BABA对桃果实腐烂和抗病及抗氧化相关酶活性的影响
BABA对桃果实腐烂和抗病及抗氧化相关酶活性的影响[20200509183452]
摘要：以“septemberfree”桃果实为材料，研究了BABA处理对桃果实在常温（20℃）贮藏时果实腐烂和抗病及抗氧化相关酶活性的影响。以不同浓度BABA溶液处理桃果实，常温下接种根霉菌（R.stolonifer），筛选得到最佳控制病害的浓度，再以最佳浓度处理桃果实，接种根霉菌（R.stolonifer）并于室温下贮藏。每天取样，用于测定抗病相关酶（几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶）活性和抗氧化酶相关酶活性，同时，测定BABA对R.stolonifer体外生长的影响，综合评价BABA对桃采后抗病和抗氧化能力的影响。结果表明，50mM为BABA控制桃采后病害的最佳处理浓度，该浓度BABA对R.stolonifer无直接抑制作用，而主要通过提高桃果实采后抗病和抗氧化能力来控制采后病害的发生。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
关键字:BABA；桃；抗氧化；抗病
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
1 材料与方法 3
1.1 材料和仪器 3
1.2 处理方法 3
1.2.1 BABA溶液配制 3
1.2.2 最佳BABA浓度确定 3
1.3 测定方法 4
1.3.1 发病率与病斑直径 4
1.3.2 几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性的测定 4
1.3.3 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 4
1.3.4 抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定 4
1.3.5 超氧化物岐化酶（SOD）活性的测定 4
1.3.6 过氧化氢（H2O2）含量的测定 4
1.3.7 体外实验 4
2 结果与分析 4
2.1 BABA最佳处理浓度的确定 4
2.2 BABA处理对桃果实β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性的影响 5
2.3 BABA对过氧化氢酶（CAT）及抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的影响 6
2.4 BABA对超氧化物岐化酶（SOD）活性的影响 7
2.5 BABA对过氧化氢（H2O2）含量的影响 8
2.6 BABA在体外对根霉菌的抑制作用 8
3 讨论 9
致谢 10
参考文献 11
BABA对桃果实腐烂和抗病及抗氧化相关酶活性的影响
引言
桃是深受人们喜爱的世界性大宗果品，在全球南、北纬45°之间的广大范围内，都有其商业性栽培。我国是桃的原产地和生产大国,其种植面积和产量居世界第一。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
由于鲜桃的产季较集中，又很不耐贮藏，再由于销售不畅，导致果品腐烂相当严重，达20%左右。因此解决桃类水果的贮藏问题是水果产业亟待解决的问题。国内外对桃采后贮藏生理以及抗病性进行了大量的研究，以期为桃贮藏技术的改进提供理论依据。目前，国内外对桃贮藏期间各种生理生化机制方面的研究主要有：桃采后呼吸生理研究；桃采后乙烯生理研究；桃果肉褐变的研究；桃气调贮存的生理研究；桃衰老的研究；果实絮败的研究等等。通过上述的研究，经国内外学者的努力，发明了多种值得借鉴的抗病和保鲜技术。目前，桃的贮藏保鲜方法主要包括化学保鲜、物理保鲜、生物保鲜3个方面[1-5]。
目前中国的低温贮藏、化学贮藏、减压贮藏和气调贮藏等技术都取得了重大突破，有些水果已基本达到了周年供应。然而，随着生活水平的提高，人们对食品卫生的要求越来越高，希望能吃到天然、安全、营养的食品，因此采用无毒、无害的物理和生物保鲜技术以防止果蔬的腐烂变质显得尤为重要。同时，鉴于国内外食品安全的严峻形势以及国际市场对农产品监测指标的逐步完善，应用新型、安全、无污染的、可降解的保鲜技术，将是今后研究的一个重要方向，比如以诱导果蔬抗病性提高果蔬贮藏性的BABA技术。已有的研究表明，BABA可诱导茄科、葫芦科、菊科、豆科、十字花科、禾本科、蔷薇科等一年或多年生的单子叶或双子叶植物抵抗由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫引起的病害[6]，而且可与多种杀菌剂、植物激活剂和促进植物生长的根瘤菌混用，并具有互作增效的作用，因此开发利用BABA产品具有十分广阔的前景。
BABA对于果蔬保鲜主要在于其诱导果蔬抗病性物质的产生，诱导抗性的作用机理主要是植物提高了其自身的抗病性。诱抗剂可能影响了植物和病原菌之间的关系，以某种方式改变了植物的新陈代谢，使寄主不适宜生存。诱导剂也可能对病原菌起毒害作用，干扰病原菌在致病过程孢子的形成，损坏寄主和寄生物之间的识别，防止病原菌进一步的侵入[7]。从遗传学的角度来看，所有植物都含有抗真菌、细菌和病毒等各种病原菌的潜在基因，但有些没有表达。是否产生抗性是基因的表达速度、数量和环境影响的综合结果。已有的研究表明，诱导各种植物抗病不是因为BABA本身对病原物具有某种毒性，而是诱导植物产生很多种生理、生化的防卫反应体系。
植物对病原菌的侵害具有局部和系统的潜在抵抗能力[8]。近年来的研究发现，BABA具有的广谱的诱抗活性能诱导多种作物如豌豆[9]、拟南芥[10]、番茄[11]、黄瓜[12]、葡萄[13]、烟草[14]、马铃薯[15]、辣椒[16]等多种植物产生对多种病害的抗性，目前BABA对桃果实抗病和抗氧化作用的影响显有报道。本文以采摘后鲜桃为材料，以不同浓度BABA作用于桃果实，监测其对桃果实对β-1,3-葡萄糖酶、几丁质酶以及活性氧代谢的影响，以期得到BABA处理对桃果实采后抗病和抗氧化作用的影响，为BABA在桃果实采后病害控制及保鲜方法的应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料和仪器
材料：R.stolonifer来源于农产加工贮藏实验室，取R.stolonifer孢子，用无菌水稀释配制菌悬液，备用。
供试桃品种为septemberfree，挑选无腐烂，无机械损伤，大小一致的果实，成熟度为八成熟。
仪器：GL-20G-H型冷冻离心机 上海安亭科学仪器厂
UV-160 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
0紫外分光光度仪 上海美普达有限公司
MIR-253型恒温箱 三洋电机国际贸易有限公司
试剂：β- 氨基丁酸（BABA） 美国Sigma公司
1.2 处理方法
1.2.1 BABA溶液配制
称取一定质量的BABA溶于蒸馏水，使终浓度为5 mM、50 mM、100 mM。
1.2.2 BABA溶液最佳浓度的确定
桃果实采于江苏省农科院，采摘后于2小时内运回实验室，摊开风凉，挑选大小均匀，无病虫害果实，将其分为四组，70%乙醇擦拭果皮表面，打孔器刺穿果皮，注射20μl不同浓度（5mM、50mM、100mM）的BABA溶液，6h后接种20μl 1×105个/ml R.stolonifer孢子悬浮液，以未经BABA处理组作为对照组（CK组）。常温下贮藏三天，每天测定桃软腐病发病率及病斑直径，确定BABA处理桃果实抗病的最佳浓度。
1.3 测定方法
1.3.1 发病率与病斑直径
桃接种处出现大于初始病斑(1.5 mm)的霉菌性病斑即记为发病[17]。
发病率(%)=(发病果数/总果数)×100%；
病斑直径：用直尺直接量出病斑直径。
1.3.2几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性的测定
参照Abeles等的方法测定[18]。称取1g果肉，加入10mL 0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH 5.0)匀浆，10000×g离心20min，取上清液用于测定几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性 。以每分钟增加0.001个光密度所需要的酶量为1个几丁质酶活力单位；以每小时生成1mg葡萄糖为1个β-1,3葡聚糖酶活力单位，结果均以U mg-1protein表示。
摘要：以“septemberfree”桃果实为材料，研究了BABA处理对桃果实在常温（20℃）贮藏时果实腐烂和抗病及抗氧化相关酶活性的影响。以不同浓度BABA溶液处理桃果实，常温下接种根霉菌（R.stolonifer），筛选得到最佳控制病害的浓度，再以最佳浓度处理桃果实，接种根霉菌（R.stolonifer）并于室温下贮藏。每天取样，用于测定抗病相关酶（几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶）活性和抗氧化酶相关酶活性，同时，测定BABA对R.stolonifer体外生长的影响，综合评价BABA对桃采后抗病和抗氧化能力的影响。结果表明，50mM为BABA控制桃采后病害的最佳处理浓度，该浓度BABA对R.stolonifer无直接抑制作用，而主要通过提高桃果实采后抗病和抗氧化能力来控制采后病害的发生。
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关键字:BABA；桃；抗氧化；抗病
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
1 材料与方法 3
1.1 材料和仪器 3
1.2 处理方法 3
1.2.1 BABA溶液配制 3
1.2.2 最佳BABA浓度确定 3
1.3 测定方法 4
1.3.1 发病率与病斑直径 4
1.3.2 几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性的测定 4
1.3.3 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 4
1.3.4 抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定 4
1.3.5 超氧化物岐化酶（SOD）活性的测定 4
1.3.6 过氧化氢（H2O2）含量的测定 4
1.3.7 体外实验 4
2 结果与分析 4
2.1 BABA最佳处理浓度的确定 4
2.2 BABA处理对桃果实β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性的影响 5
2.3 BABA对过氧化氢酶（CAT）及抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的影响 6
2.4 BABA对超氧化物岐化酶（SOD）活性的影响 7
2.5 BABA对过氧化氢（H2O2）含量的影响 8
2.6 BABA在体外对根霉菌的抑制作用 8
3 讨论 9
致谢 10
参考文献 11
BABA对桃果实腐烂和抗病及抗氧化相关酶活性的影响
引言
桃是深受人们喜爱的世界性大宗果品，在全球南、北纬45°之间的广大范围内，都有其商业性栽培。我国是桃的原产地和生产大国,其种植面积和产量居世界第一。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
由于鲜桃的产季较集中，又很不耐贮藏，再由于销售不畅，导致果品腐烂相当严重，达20%左右。因此解决桃类水果的贮藏问题是水果产业亟待解决的问题。国内外对桃采后贮藏生理以及抗病性进行了大量的研究，以期为桃贮藏技术的改进提供理论依据。目前，国内外对桃贮藏期间各种生理生化机制方面的研究主要有：桃采后呼吸生理研究；桃采后乙烯生理研究；桃果肉褐变的研究；桃气调贮存的生理研究；桃衰老的研究；果实絮败的研究等等。通过上述的研究，经国内外学者的努力，发明了多种值得借鉴的抗病和保鲜技术。目前，桃的贮藏保鲜方法主要包括化学保鲜、物理保鲜、生物保鲜3个方面[1-5]。
目前中国的低温贮藏、化学贮藏、减压贮藏和气调贮藏等技术都取得了重大突破，有些水果已基本达到了周年供应。然而，随着生活水平的提高，人们对食品卫生的要求越来越高，希望能吃到天然、安全、营养的食品，因此采用无毒、无害的物理和生物保鲜技术以防止果蔬的腐烂变质显得尤为重要。同时，鉴于国内外食品安全的严峻形势以及国际市场对农产品监测指标的逐步完善，应用新型、安全、无污染的、可降解的保鲜技术，将是今后研究的一个重要方向，比如以诱导果蔬抗病性提高果蔬贮藏性的BABA技术。已有的研究表明，BABA可诱导茄科、葫芦科、菊科、豆科、十字花科、禾本科、蔷薇科等一年或多年生的单子叶或双子叶植物抵抗由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫引起的病害[6]，而且可与多种杀菌剂、植物激活剂和促进植物生长的根瘤菌混用，并具有互作增效的作用，因此开发利用BABA产品具有十分广阔的前景。
BABA对于果蔬保鲜主要在于其诱导果蔬抗病性物质的产生，诱导抗性的作用机理主要是植物提高了其自身的抗病性。诱抗剂可能影响了植物和病原菌之间的关系，以某种方式改变了植物的新陈代谢，使寄主不适宜生存。诱导剂也可能对病原菌起毒害作用，干扰病原菌在致病过程孢子的形成，损坏寄主和寄生物之间的识别，防止病原菌进一步的侵入[7]。从遗传学的角度来看，所有植物都含有抗真菌、细菌和病毒等各种病原菌的潜在基因，但有些没有表达。是否产生抗性是基因的表达速度、数量和环境影响的综合结果。已有的研究表明，诱导各种植物抗病不是因为BABA本身对病原物具有某种毒性，而是诱导植物产生很多种生理、生化的防卫反应体系。
植物对病原菌的侵害具有局部和系统的潜在抵抗能力[8]。近年来的研究发现，BABA具有的广谱的诱抗活性能诱导多种作物如豌豆[9]、拟南芥[10]、番茄[11]、黄瓜[12]、葡萄[13]、烟草[14]、马铃薯[15]、辣椒[16]等多种植物产生对多种病害的抗性，目前BABA对桃果实抗病和抗氧化作用的影响显有报道。本文以采摘后鲜桃为材料，以不同浓度BABA作用于桃果实，监测其对桃果实对β-1,3-葡萄糖酶、几丁质酶以及活性氧代谢的影响，以期得到BABA处理对桃果实采后抗病和抗氧化作用的影响，为BABA在桃果实采后病害控制及保鲜方法的应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料和仪器
材料：R.stolonifer来源于农产加工贮藏实验室，取R.stolonifer孢子，用无菌水稀释配制菌悬液，备用。
供试桃品种为septemberfree，挑选无腐烂，无机械损伤，大小一致的果实，成熟度为八成熟。
仪器：GL-20G-H型冷冻离心机 上海安亭科学仪器厂
UV-160 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
0紫外分光光度仪 上海美普达有限公司
MIR-253型恒温箱 三洋电机国际贸易有限公司
试剂：β- 氨基丁酸（BABA） 美国Sigma公司
1.2 处理方法
1.2.1 BABA溶液配制
称取一定质量的BABA溶于蒸馏水，使终浓度为5 mM、50 mM、100 mM。
1.2.2 BABA溶液最佳浓度的确定
桃果实采于江苏省农科院，采摘后于2小时内运回实验室，摊开风凉，挑选大小均匀，无病虫害果实，将其分为四组，70%乙醇擦拭果皮表面，打孔器刺穿果皮，注射20μl不同浓度（5mM、50mM、100mM）的BABA溶液，6h后接种20μl 1×105个/ml R.stolonifer孢子悬浮液，以未经BABA处理组作为对照组（CK组）。常温下贮藏三天，每天测定桃软腐病发病率及病斑直径，确定BABA处理桃果实抗病的最佳浓度。
1.3 测定方法
1.3.1 发病率与病斑直径
桃接种处出现大于初始病斑(1.5 mm)的霉菌性病斑即记为发病[17]。
发病率(%)=(发病果数/总果数)×100%；
病斑直径：用直尺直接量出病斑直径。
1.3.2几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性的测定
参照Abeles等的方法测定[18]。称取1g果肉，加入10mL 0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH 5.0)匀浆，10000×g离心20min，取上清液用于测定几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性 。以每分钟增加0.001个光密度所需要的酶量为1个几丁质酶活力单位；以每小时生成1mg葡萄糖为1个β-1,3葡聚糖酶活力单位，结果均以U mg-1protein表示。
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