬菜[4]，且高钾低钠，可见，南苜蓿具有多项的营养优势，加上其幼嫩补位常被人食用，综合评定为“蔬菜之王”[5]。
苜蓿中的功效成分主要包含有黄酮甘类、苜蓿素和挥发油等，它们具有清热利尿、通淋解毒的功效，可用于治疗黄疸、尿路结石、痔疮出血的疾病[6]。目前对挥发油的研究多集中在紫花苜蓿[7]，而很少有对南苜蓿挥发油的研究。
本课题主要是以南苜蓿为原料，利用水蒸气蒸馏法提取南苜蓿全草挥发油，通过GCMS对其主要成分进行分析，同时进行抑菌活性的测定，为植物杀菌剂这一新型道路提供方向，为南苜蓿资源综合开发利用提供一定的理论依据。
2.材料与方法
2.1材料与仪器
2.1.1材料与菌种
南苜蓿采购于常熟安定街菜市场，由生物与食品工程学院鉴定为南苜蓿全草（Medicago polymorpha?Linn）。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）由生物与食品工程学院提供。
2.1.2仪器与试剂
三氯甲烷、石油醚、正构烷烃C7～C30标准品、二甲基亚砜（DMSO）、氢氧化钠、酵母提取物、蒸馏水。
试剂与仪器
厂商
胰蛋白胨
无锡市佳妮化工有限公司
氯化钠
江苏强盛功能化学股份有限公司
琼脂粉
南京茂捷微生物科技有限公司
RE52系列型旋转蒸发仪
上海亚荣生化仪器厂
GCMSQP2010气相色谱质谱联用仪
广州科能仪器设备有限公司
SHB IIIA型循环水式真空泵
临海市永昊真空设备有限公司
PL602E/02型电子天平
上海梅特勒托利多仪器有限公司
YXQ LS 100A型立式压力蒸汽灭菌锅
上海东亚压力容器制造有限公司
DHP 90系列不锈钢胆电热恒温培养箱
上海索普仪器有限公司
2.2南苜蓿全草挥发油的制备
取新鲜南苜蓿均匀铺放进恒温干燥箱中，70℃，烘2天，将干燥南苜蓿常温保存。根据单因素实验和正交实验的结果，选取最佳提取方案，将干燥后的南苜蓿全草碾碎过筛10目筛，称取20 g，置于2000 mL的圆底烧瓶中，按照1：40的物料比加入800 mL蒸馏水静置2~3个小时[8]。浸泡好后把圆底烧瓶放进电热套里，支架固定，安装好冷凝装置后，通入自来水开启电热装置。查看装置连接处是否存在连接不紧密导致的漏气现象，若一切正常，则继续加热。保持持续加热蒸馏9小时后，得到透明淡黄色油状物，用三氯甲烷冲洗仪器壁上的油注入称量瓶内。利用旋转蒸发仪设置24℃将三氯甲烷蒸发干净[9]，称量其中剩余油滴的重量。总挥发油用保鲜膜密封，放入冰箱冷藏室内保存。
2.3南苜蓿全草挥发油成分分析
色谱条件：Rxi5sil柱（30 m，0.25 mm，0.25 μm）；载气为氦气，1.0 mL/min流速；精油溶于石油醚，1.0μL样品，分流比为1:30；柱温设定为40℃（等温4min），升温速度为5℃/min至60℃，60℃等温2min，温度从60℃升至110℃。15℃/min，在110℃保持4min，以5℃/min升高至180℃，在180℃等温5min，从180℃升至280℃，25℃/min，保持在最后280℃，5min。
质谱条件：传输线温度250℃;离子阱温度230℃;70 eV电离能；35500 amu扫描范围。
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