不同树脂吸附对雪菊色素的影响
目的研究纯化昆仑雪菊色素的最适树脂，为昆仑雪菊色素提取工艺的探究提供科学依据。方法采用静态吸附-解吸实验，以吸附率和解吸率为考察指标，在七种不同的大孔树脂中筛选出对昆仑雪菊色素吸附效果最佳的一种。结果XDA-7树脂对雪菊色素的吸附率与解吸率最佳。
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Keywords 1
引言1
1□材料与方法2
1.1□材料2
1.2□方法2
1.2.1□雪菊色素提取工艺流程2
1.2.2□雪菊色素扫描波段选择2
1.2.3□树脂的预处理2
1.2.4□树脂吸附3
1.2.5□树脂解吸3
1.2.6□HPLC分析3
2□结果与分析3
2.1□雪菊色素的吸收光谱3
2.2□七种树脂对雪菊色素的吸附率比较3
2.3□七种树脂对雪菊色素的解吸率比较4
2.4□七种树脂对雪菊色素的纯化效率比较4
2.5 七种树脂对雪菊色素吸附及解吸后HPLC色谱比较5
2.5.1七种树脂吸附雪菊色素后HPLC图谱比较 5
2.5.2七种树脂解吸雪菊色素后HPLC图谱比较 7
3□讨论8
致谢 9
参考文献 9
不同种树脂吸附对雪菊色素的影响
引言
昆仑雪菊（Coreopsis tinctoria Nutt）为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊的干燥头状花序。原产美国中西部地区，目前我国新疆部分地区作为茶用和保健菊进行大面积栽培。昆仑雪菊又名“血菊”，《本草汇言》 称其可“破血疏肝，解疔散毒”。其主要成分黄酮类化合物与咖啡酸衍生物作为自由基吸收剂都具有抗氧化作用[12]。昆仑雪菊被当地居民当花茶饮用，新疆维吾尔医院也作为一种维药，具有清热解毒、活血化瘀、和胃健脾之功，用其头状花序作为茶饮，可用于治疗燥热烦渴、高血压、胃肠不适等症[36]。大孔吸附树脂为一种选择性有机高聚吸附剂，具有吸附快、易洗脱、吸附容量大、可再生、使用寿命长等优点[7]。近年来，国内外对雪菊的研究很广泛， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
主要有化学成分和药理作用两方面。昆仑雪菊主要含有黄酮、多糖、皂苷、氨基酸、挥发油等成分，还有蛋白质、生物碱、有机酸、酚类等成分[812]。药理作用主要有降血脂、降血压、抗衰老、抗癌、抗炎、抗病毒等[1316]，对雪菊色素的研究较少，本文旨在为雪菊色素的优化工艺提供依据。比较HPD100、AB8、D101、S8、DM301、XDA8、XDA7七种树脂对雪菊色素的吸附情况，通过对吸附后，以及解吸后的色素提取液进行全波段扫描，以吸附率、解析率为指标，筛选出吸附效果最佳的一种树脂。
1 材料与方法
1.1材料
昆仑雪菊于2012 年10月采自新疆昌吉，原植物经大学郭巧生教授鉴定为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊（Coreopsis tinctoria）；树脂：HPD100、AB8、D101、S8、DM301、XDA8、XDA7（安徽三星树脂科技有限公司）；乙醇（分析纯），盐酸和氢氧化钠（均为南京化学试剂有限公司）；乙腈色谱纯（南京寿德试验器材有限公司）；Acquity 型超高效液相色谱 (美国 Waters 公司)；KH5200B型超声波清洗器（昆山禾创声仪器有限公司）；SH2D（III）循环水式真空泵（巩义市丁华仪器有限责任公司）；旋转蒸发器RE20009(上海亚荣生化仪器厂) ；LGJ12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司)；紫外分光光度计 Alpha1506(上海谱元仪器有限公司)；电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；电子天平 ARA520(奥豪斯仪器有限公司)。
1.2方法
1.2.1雪菊色素提取工艺流程
干燥昆仑雪菊→粉碎→75％乙醇超声波萃取两次→提取液→抽滤→旋转蒸发→浓缩液→冷冻干燥→红褐色粉末（雪菊色素）
1.2.2 雪菊色素扫描波段选择
将获得的雪菊色素粉末配制成1 mgmL1的色素母液，用紫外 可见分光光度计在200～800 nm 波长范围内扫描得吸收光谱图。筛选出雪菊色素最大吸收波长。
1.2.3 树脂的预处理
用蒸馏水充分淋洗浸泡待用的树脂，将破碎的和粒度极小的树脂除去，用75％乙醇溶液浸泡12 h后用蒸馏水洗去树脂中残留的乙醇，并活化树脂。在分别用40 mg?L1 NaOH 溶液和4％盐酸溶液浸泡46 h，除去树脂中的杂质，用蒸馏水反复冲洗至中性。
1.2.4树脂吸附
分别称取 2.00 g 已活化的湿树脂HPD100、AB8、D101、S8、DM301、XDA8、XDA7置于 50 mL锥形瓶中，加入10 mL雪菊色素母液，室温静态吸附24 h，在紫外分光光度计上于380 nm 波长处测量上清液的吸光度，比较各种树脂对雪菊色素吸附率的大小。
静态吸附率/% = ［ (A 0 － A 1 ) /A 0 ］×100
式中：A 0 吸附前的吸光度；A 1：吸附后吸光度 。
1.2.5 树脂解吸
将吸附后的滤液除去，并加入75％乙醇10 mL，室温静态解吸24h，在紫外分光光度计上于380 nm 波长处测量上清液的吸光度，比较各种树脂对雪菊色素解吸率的大小。
解吸率/%=［ (A 2 － A 1 ) /A 1］×100
式中：A 1 吸附后的吸光度；A 2：解吸后吸光度 。
1.2.6 HPLC分析
对静态吸附及解吸后的上清液进行HPLC分析，色谱条件为Agilent TC C18 色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈为流动相 A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度条件，0～11 min，10%～18% A；11 ～30 min， 18%～20％ A；30～40 min， 20%A；40～45min，20% ～ 10% A，进行梯度洗脱；流速 1 mLmin1；检测波长380 nm；柱温30℃；进样量5 μL。
2 结果与分析
2.1雪菊色素的吸收光谱
准确称取适量雪菊色素，用蒸馏水配制成1 mgmL1的色素母液，并放置24 h 后，用紫外 可见分光光度计在200～800 nm 波长范围内扫描得吸收光谱图。得知：雪菊色素在380 nm处有最大吸收，所以七种树脂对雪菊色素的吸附、解吸实验结果均在380nm波长测定。
2.2 七种树脂对雪菊色素的吸附率比较
表1七种大孔树脂理化性质
序号
树脂类型
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Keywords 1
引言1
1□材料与方法2
1.1□材料2
1.2□方法2
1.2.1□雪菊色素提取工艺流程2
1.2.2□雪菊色素扫描波段选择2
1.2.3□树脂的预处理2
1.2.4□树脂吸附3
1.2.5□树脂解吸3
1.2.6□HPLC分析3
2□结果与分析3
2.1□雪菊色素的吸收光谱3
2.2□七种树脂对雪菊色素的吸附率比较3
2.3□七种树脂对雪菊色素的解吸率比较4
2.4□七种树脂对雪菊色素的纯化效率比较4
2.5 七种树脂对雪菊色素吸附及解吸后HPLC色谱比较5
2.5.1七种树脂吸附雪菊色素后HPLC图谱比较 5
2.5.2七种树脂解吸雪菊色素后HPLC图谱比较 7
3□讨论8
致谢 9
参考文献 9
不同种树脂吸附对雪菊色素的影响
引言
昆仑雪菊（Coreopsis tinctoria Nutt）为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊的干燥头状花序。原产美国中西部地区，目前我国新疆部分地区作为茶用和保健菊进行大面积栽培。昆仑雪菊又名“血菊”，《本草汇言》 称其可“破血疏肝，解疔散毒”。其主要成分黄酮类化合物与咖啡酸衍生物作为自由基吸收剂都具有抗氧化作用[12]。昆仑雪菊被当地居民当花茶饮用，新疆维吾尔医院也作为一种维药，具有清热解毒、活血化瘀、和胃健脾之功，用其头状花序作为茶饮，可用于治疗燥热烦渴、高血压、胃肠不适等症[36]。大孔吸附树脂为一种选择性有机高聚吸附剂，具有吸附快、易洗脱、吸附容量大、可再生、使用寿命长等优点[7]。近年来，国内外对雪菊的研究很广泛， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
主要有化学成分和药理作用两方面。昆仑雪菊主要含有黄酮、多糖、皂苷、氨基酸、挥发油等成分，还有蛋白质、生物碱、有机酸、酚类等成分[812]。药理作用主要有降血脂、降血压、抗衰老、抗癌、抗炎、抗病毒等[1316]，对雪菊色素的研究较少，本文旨在为雪菊色素的优化工艺提供依据。比较HPD100、AB8、D101、S8、DM301、XDA8、XDA7七种树脂对雪菊色素的吸附情况，通过对吸附后，以及解吸后的色素提取液进行全波段扫描，以吸附率、解析率为指标，筛选出吸附效果最佳的一种树脂。
1 材料与方法
1.1材料
昆仑雪菊于2012 年10月采自新疆昌吉，原植物经大学郭巧生教授鉴定为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊（Coreopsis tinctoria）；树脂：HPD100、AB8、D101、S8、DM301、XDA8、XDA7（安徽三星树脂科技有限公司）；乙醇（分析纯），盐酸和氢氧化钠（均为南京化学试剂有限公司）；乙腈色谱纯（南京寿德试验器材有限公司）；Acquity 型超高效液相色谱 (美国 Waters 公司)；KH5200B型超声波清洗器（昆山禾创声仪器有限公司）；SH2D（III）循环水式真空泵（巩义市丁华仪器有限责任公司）；旋转蒸发器RE20009(上海亚荣生化仪器厂) ；LGJ12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司)；紫外分光光度计 Alpha1506(上海谱元仪器有限公司)；电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；电子天平 ARA520(奥豪斯仪器有限公司)。
1.2方法
1.2.1雪菊色素提取工艺流程
干燥昆仑雪菊→粉碎→75％乙醇超声波萃取两次→提取液→抽滤→旋转蒸发→浓缩液→冷冻干燥→红褐色粉末（雪菊色素）
1.2.2 雪菊色素扫描波段选择
将获得的雪菊色素粉末配制成1 mgmL1的色素母液，用紫外 可见分光光度计在200～800 nm 波长范围内扫描得吸收光谱图。筛选出雪菊色素最大吸收波长。
1.2.3 树脂的预处理
用蒸馏水充分淋洗浸泡待用的树脂，将破碎的和粒度极小的树脂除去，用75％乙醇溶液浸泡12 h后用蒸馏水洗去树脂中残留的乙醇，并活化树脂。在分别用40 mg?L1 NaOH 溶液和4％盐酸溶液浸泡46 h，除去树脂中的杂质，用蒸馏水反复冲洗至中性。
1.2.4树脂吸附
分别称取 2.00 g 已活化的湿树脂HPD100、AB8、D101、S8、DM301、XDA8、XDA7置于 50 mL锥形瓶中，加入10 mL雪菊色素母液，室温静态吸附24 h，在紫外分光光度计上于380 nm 波长处测量上清液的吸光度，比较各种树脂对雪菊色素吸附率的大小。
静态吸附率/% = ［ (A 0 － A 1 ) /A 0 ］×100
式中：A 0 吸附前的吸光度；A 1：吸附后吸光度 。
1.2.5 树脂解吸
将吸附后的滤液除去，并加入75％乙醇10 mL，室温静态解吸24h，在紫外分光光度计上于380 nm 波长处测量上清液的吸光度，比较各种树脂对雪菊色素解吸率的大小。
解吸率/%=［ (A 2 － A 1 ) /A 1］×100
式中：A 1 吸附后的吸光度；A 2：解吸后吸光度 。
1.2.6 HPLC分析
对静态吸附及解吸后的上清液进行HPLC分析，色谱条件为Agilent TC C18 色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈为流动相 A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度条件，0～11 min，10%～18% A；11 ～30 min， 18%～20％ A；30～40 min， 20%A；40～45min，20% ～ 10% A，进行梯度洗脱；流速 1 mLmin1；检测波长380 nm；柱温30℃；进样量5 μL。
2 结果与分析
2.1雪菊色素的吸收光谱
准确称取适量雪菊色素，用蒸馏水配制成1 mgmL1的色素母液，并放置24 h 后，用紫外 可见分光光度计在200～800 nm 波长范围内扫描得吸收光谱图。得知：雪菊色素在380 nm处有最大吸收，所以七种树脂对雪菊色素的吸附、解吸实验结果均在380nm波长测定。
2.2 七种树脂对雪菊色素的吸附率比较
表1七种大孔树脂理化性质
序号
树脂类型
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