安吉白茶返白期叶绿体结构和儿茶素含量的变化
通过透射电子显微镜观察到，安吉白茶白化时期与返白前期的叶绿体结构相对比，其叶绿体结内部结构发生变化，基粒片层结构遭到破坏，内部结构混乱而无规律，叶绿体膜结构完整。在返白后期即复绿期叶绿体结构又重新构建。儿茶素含量主要采用国家标准GB/T 8313-2008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》，用高效液相色谱法（HPLC）对安吉白茶三个时期的儿茶素类含量，即儿茶素（C)，没食子儿茶素（GC），表儿茶素（EC），表没食子儿茶素（EGC），表儿茶素没食子酸酯（ECG），没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）进行测定，比较安吉白茶三个时期儿茶素含量变化，结果显示儿茶素类成分的含量在返白最盛期都表现为三个时期的最低值，复绿期又开始上升。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与试剂2
1.1 材料2
1.2 仪器与设备2
1.3 试剂3
2 方法3
2.1 叶绿体结构的观察3
2.1.1 取材3
2.1.2 固定液的配制方法3
2.1.3 固定3
2.2 儿茶素含量的测定3
2.2.1 试样制备3
2.2.2 干重的测量3
2.2.3 稳定溶液3
2.2.4 液相色谱流动相3
2.2.5 咖啡碱和儿茶素类储备溶液3
2.2.6 标准工作溶液3
2.2.7 供试液的制备4
2.2.8 色谱条件4
2.2.9 测定4
3 结果与分析4
3.1 安吉白茶返白期叶绿体结构的变化4
3.2 安吉白茶返白期儿茶素含量的变化5
3.2.1 标准曲线的制备5
3.2.2 样品的儿茶素含量变化6
4 讨论 7
致谢8
参考文献8 安吉白茶返白期叶绿体结构和儿茶素含量的变化
引言
引 言 安吉白茶是由一种特殊的白叶茶品种中由 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
白色的嫩叶按绿茶的制法加工制作而成的名绿茶。安吉白茶对温度的要求较高，如越冬芽在冬季不度过低温期，翌年春梢的白化现象就不显著，所以低温是诱发白化的重要条件。陆建良等［1］对安吉白茶春季返白过程中生理变化进行了研究，安吉白茶在早春返白过程中，POD活力升高、SOD、CAT 活力降低; MDA、叶绿素、儿茶素、咖啡碱含量下降。在白化阶段，叶绿体主要功能酶之一1，5二磷酸核酮糖羧化酶(RuBPcase) 随着叶绿体的解体而下降。因而诱发蛋白酶活性的升高，导致RuBPcase 酶蛋白的大量水解［23］。成浩等［4］认为，安吉白茶返白变化是其内部基因突变的结果。王超新［5］研究了安吉白茶全绿区和全白区基因的表达差异，表明正常叶片和白化叶片在基因表达上存在差异，这些差异涉及多个基因。李素芳［67］通过安吉白茶基本特性和生理生化变化研究表明，安吉白茶叶片白化是由于叶绿体在温度较低时膜结构发育受障碍，叶绿体退化，叶绿素生物合成途径中的前体物质5－氨基乙酰丙酸(ALA) 、胆色素原(PBG) 、镁原卟啉(MgProto) 、原叶绿素酸酯(Pchlide)等含量降低，叶绿素整个合成途径受阻，从而叶片逐渐变为乳白色。所以研究叶绿体结构可以更深入了解安吉白茶的返白现象这一生理变化机理。
由于叶绿体结构发生改变，茶体内的一些代谢产物的合成路径也会受到相应的影响，例如儿茶素就是其中一种，同时儿茶素也是决定一个茶种品质的重要指标，并且具有抗氧化，消除自由基、降脂减肥、防癌抗癌、防动脉硬化、抗菌、除臭、预防蛀牙的作用，由于茶儿茶素（没食子儿茶素）是一类广谱天然抑菌剂, 对口腔主要致龋菌(变形链球菌、边缘链球菌、血链球菌等) 有抑制作用[8]。所以研究安吉白茶返白期间这一特殊时期的儿茶素含量变化，不仅有助于对安吉白茶的品质做一个更好的评价和深入了解其体内代谢变化，也可以考虑从该茶叶中提取儿茶素，作为天然食品添加剂，医药品开发方面都有很好的应用前景，故具有较高的研究价值与实际意义。
1 材料与试剂
1．1 材料
安吉白茶取于宜兴茶园的茶树标本，于3月末至5月初间根据茶树自然生长条件下叶片颜色的变化，分别取返白前期，白化最盛期和复绿期，这三个不同时期的安吉白茶样品，将部分新鲜叶片进行固定，用作电镜观察叶绿体结构的变化；部分保存于80℃条件下，干燥处理后，用作儿茶素含量的测定。图1是实验样品三个不同时期的照片：
图1 不同时期的实验样品图
a:返白前期；b:白化最盛期；c:复绿期
1．2 仪器与设备
日立H—7650透射电子显微镜，分析天平：感量0.0001g，SPD20A高效液相色谱仪，液相色谱柱，电热恒温干燥箱，HHS4数显恒温水浴锅，Centrifuge 5810R离心机：3500 r/min，研钵，镊子，锡纸，0.45μm水系滤膜，容量瓶，吸水纸，称量纸，烧杯，玻璃棒，滴管，刀片等。
1．3 试剂
磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，2.5%戊二醛固定液，液氮，儿茶素类标准品，咖啡碱，甲醇，色谱乙腈，变色硅胶，10 mg/mL乙二胺四乙酸（EDTA）溶液，10 mg/mL抗坏血酸溶液，乙酸，甲醇水溶液（体积比）：7+3，蒸馏水，乙醇。
2 方法
2．1叶绿体结构的观察
2．1．1取材
将刚采摘的新鲜叶片（三个不同阶段的安吉白茶），避开主脉，同时在同一表现区的，切成宽1.5mm,长2~3mm的长条。然后快速放入预冷的固定液中保存。
2．1．2 固定液的配制方法
1、磷酸盐缓冲液配制：A液：Na2HPO412H2O 71.64 g加蒸镏水至1000 mL；B液：NaH2PO4 2H2O 31.21 g加蒸镏水至1000 mL；将A液36 mL＋B液14 mL配置成0.2 mol/L pH 7.2的磷酸盐缓冲液；2、固定剂戊二醛配制：将步骤1配置好的0.2 mol/L pH 7.2磷酸盐缓冲液50 mL中，加入50%戊二醛5 mL，然后加蒸镏水至100 mL，加入活性炭2g，避光、密闭保存。
2．1．3固定
利用注射器，将叶片内的气体抽去，使之下沉，在4℃条件下过夜。固定完毕后的样品送去电镜室，在透射电镜下观察、拍照。
2．2 儿茶素含量的测定
儿茶素的检测主要采用国家标准GB/T 83132008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》[9]，包括茶汤的浸提方法，磨碎试样的制备及干物质含量测定均参考国家标准。
2．2．1 试样制备
把事先干燥好的茶叶取出待用，先用研钵将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分，作为待测试样。
2．2．2干重的测量
表1：安吉白茶鲜叶干燥前后质量检测
一芽三叶
返白前1
返白前2
白化1
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与试剂2
1.1 材料2
1.2 仪器与设备2
1.3 试剂3
2 方法3
2.1 叶绿体结构的观察3
2.1.1 取材3
2.1.2 固定液的配制方法3
2.1.3 固定3
2.2 儿茶素含量的测定3
2.2.1 试样制备3
2.2.2 干重的测量3
2.2.3 稳定溶液3
2.2.4 液相色谱流动相3
2.2.5 咖啡碱和儿茶素类储备溶液3
2.2.6 标准工作溶液3
2.2.7 供试液的制备4
2.2.8 色谱条件4
2.2.9 测定4
3 结果与分析4
3.1 安吉白茶返白期叶绿体结构的变化4
3.2 安吉白茶返白期儿茶素含量的变化5
3.2.1 标准曲线的制备5
3.2.2 样品的儿茶素含量变化6
4 讨论 7
致谢8
参考文献8 安吉白茶返白期叶绿体结构和儿茶素含量的变化
引言
引 言 安吉白茶是由一种特殊的白叶茶品种中由 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
白色的嫩叶按绿茶的制法加工制作而成的名绿茶。安吉白茶对温度的要求较高，如越冬芽在冬季不度过低温期，翌年春梢的白化现象就不显著，所以低温是诱发白化的重要条件。陆建良等［1］对安吉白茶春季返白过程中生理变化进行了研究，安吉白茶在早春返白过程中，POD活力升高、SOD、CAT 活力降低; MDA、叶绿素、儿茶素、咖啡碱含量下降。在白化阶段，叶绿体主要功能酶之一1，5二磷酸核酮糖羧化酶(RuBPcase) 随着叶绿体的解体而下降。因而诱发蛋白酶活性的升高，导致RuBPcase 酶蛋白的大量水解［23］。成浩等［4］认为，安吉白茶返白变化是其内部基因突变的结果。王超新［5］研究了安吉白茶全绿区和全白区基因的表达差异，表明正常叶片和白化叶片在基因表达上存在差异，这些差异涉及多个基因。李素芳［67］通过安吉白茶基本特性和生理生化变化研究表明，安吉白茶叶片白化是由于叶绿体在温度较低时膜结构发育受障碍，叶绿体退化，叶绿素生物合成途径中的前体物质5－氨基乙酰丙酸(ALA) 、胆色素原(PBG) 、镁原卟啉(MgProto) 、原叶绿素酸酯(Pchlide)等含量降低，叶绿素整个合成途径受阻，从而叶片逐渐变为乳白色。所以研究叶绿体结构可以更深入了解安吉白茶的返白现象这一生理变化机理。
由于叶绿体结构发生改变，茶体内的一些代谢产物的合成路径也会受到相应的影响，例如儿茶素就是其中一种，同时儿茶素也是决定一个茶种品质的重要指标，并且具有抗氧化，消除自由基、降脂减肥、防癌抗癌、防动脉硬化、抗菌、除臭、预防蛀牙的作用，由于茶儿茶素（没食子儿茶素）是一类广谱天然抑菌剂, 对口腔主要致龋菌(变形链球菌、边缘链球菌、血链球菌等) 有抑制作用[8]。所以研究安吉白茶返白期间这一特殊时期的儿茶素含量变化，不仅有助于对安吉白茶的品质做一个更好的评价和深入了解其体内代谢变化，也可以考虑从该茶叶中提取儿茶素，作为天然食品添加剂，医药品开发方面都有很好的应用前景，故具有较高的研究价值与实际意义。
1 材料与试剂
1．1 材料
安吉白茶取于宜兴茶园的茶树标本，于3月末至5月初间根据茶树自然生长条件下叶片颜色的变化，分别取返白前期，白化最盛期和复绿期，这三个不同时期的安吉白茶样品，将部分新鲜叶片进行固定，用作电镜观察叶绿体结构的变化；部分保存于80℃条件下，干燥处理后，用作儿茶素含量的测定。图1是实验样品三个不同时期的照片：
图1 不同时期的实验样品图
a:返白前期；b:白化最盛期；c:复绿期
1．2 仪器与设备
日立H—7650透射电子显微镜，分析天平：感量0.0001g，SPD20A高效液相色谱仪，液相色谱柱，电热恒温干燥箱，HHS4数显恒温水浴锅，Centrifuge 5810R离心机：3500 r/min，研钵，镊子，锡纸，0.45μm水系滤膜，容量瓶，吸水纸，称量纸，烧杯，玻璃棒，滴管，刀片等。
1．3 试剂
磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，2.5%戊二醛固定液，液氮，儿茶素类标准品，咖啡碱，甲醇，色谱乙腈，变色硅胶，10 mg/mL乙二胺四乙酸（EDTA）溶液，10 mg/mL抗坏血酸溶液，乙酸，甲醇水溶液（体积比）：7+3，蒸馏水，乙醇。
2 方法
2．1叶绿体结构的观察
2．1．1取材
将刚采摘的新鲜叶片（三个不同阶段的安吉白茶），避开主脉，同时在同一表现区的，切成宽1.5mm,长2~3mm的长条。然后快速放入预冷的固定液中保存。
2．1．2 固定液的配制方法
1、磷酸盐缓冲液配制：A液：Na2HPO412H2O 71.64 g加蒸镏水至1000 mL；B液：NaH2PO4 2H2O 31.21 g加蒸镏水至1000 mL；将A液36 mL＋B液14 mL配置成0.2 mol/L pH 7.2的磷酸盐缓冲液；2、固定剂戊二醛配制：将步骤1配置好的0.2 mol/L pH 7.2磷酸盐缓冲液50 mL中，加入50%戊二醛5 mL，然后加蒸镏水至100 mL，加入活性炭2g，避光、密闭保存。
2．1．3固定
利用注射器，将叶片内的气体抽去，使之下沉，在4℃条件下过夜。固定完毕后的样品送去电镜室，在透射电镜下观察、拍照。
2．2 儿茶素含量的测定
儿茶素的检测主要采用国家标准GB/T 83132008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》[9]，包括茶汤的浸提方法，磨碎试样的制备及干物质含量测定均参考国家标准。
2．2．1 试样制备
把事先干燥好的茶叶取出待用，先用研钵将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分，作为待测试样。
2．2．2干重的测量
表1：安吉白茶鲜叶干燥前后质量检测
一芽三叶
返白前1
返白前2
白化1
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