重组漆酶的快速纯化及其对玉米粉粉质的影响
摘要：实验室前期克隆了来自Bacillus vallismortis漆酶基因fmb-L820，并在大肠杆菌细胞内实现了高效异源表达。本实验的目的是建立一种简便、快捷的重组酶分离纯化方法，替代镍柱亲和柱层析（Ni-NTA）的方法，并初步探索重组漆酶对玉米粉催化作用效果。本论文首先利用重组fmb-L820热稳定的特点，建立了分离纯化方法(H/AS)：70℃加热10min，50-60%饱和度的硫酸铵分级沉淀，透析得到纯酶。H/AS法纯化倍数可以达到10.23，回收率为23.4%，而Ni-NTA法纯化倍数为3.37，回收率为10.7%。H/AS法纯化的重组漆酶分子量为72kDa；最适反应温度为84℃；在70℃下稳定性最好，10h时酶活力还保留有79.28%；在酸、碱性环境下，最适pH分别为4.8和7.5；以ABTS为底物，Km=3.627×10-5mol/L，Vmax=518.13μmol/(L*min)；还研究了金属离子和抑制剂对酶活性的影响；并与Ni-NTA法纯化的酶的酶学性质进行了比较。最后，将纯化的重组漆酶应用于玉米粉，酶促样品与未经酶催化处理的样品比较外观产生颜色差异，产物经全波长扫描检测，初步发现可能有新的物质产生。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words 4
引言4
1 材料与方法5
1.1 材料5
1.1.1 菌种5
1.1.2 主要试剂5
1.1.3 培养基5
1.1.4 透析袋6
1.1.5 玉米粒6
1.1.6 实验仪器6
1.2 方法6
1.2.1 fmbL820 粗漆酶液制备 6
1.2.2 fmbL820漆酶纯化7
1.2.3 fmbL820 纯化漆酶的性质测定 8
1.2.4 fmbL820漆酶应用于玉米粉8
2 结果与分析9
2.1 fmbL820漆酶纯化9
2.1.1 不同饱和度硫酸铵纯化fmbL820漆酶的效果 9
2.1.2 不同纯化方法效果比较9
2.1.3 纯化方法优化 10
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/> 2.2 fmbL820 漆酶性质11
2.2.1 fmbL820 漆酶分子量11
2.2.2 fmbL820漆酶最适反应温度 11
2.2.3 fmbL820 漆酶温度稳定性11
2.2.4 fmbL820漆酶最适反应pH 12
2.2.5 fmbL820 漆酶动力学研究13
2.2.6 金属离子对fmbL820漆酶的影响14
2.2.7 酶抑制剂对fmbL820漆酶的影响 15
2.3 fmbL820漆酶应用于玉米粉 15
2.3.1 外观颜色 15
2.3.2 全波长扫描 16
3 讨论 16
致谢 17
参考文献 17
重组漆酶的快速纯化及其对玉米粉粉质的影响
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words 4
引言4
1 材料与方法5
1.1 材料5
1.1.1 菌种5
1.1.2 主要试剂5
1.1.3 培养基5
1.1.4 透析袋6
1.1.5 玉米粒6
1.1.6 实验仪器6
1.2 方法6
1.2.1 fmbL820 粗漆酶液制备 6
1.2.2 fmbL820漆酶纯化7
1.2.3 fmbL820 纯化漆酶的性质测定 8
1.2.4 fmbL820漆酶应用于玉米粉8
2 结果与分析9
2.1 fmbL820漆酶纯化9
2.1.1 不同饱和度硫酸铵纯化fmbL820漆酶的效果 9
2.1.2 不同纯化方法效果比较9
2.1.3 纯化方法优化 10
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2.2.1 fmbL820 漆酶分子量11
2.2.2 fmbL820漆酶最适反应温度 11
2.2.3 fmbL820 漆酶温度稳定性11
2.2.4 fmbL820漆酶最适反应pH 12
2.2.5 fmbL820 漆酶动力学研究13
2.2.6 金属离子对fmbL820漆酶的影响14
2.2.7 酶抑制剂对fmbL820漆酶的影响 15
2.3 fmbL820漆酶应用于玉米粉 15
2.3.1 外观颜色 15
2.3.2 全波长扫描 16
3 讨论 16
致谢 17
参考文献 17
重组漆酶的快速纯化及其对玉米粉粉质的影响
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