老鸦瓣鳞茎解除休眠过程淀粉粒显微结构观察

目录
摘要2
关键词2
引言2
1 材料与方法2
1.1 材料2
1.2 预处理2
1.3 方法3
2 结果与分析3
2.1 老鸦瓣鳞茎细胞淀粉粒显微观察3
2.1.1 鳞茎细胞淀粉粒形态观察3
2.1.2 鳞茎淀粉粒分布情况4
2.2 贮藏期间老鸦瓣鳞茎细胞淀粉粒数量观察6
2.2.1 低温贮藏期间鳞片细胞淀粉粒数量变化7
2.2.2 常温贮藏期间鳞片细胞淀粉粒数量变化7
2.2.3 小结7
3 讨论7
3.1 老鸦瓣鳞茎休眠的研究7
3.2 PAS染色及石蜡切片技术的探讨7
3.3 低温冷藏的作用8
4 结论8
致谢8
参考文献8
Abstract10
Key words10
老鸦瓣鳞茎解除休眠过程淀粉粒显微结构观察
学 生 杨凯雯
[摘要] 为明确老鸦瓣的休眠机理，实现老鸦瓣休眠调控，为大面积规范化栽培奠定基础。本研究以老鸦瓣鳞茎外层中部鳞片为试材，采用湿沙层积方法处理材料，并利用PAS染色反应结合石蜡切片技术，对贮藏过程中鳞茎细胞内淀粉粒进行观察。结果表明，老鸦瓣鳞茎细胞淀粉粒主要为椭圆形和长卵形，偶有圆球形。脐点为飞鸟状，颗粒大小不一，轮廓清晰，外围由一层半透明膜包裹，充满整个细胞腔；在同一取样时期，靠近维管束中心细胞的淀粉颗粒较小、数量较高，靠近鳞茎边缘的细胞淀粉粒数量明显高于位于内里细胞淀粉粒数量；老鸦瓣鳞片细胞淀粉粒数量在贮藏期间，经历了先减少再增加再减少的过程，总体而言鳞茎细胞淀粉粒在贮藏后都比贮藏前减少。综上可知，低温贮藏促进了老鸦瓣鳞茎淀粉粒的降解。
[关键词] 老鸦瓣；鳞茎；冷藏；淀粉粒；显微观察
老鸦瓣Tulipa edulis (Miq.) Baker为百合科郁金香属多年生草本植物，主要分布于辽宁、山东、江苏、浙江、安徽、江西、湖北、湖南和陕西等地，常见于向阳的山坡草地、稀疏林下、河堤岸边等处，朝鲜、日本也有分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^ 
布[1]。其除去膜质皮和绒毛后的干燥鳞茎入药，中药名为“光慈姑”。其性凉，味甘、辛，有小毒。具有清热解毒、散结消肿、行血化瘀之功效，主治咽喉肿痛、瘰疬结核、瘀滞疼痛、痈疖肿毒、蛇虫咬伤和产后瘀滞等症[2]。近年发现，光慈姑具抗肿瘤作用[3]，并且在乳腺疾病等方面也具有显著疗效。因此对老鸦瓣需求量日益增加，但目前光慈姑主要来自于野生，人工栽培繁殖系数低下，供需矛盾日益突出，且易导致野生资源枯竭[4]，故实现老鸦瓣规范化栽培成为亟待解决的问题。老鸦瓣种子在成熟时处于形态生理综合性休眠，解决老鸦瓣休眠问题也成为人工栽培一大难题，相关研究尚少。
本试验以老鸦瓣鳞茎外层中部鳞片为试材，采用湿沙层积方法处理材料，并利用石蜡切片技术，对贮藏过程中鳞茎细胞内淀粉粒进行了观察。旨在探讨老鸦瓣鳞茎休眠机理，实现老鸦瓣休眠调控，为开展老鸦瓣大面积规范化人工栽培提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
于2014年5月在南京紫金山(32.07°N，118.82°E )采集，经大学郭巧生教授鉴定为老鸦瓣Tulipa edulis (Miq.) Baker鳞茎。野外采收后，选取鳞片无病虫害、鳞茎盘无损伤，平均质量1克的鳞茎。用蒸馏水冲洗，洗去表面泥土，沥干后置于室内通风处自然干燥，筛选饱满的鳞茎装入信封中低温干燥保存备用。
1.2 预处理
本试验采用湿沙层积处理解除休眠鳞茎。将保存备用的老鸦瓣鳞茎洗净后，用50%的多菌灵可湿性粉剂600倍液消毒浸泡30min后，按每10个鳞茎约1kg的比例装入经消毒、含水量为50%的湿沙中保湿，然后装入打好孔的聚乙烯袋中。一半置于(4±0.5)℃的冰柜贮藏，另一半于常温下贮藏。2014年7月15日开始进行层积处理，分别于沙藏0、2、4、6、8、10周的时候取样。
在层积过程中，定期向层积沙中加入适量蒸馏水以保证种子的湿度[5]。
1.3 方法
每次取样时，随机分别选取低温和常温贮藏处理的大小适中、无污染的老鸦瓣鳞茎若干，选择外层鳞片中段，切成3mm×2mm的小块，用FAA固定液固定，并抽气。于4℃冰箱保存，直至6次取样结束。之后按照常规方法利用PAS染色反应制作石蜡切片[6]。
做好的石蜡切片，用光学显微镜观察并用显微成像系统拍照记录。记录淀粉粒的形态以及在鳞茎中分布的情况。另外，针对各时期各鳞片细胞淀粉粒数进行统计，每个时期随机选择30个20倍视野和15个40倍视野，每个视野随机选择三个细胞进行统计，最后计算单个细胞淀粉粒的平均数。
2 结果与分析
2.1 老鸦瓣鳞茎细胞淀粉粒显微观察
2.1.1 鳞茎细胞淀粉粒形态观察 在低温贮藏过程中，老鸦瓣鳞茎淀粉粒均为单粒，体积大小不等，主要为椭圆形和长卵形，偶有圆球形。淀粉粒有明显的飞鸟状脐点，轮廓清晰，外围由一层半透明膜包裹，充满整个细胞腔。随着冷藏时间增长，淀粉粒轮廓也逐渐变得模糊，颗粒也变小（图1、图2）。


图1 老鸦瓣外层鳞片低温贮藏0周淀粉粒形态（×40）
Fig.1 Form of starch grains in cold storage 0 weeks of Tulipa edulis(×40 )


图2 老鸦瓣外层鳞片低温贮藏4周淀粉粒形态（×40）
Fig.2 Form of starch grains in cold storage 4 weeks of Tulipa edulis(×40 )
2.1.2 鳞茎淀粉粒分布情况 在同一时期取样观察发现，越靠近维管束中心细胞的淀粉粒颗粒越小，淀粉粒数量也明显高于周围其它细胞（图3、图4）。

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