黄瓜主要品种分子指纹图谱分析
摘要：分子指纹图谱是园艺作物品种鉴定的重要方式之一，本研究利用 SSR分子标记技术对48个商用黄瓜品种进行指纹图谱分子标记分析。结果表明各黄瓜品种遗传多样性在分子水平上差异不大，利用任何一个单一引物都不能将所有供试品种区分，其中多态性最高的引物也只能鉴定其中的两个品种。聚类分析表明，分子标记技术在一定程度上能够揭示品种之间园艺学性状的相似性与亲缘关系。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1．1植物材料 2
1.2 方法3
1.2.1基因组DNA的提取4
1.2.2分子标记分析4
1.2.3分子标记扩增产物分析5
2结果分析6
2.1 SSR扩增多态性与其指纹图谱分析 6
2．2 聚类分析 7
3 讨论 8
致谢8
参考文献8
黄瓜主要品种分子指纹图谱分析
引言
引言： 黄瓜，（学名Cucumis sativus Linn，英文名Cucumber），葫芦科黄瓜属植物。在全世界范围内种植广泛，中国各地普遍栽培，现广泛种植于温带和热带地区。随着黄瓜的广泛种植、各种新品种不断涌入市场，因此准确、简便、迅速地鉴定品种、检测种子的纯度成为黄瓜生产上的重要内容。[1]
国际植物新品种保护联盟(UPOV)对参加保护的品种都进行了 DUS 测试，方法是以已确定的某种类一系列标准生物学形态性状为基础，进行田间种植检测(Powe et al.,1996)。[ 2] 物理化学方法快速、简便，但多数鉴定方法均要求待鉴定的品种须具有某种特异反应，因此，应用范围受到很大程度的限制。[3]但是，由于亲本的集中使用与转基因技术在黄瓜育种中的应用，黄瓜品种间的遗传差异越来越小。使得依据形态性状进行品种田间检验越来越困难，同时由于形态鉴定的时效性差，容易受到环境与主观因素的影响，品种多乱杂的现象难以得到有
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
效控制。自1980年，Botesin发明限制性长度多态性(RFLP)技术以来[4]，分子生物学技术的快速发展为品种的检测和遗传多样性的检测提供了更直接、更精确的方法。常用的DNA分子标记技术主要有RFLP(限制性片段长度多态性)、PCR（聚合酶链式反应）、RAPD（随机扩增多态性DNA）、SSR(简单序列重复多态性)和ALFP（选择性扩增片段长度多态性）等方法。本试验所用到的是SSR标记，它广泛的存在于人类和动植物基因组中[5],其优点是数量丰富、具有多等位基因、共显性遗传、多态性高，易于利用PCR技术分析的优点。[6] SSR分子标记技术在遗传多样性方面的应用比较重要，我们可以利用SSR分子标记的高多态性的优点，利用相关的软件进行聚类分析等数量遗传分析手段，对不同物种的亲缘关系进行评价,本试验即采用SSR分子标记，分析48个黄瓜品种间的园艺性状的关系。
分子子指纹图谱技术在品种资源方面的应用非常广泛，包括品种的鉴定、纯度的检测、品种亲缘关系与分类的研究及品种专利权的正当维护等[7]。从现有的研究看来，SSR分子标记技术是一种比较好的作物种植资源鉴定方法。DNA指纹图谱技术在作物品种资源中已得到广泛地应用，农作物方面玉米[8]、油菜[9] 、水稻。蔬菜作物上茄子[10] 小白菜[11]番茄[12]等。但大多数研究仍停留在实验室水平，离大规模的育种应用还有相当一段的距离。主要原因有二，一是目前DNA的提取方法与育种应用的大规模群体不相适应，二是 大多数DNA指纹图谱检测技术仍比较烦琐，限制了该技术在育种中的大规模应用。但随着计算机人工智能的不断提高与分子生物学新仪器的出现，DNA指纹图谱检测的效率与准确性大大提高了。勿庸置疑，随着以上两大关键技术的突破，以SSR为分子标记的DNA 图谱技术也会跟着得到完善，研究结果为将为蔬菜品种鉴定、育种人权利保护及育种中的重要材料早期鉴定提供了良好技术支撑。[13]
本研究利用SSR分子标记，对48个黄瓜商用品种进行聚类分析和分子指纹图谱分析，对其进行品种多样性鉴定，将在黄瓜分子标记辅助育种中发挥重要作用。
1 材料与方法
1.1植物材料
试验材料为48个商用黄瓜品种，具体特性如下：
表1.11 供试材料特征特性
Table1.11 The characteristics of cucumber cultivars and wild relative used in the study
DNA编号
原始编号
瓜
DNA编号
原始编号
瓜
3
燕白（F67）
斑，刺，长纺锤，瓜白绿色，长20cm，无果把
34
温州早黄瓜
斑，刺，长纺锤
4
川绿1号（F56）
绿，刺，短/分离
35
川绿1号（F6）
淡黄/分离
5
西星黄瓜1号（F4）
瓜长2025cm，粗45cm，浅绿色
36
顺昌黄瓜
绿，蜂腰
7
青丽特早（y5）
中，淡黄条纹，瓜长2225cm
37
脆本特早黄瓜（y5）
棒，白条纹
8
清江早黄瓜（y5）
白，中
38
精品一串金（y5）
中，白条纹，瘤 嫩瓜为乳白色有细青花斑条纹
9
羌山白领（y5）
瓜条长棒性，表皮嫩白色间绿条纹，无刺，瓜条2535cm
41
浏阳白黄瓜
瓜皮白色或绿白色
10
粗棒猪儿黄（y3）
瓜长2530cm，粗8cm，青白色绿花纹
42
天门白皮黄瓜
绿，棒，瘤，瓜长棒形，皮白色，瓜条长2530cm
11
超级花青王大胡瓜（y5）
瓜皮青绿色，有条纹
44
清香早黄瓜
中，白条纹
14
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1．1植物材料 2
1.2 方法3
1.2.1基因组DNA的提取4
1.2.2分子标记分析4
1.2.3分子标记扩增产物分析5
2结果分析6
2.1 SSR扩增多态性与其指纹图谱分析 6
2．2 聚类分析 7
3 讨论 8
致谢8
参考文献8
黄瓜主要品种分子指纹图谱分析
引言
引言： 黄瓜，（学名Cucumis sativus Linn，英文名Cucumber），葫芦科黄瓜属植物。在全世界范围内种植广泛，中国各地普遍栽培，现广泛种植于温带和热带地区。随着黄瓜的广泛种植、各种新品种不断涌入市场，因此准确、简便、迅速地鉴定品种、检测种子的纯度成为黄瓜生产上的重要内容。[1]
国际植物新品种保护联盟(UPOV)对参加保护的品种都进行了 DUS 测试，方法是以已确定的某种类一系列标准生物学形态性状为基础，进行田间种植检测(Powe et al.,1996)。[ 2] 物理化学方法快速、简便，但多数鉴定方法均要求待鉴定的品种须具有某种特异反应，因此，应用范围受到很大程度的限制。[3]但是，由于亲本的集中使用与转基因技术在黄瓜育种中的应用，黄瓜品种间的遗传差异越来越小。使得依据形态性状进行品种田间检验越来越困难，同时由于形态鉴定的时效性差，容易受到环境与主观因素的影响，品种多乱杂的现象难以得到有
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效控制。自1980年，Botesin发明限制性长度多态性(RFLP)技术以来[4]，分子生物学技术的快速发展为品种的检测和遗传多样性的检测提供了更直接、更精确的方法。常用的DNA分子标记技术主要有RFLP(限制性片段长度多态性)、PCR（聚合酶链式反应）、RAPD（随机扩增多态性DNA）、SSR(简单序列重复多态性)和ALFP（选择性扩增片段长度多态性）等方法。本试验所用到的是SSR标记，它广泛的存在于人类和动植物基因组中[5],其优点是数量丰富、具有多等位基因、共显性遗传、多态性高，易于利用PCR技术分析的优点。[6] SSR分子标记技术在遗传多样性方面的应用比较重要，我们可以利用SSR分子标记的高多态性的优点，利用相关的软件进行聚类分析等数量遗传分析手段，对不同物种的亲缘关系进行评价,本试验即采用SSR分子标记，分析48个黄瓜品种间的园艺性状的关系。
分子子指纹图谱技术在品种资源方面的应用非常广泛，包括品种的鉴定、纯度的检测、品种亲缘关系与分类的研究及品种专利权的正当维护等[7]。从现有的研究看来，SSR分子标记技术是一种比较好的作物种植资源鉴定方法。DNA指纹图谱技术在作物品种资源中已得到广泛地应用，农作物方面玉米[8]、油菜[9] 、水稻。蔬菜作物上茄子[10] 小白菜[11]番茄[12]等。但大多数研究仍停留在实验室水平，离大规模的育种应用还有相当一段的距离。主要原因有二，一是目前DNA的提取方法与育种应用的大规模群体不相适应，二是 大多数DNA指纹图谱检测技术仍比较烦琐，限制了该技术在育种中的大规模应用。但随着计算机人工智能的不断提高与分子生物学新仪器的出现，DNA指纹图谱检测的效率与准确性大大提高了。勿庸置疑，随着以上两大关键技术的突破，以SSR为分子标记的DNA 图谱技术也会跟着得到完善，研究结果为将为蔬菜品种鉴定、育种人权利保护及育种中的重要材料早期鉴定提供了良好技术支撑。[13]
本研究利用SSR分子标记，对48个黄瓜商用品种进行聚类分析和分子指纹图谱分析，对其进行品种多样性鉴定，将在黄瓜分子标记辅助育种中发挥重要作用。
1 材料与方法
1.1植物材料
试验材料为48个商用黄瓜品种，具体特性如下：
表1.11 供试材料特征特性
Table1.11 The characteristics of cucumber cultivars and wild relative used in the study
DNA编号
原始编号
瓜
DNA编号
原始编号
瓜
3
燕白（F67）
斑，刺，长纺锤，瓜白绿色，长20cm，无果把
34
温州早黄瓜
斑，刺，长纺锤
4
川绿1号（F56）
绿，刺，短/分离
35
川绿1号（F6）
淡黄/分离
5
西星黄瓜1号（F4）
瓜长2025cm，粗45cm，浅绿色
36
顺昌黄瓜
绿，蜂腰
7
青丽特早（y5）
中，淡黄条纹，瓜长2225cm
37
脆本特早黄瓜（y5）
棒，白条纹
8
清江早黄瓜（y5）
白，中
38
精品一串金（y5）
中，白条纹，瘤 嫩瓜为乳白色有细青花斑条纹
9
羌山白领（y5）
瓜条长棒性，表皮嫩白色间绿条纹，无刺，瓜条2535cm
41
浏阳白黄瓜
瓜皮白色或绿白色
10
粗棒猪儿黄（y3）
瓜长2530cm，粗8cm，青白色绿花纹
42
天门白皮黄瓜
绿，棒，瘤，瓜长棒形，皮白色，瓜条长2530cm
11
超级花青王大胡瓜（y5）
瓜皮青绿色，有条纹
44
清香早黄瓜
中，白条纹
14
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