丝瓜子叶及子叶节高效再生体系的诱导研究
为建立既高效又稳定的丝瓜离体快速繁殖体系，本试验以丝瓜的子叶和子叶节为外植体，采用直接器官发生途径，比较了幼苗天数、外植体、放置方式和植物生长调节剂细胞分裂素（6-BA）和萘乙酸（NAA）浓度配比4个因素，对普通丝瓜直接不定芽诱导的影响。结果显示，不同浓度6-BA和NAA的配比对子叶及子叶节的不定芽诱导率都有极显著的影响，6-BA具有关键作用，植物生长调节剂NAA对不定芽的诱导有促进作用，尤其是添加低浓度（0.5mg/L）的NAA有助于不定芽的诱导。5-6天苗龄的外植体诱导出芽数最高。子叶节的出芽诱导率明显比子叶的诱导率高。另外，以下胚轴的形态学下端竖直向下插入培养基中比平放在诱导培养基表面的外植体诱导出芽率多。通过不定芽的生长情况和分析，用5-6天苗龄的子叶节为外植体，以下胚轴的形态学下端竖直向下插入MS培养基加入6-BA1.0mg/L和NAA0.5mg/L 的诱导培养基中，为丝瓜的最佳离体快速繁殖体系。关键词 丝瓜，子叶，子叶节，再生体系，诱导
目 录
1 引言1
2材料与方法.1
2.1试验材料与仪器. 2
2.2试验设计. 2
2.3试验步骤...2
2.3.1获取外植体2
2.3.2配置分化培养基3
2.3.3接种培养3
2.3.4观察统计... 4
3 结果分析.5
3.1不同外植体类型对不定芽诱导的影响...................................................................6
3.2不同苗龄的外植体对不定芽诱导的影响...6
3.3不同放置方式的外植体对不定芽诱导的影响....6
3.4分化培养基对不定芽诱导的影响...6
3.5小结...6
4 讨论....7
4.1葫芦科其他植物离体快速繁殖研究的现状....7
4.2预试验中遇到的问题......8
4.3本次试验中遇到的问题......................9
4.4对于下一步工作的建议10
结论 .11
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
致谢12
参考文献 13
引言
丝瓜，葫芦科，一年生藤本植物。雌雄同株，雌花单生。果实是圆柱型，没有成熟时是肉质的，成熟后干燥，里面是呈网状纤维的丝瓜络。种子多是黑色平滑的卵形，也有白色的。花果期是夏季和秋季两个季节。丝瓜是短日照植物，喜阳光，较耐弱光。丝瓜喜温、耐热性强，适合在温度为2030℃的环境中生长发育。丝瓜的适应性较强、是对土壤要求不严格的蔬菜作物，在各类土壤中都能栽培[1]。
丝瓜是有研究前景的葫芦科瓜类作物，具有食用功能、日化原料、药用功能及作为工业原料等用途，社会价值，经济价值和生态价值都很高，具有很高的研究价值。
植物组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术[2]。?
在植物组织培养过程中，所采用的外植体经过诱导能够重新进行器官分化，长出芽、根、花等器官，最后形成完整植株[3，4]。植株的再生途径大致分为两种，一是胚状体途径，是指外植体按胚胎发生方式形成再生植株的过程。二是器官发生途径，是指在组织培养的过程中，再生植株不是通过胚胎，而是通过分生中心直接分化器官，最终形成完整植株的过程。通常器官发生途径可以分为器官间接发生途径与器官直接发生途径两种类型。器官间接发生途径，是外植体先脱分化，脱分化的细胞数量不断增加，形成由薄壁细胞所组成的愈伤组织，愈伤组织再分化形成分生组织，再分化出芽、根等器官。器官直接发生途径是植物器官可直接从外植体上诱导出[5,6]。
随着丝瓜的药用价值和经济价值的不断提升，丝瓜也逐渐受到了研究者的关注，国内外的研究者大多集中研究，丝瓜的栽培技术，发挥杂种优势[7]，丝瓜的药用价值，丝瓜伤流液的生物活性研究[8]，丝瓜络生物材料在环保[9,10]、日化[11]等方面的作用。自1970到1990，尤其是用根瘤农杆菌介导法将外源基因导入甜瓜中告捷以后，国内外也都使用根瘤农杆菌介导法，对葫芦科的西瓜，黄瓜，甜瓜等进行了遗传转化研究[12]，在器官离体培养、花药花粉离体培养体，细胞胚胎发生、原生质体离体培养和体细胞杂交等方面均获得了一定收获，但大多数都在研究如黄瓜西瓜甜瓜等水果上。关于丝瓜的离体快速繁殖体系的研究还不多[13]。
丝瓜的花药离体培养和原生质体培养至今仅有一些初步研究，没有得到完整的快速繁殖体系[14]。应加大对丝瓜组织培养体系的研究，尤其是离体再生体系的建立和优化。
细胞工程和基因工程等现代生物技术应用于植物新品种育种，在种质资源方面有巨大的潜力[15,16]。之前对葫芦科植物的研究几乎都集中在西瓜，黄瓜，甜瓜等水果上。丝瓜具有食用功能、日化原料、药用功能及作为工业原料等用途，将现代生物技术作为丝瓜育种的新方法，加速丝瓜育种的进程， 进一步推动分子生物学技术在丝瓜育种中的应用，以满足药用丝瓜，工业用丝瓜等专用丝瓜品种的开发需求[17]。
对丝瓜进行遗传转化方面的研究，首先一定要建立一套丝瓜的高效离体再生体系[18]。本试验研究了丝瓜幼苗天数、外植体类型、外植体放置方式、植物生长调节剂浓度配比等对普通丝瓜子叶及子叶节诱导不定芽的影响。为下一步的丝瓜遗传转化研究打下一定的基础[19]。
2 材料与方法
2.1 试验材料与仪器
本试验的材料为普通丝瓜，由江苏省农业科学研究院蔬菜所楼丽娜老师提供的普通丝瓜“苏13”品种。本试验在江苏省农业科学研究院蔬菜所进行。
试验仪器包括超净工作台，高压灭菌锅，PH测量仪，350ml的组织培养瓶，快速玻璃珠灭菌器等等。
2.2 试验设计
以丝瓜的子叶和子叶节为外植体，采用直接器官发生途径，比较了幼苗天数、外植体、外植体的放置方式、植物生长调节剂浓度等对普通丝瓜直接不定芽诱导的影响，建立既高效又稳定的丝瓜离体快速繁殖体系。
（1）研究不同苗龄的外植体对子叶和子叶节不定芽的诱导的影响：将苗龄分为12天，34天，56天，为3组。
目 录
1 引言1
2材料与方法.1
2.1试验材料与仪器. 2
2.2试验设计. 2
2.3试验步骤...2
2.3.1获取外植体2
2.3.2配置分化培养基3
2.3.3接种培养3
2.3.4观察统计... 4
3 结果分析.5
3.1不同外植体类型对不定芽诱导的影响...................................................................6
3.2不同苗龄的外植体对不定芽诱导的影响...6
3.3不同放置方式的外植体对不定芽诱导的影响....6
3.4分化培养基对不定芽诱导的影响...6
3.5小结...6
4 讨论....7
4.1葫芦科其他植物离体快速繁殖研究的现状....7
4.2预试验中遇到的问题......8
4.3本次试验中遇到的问题......................9
4.4对于下一步工作的建议10
结论 .11
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致谢12
参考文献 13
引言
丝瓜，葫芦科，一年生藤本植物。雌雄同株，雌花单生。果实是圆柱型，没有成熟时是肉质的，成熟后干燥，里面是呈网状纤维的丝瓜络。种子多是黑色平滑的卵形，也有白色的。花果期是夏季和秋季两个季节。丝瓜是短日照植物，喜阳光，较耐弱光。丝瓜喜温、耐热性强，适合在温度为2030℃的环境中生长发育。丝瓜的适应性较强、是对土壤要求不严格的蔬菜作物，在各类土壤中都能栽培[1]。
丝瓜是有研究前景的葫芦科瓜类作物，具有食用功能、日化原料、药用功能及作为工业原料等用途，社会价值，经济价值和生态价值都很高，具有很高的研究价值。
植物组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术[2]。?
在植物组织培养过程中，所采用的外植体经过诱导能够重新进行器官分化，长出芽、根、花等器官，最后形成完整植株[3，4]。植株的再生途径大致分为两种，一是胚状体途径，是指外植体按胚胎发生方式形成再生植株的过程。二是器官发生途径，是指在组织培养的过程中，再生植株不是通过胚胎，而是通过分生中心直接分化器官，最终形成完整植株的过程。通常器官发生途径可以分为器官间接发生途径与器官直接发生途径两种类型。器官间接发生途径，是外植体先脱分化，脱分化的细胞数量不断增加，形成由薄壁细胞所组成的愈伤组织，愈伤组织再分化形成分生组织，再分化出芽、根等器官。器官直接发生途径是植物器官可直接从外植体上诱导出[5,6]。
随着丝瓜的药用价值和经济价值的不断提升，丝瓜也逐渐受到了研究者的关注，国内外的研究者大多集中研究，丝瓜的栽培技术，发挥杂种优势[7]，丝瓜的药用价值，丝瓜伤流液的生物活性研究[8]，丝瓜络生物材料在环保[9,10]、日化[11]等方面的作用。自1970到1990，尤其是用根瘤农杆菌介导法将外源基因导入甜瓜中告捷以后，国内外也都使用根瘤农杆菌介导法，对葫芦科的西瓜，黄瓜，甜瓜等进行了遗传转化研究[12]，在器官离体培养、花药花粉离体培养体，细胞胚胎发生、原生质体离体培养和体细胞杂交等方面均获得了一定收获，但大多数都在研究如黄瓜西瓜甜瓜等水果上。关于丝瓜的离体快速繁殖体系的研究还不多[13]。
丝瓜的花药离体培养和原生质体培养至今仅有一些初步研究，没有得到完整的快速繁殖体系[14]。应加大对丝瓜组织培养体系的研究，尤其是离体再生体系的建立和优化。
细胞工程和基因工程等现代生物技术应用于植物新品种育种，在种质资源方面有巨大的潜力[15,16]。之前对葫芦科植物的研究几乎都集中在西瓜，黄瓜，甜瓜等水果上。丝瓜具有食用功能、日化原料、药用功能及作为工业原料等用途，将现代生物技术作为丝瓜育种的新方法，加速丝瓜育种的进程， 进一步推动分子生物学技术在丝瓜育种中的应用，以满足药用丝瓜，工业用丝瓜等专用丝瓜品种的开发需求[17]。
对丝瓜进行遗传转化方面的研究，首先一定要建立一套丝瓜的高效离体再生体系[18]。本试验研究了丝瓜幼苗天数、外植体类型、外植体放置方式、植物生长调节剂浓度配比等对普通丝瓜子叶及子叶节诱导不定芽的影响。为下一步的丝瓜遗传转化研究打下一定的基础[19]。
2 材料与方法
2.1 试验材料与仪器
本试验的材料为普通丝瓜，由江苏省农业科学研究院蔬菜所楼丽娜老师提供的普通丝瓜“苏13”品种。本试验在江苏省农业科学研究院蔬菜所进行。
试验仪器包括超净工作台，高压灭菌锅，PH测量仪，350ml的组织培养瓶，快速玻璃珠灭菌器等等。
2.2 试验设计
以丝瓜的子叶和子叶节为外植体，采用直接器官发生途径，比较了幼苗天数、外植体、外植体的放置方式、植物生长调节剂浓度等对普通丝瓜直接不定芽诱导的影响，建立既高效又稳定的丝瓜离体快速繁殖体系。
（1）研究不同苗龄的外植体对子叶和子叶节不定芽的诱导的影响：将苗龄分为12天，34天，56天，为3组。
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