老鸦瓣芽茎形成过程中淀粉代谢相关酶活性
目的探索老鸦瓣芽茎形成的前、中、后3个时期淀粉代谢相关酶（包括淀粉酶、葡萄糖焦磷酸化酶、可溶性淀粉合成酶、淀粉合成酶）活性以及可溶性蛋白含量的变化。方法通过试剂盒分别测得芽茎形成前、中、后3个时期淀粉酶（AMY）、 葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）、可溶性淀粉合成酶（SSS）、 结合性淀粉合成酶（GBSS）的活性；通过考马斯亮蓝法测得可溶性蛋白的含量。结果在老鸦瓣芽茎形成的起前、中、后3个时期，SSS、GBSS的酶活性均为先上升后下降的趋势。AGPase活性与可溶性蛋白含量的变化趋势一致，均为持续上升。AMY活性则在整个过程持续下降，中期到后期的下降幅度较前者变化平缓。结论可通过调控淀粉相关酶以及可溶性蛋白等变量因素，来调控老鸦瓣芽茎的形成。
目录
摘要1
关键词1
引言1
1 材料与方法1
1.1 实验材料与试剂1
1.2试剂2
1.3 酶活性以及可溶性蛋白含量的测定方法 2
1.3.1 AMY活性的测定2
1.3.2 AGPase活性的测定2
1.3.3 SSS活性的测定2
1.3.4 GBSS的测定 2
1.3.5 可溶性蛋白含量的测定 2
2 结果与分析3
2.1老鸦瓣生长过程中淀粉酶活性动态变化3
2.2老鸦瓣生长过程中AGPase活性动态变化3
2.3老鸦瓣生长过程中SSS酶活性动态变化3
2.4老鸦瓣生长过程中GBSS酶活性动态变化4
2.5老鸦瓣生长过程中可溶性蛋白含量动态变化4
3.讨论4
3.1芽茎形成前、中、后各时期与淀粉酶活性的变化4
3.2芽茎形成前、中、后各时期与AGPase、SSS、GBSS活性的变化5
3.3芽茎形成前、中、后各时期与可溶性蛋白含量的变化5
4 结论5
致谢5
参考文献 5
Abstract6
引言
图1老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期AMY活性的变化3
图2老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期AGPase活性的变化3 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
图3老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期SSS活性的变化4
图4老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期GBSS活性的变化4
图5老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期可溶性蛋白含量的变化4
老鸦瓣芽茎形成过程中淀粉代谢相关酶活性及
可溶性蛋白含量的变化
学 生 何华清
老鸦瓣 Tulipa edulis ( Miq.) Baker为百合科郁金香属药用植物，分布于辽宁、山东、江苏、浙江、安徽、江西、湖北、湖南和陕西等地，生于山坡草地及路旁，朝鲜、日本也有分布[1]。除去膜质皮及绒毛后的干燥鳞茎为中药材光慈姑，具有解毒散结，行血化瘀之功效 [2]。传统中医认为光慈菇味甘，性寒，有小毒，有消肿、散结、化痰的功效，临床上多用于治疗痢疾、小儿痰厥，痛风等，外治疔疮疖肿，痄腮，丹毒，咽喉肿痛、蛇虫狂犬伤等[3] 。老鸦瓣常用于乳腺癌、食管癌、胃癌等恶性肿瘤，尤其在乳腺疾病等方面治疗效果显著，因此对老鸦瓣的需求量不断增加，而目前老鸦瓣主要来源于野生，其生长缓慢，导致其供需矛盾日益突出。实现老鸦瓣规范化栽培成为亟待解决的问题[4]。
目前国内关于药用植物变态器官发育与其酶活性以及蛋白含量变化的研究较多。苑智华等（2008）[5]在研究唐菖蒲球茎形成期蔗糖和淀粉相关酶活性发现唐菖蒲籽球形态建成初期直到快速膨大前期,各部位转化酶活性均升高。张超等[6]通过研究文心兰原球茎结构形成及发育过程，并将其分成外植体期、外植体膨大期、愈伤组织期、原球茎形成期、原球茎成熟期、叶鞘伸展期、顶端腋芽发育期和幼苗期八个时期研究了抗氧化酶（SOD）的变化。王鹏等[7]以马铃薯脱毒试管薯为试验材料,研究块茎休眠和块茎顶芽萌发生长过程中几种相关酶活性变化。有关老鸦瓣的少量研究主要集中于物种鉴定、药材鉴定和栽培引种等方面[811]，对于老鸦瓣鳞茎中的芽茎这特殊一结构的研究却鲜有报道。因此本实验通过测定老鸦瓣芽茎形成前、中、后3个时期淀粉代写的相关酶以及可溶性蛋白含量, 以期初步阐明老鸦瓣芽茎的形成机理，为进一步调控老鸦瓣芽茎的生长发育提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 试剂
测定AMY活性的试剂盒，来自南京建成公司。测定AGPase、SSS、GBSS酶活性的试剂盒，来自苏州科铭生物技术有限公司。
可溶性蛋白测定所用材料与试剂：牛血清白蛋白，考马斯亮蓝G250，90%乙醇，85g/100mL的磷酸。实验中其他所用试剂均为分析纯。
1.3 酶活性以及可溶性蛋白含量的测定方法
1.3.1 AMY活性的测定 称取样品0.25g，加少许石英砂及2ml蒸馏水冰浴研磨成匀浆后，转入10ml离心管中，再用6ml蒸馏水分两次洗涤研钵，洗液都转入离心管中，在常温下4000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液待测。取0.05ml样液，加入0.05ml水，按照试剂盒进行实验，取3次平均值作为各样品的实测数据,淀粉酶活性计算公式为：
淀粉酶活性（μ/dL）= *40*稀释倍数
1.3.2 AGPase活性的测定 称取样品约0.1g，加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000 r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液待测。按照试剂盒进行实验， 葡萄糖焦磷酸化酶活性计算公式为：
AGPase活性（μmol/gmin）= 5627*△A/样本鲜重/1000
单位意义：每克组织在反应体系中每分钟催化的1μmolNADPH定义为一个活性单位（U）
1.3.3 SSS活性的测定 称取样品约0.1g，加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000 r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液待测。按照试剂盒进行实验，可溶性淀粉合成酶活性计算公式为：
SSS活性（umol/gmin）= 1045*△A/样本鲜重/1000
1.3.4 GBSS活性的测定 称取样品约0.1g，加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000 r/min离心10min，弃上清液，取沉淀用1ml提取液重新悬浮以备GBSS测定，其余步骤同SSS。可溶性淀粉合成酶活性计算公式为：
GBSS活性（μmol/gmin）= 1045*△A/样本鲜重/1000
目录
摘要1
关键词1
引言1
1 材料与方法1
1.1 实验材料与试剂1
1.2试剂2
1.3 酶活性以及可溶性蛋白含量的测定方法 2
1.3.1 AMY活性的测定2
1.3.2 AGPase活性的测定2
1.3.3 SSS活性的测定2
1.3.4 GBSS的测定 2
1.3.5 可溶性蛋白含量的测定 2
2 结果与分析3
2.1老鸦瓣生长过程中淀粉酶活性动态变化3
2.2老鸦瓣生长过程中AGPase活性动态变化3
2.3老鸦瓣生长过程中SSS酶活性动态变化3
2.4老鸦瓣生长过程中GBSS酶活性动态变化4
2.5老鸦瓣生长过程中可溶性蛋白含量动态变化4
3.讨论4
3.1芽茎形成前、中、后各时期与淀粉酶活性的变化4
3.2芽茎形成前、中、后各时期与AGPase、SSS、GBSS活性的变化5
3.3芽茎形成前、中、后各时期与可溶性蛋白含量的变化5
4 结论5
致谢5
参考文献 5
Abstract6
引言
图1老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期AMY活性的变化3
图2老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期AGPase活性的变化3 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
图3老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期SSS活性的变化4
图4老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期GBSS活性的变化4
图5老鸦瓣芽茎形成前、中、后时期可溶性蛋白含量的变化4
老鸦瓣芽茎形成过程中淀粉代谢相关酶活性及
可溶性蛋白含量的变化
学 生 何华清
老鸦瓣 Tulipa edulis ( Miq.) Baker为百合科郁金香属药用植物，分布于辽宁、山东、江苏、浙江、安徽、江西、湖北、湖南和陕西等地，生于山坡草地及路旁，朝鲜、日本也有分布[1]。除去膜质皮及绒毛后的干燥鳞茎为中药材光慈姑，具有解毒散结，行血化瘀之功效 [2]。传统中医认为光慈菇味甘，性寒，有小毒，有消肿、散结、化痰的功效，临床上多用于治疗痢疾、小儿痰厥，痛风等，外治疔疮疖肿，痄腮，丹毒，咽喉肿痛、蛇虫狂犬伤等[3] 。老鸦瓣常用于乳腺癌、食管癌、胃癌等恶性肿瘤，尤其在乳腺疾病等方面治疗效果显著，因此对老鸦瓣的需求量不断增加，而目前老鸦瓣主要来源于野生，其生长缓慢，导致其供需矛盾日益突出。实现老鸦瓣规范化栽培成为亟待解决的问题[4]。
目前国内关于药用植物变态器官发育与其酶活性以及蛋白含量变化的研究较多。苑智华等（2008）[5]在研究唐菖蒲球茎形成期蔗糖和淀粉相关酶活性发现唐菖蒲籽球形态建成初期直到快速膨大前期,各部位转化酶活性均升高。张超等[6]通过研究文心兰原球茎结构形成及发育过程，并将其分成外植体期、外植体膨大期、愈伤组织期、原球茎形成期、原球茎成熟期、叶鞘伸展期、顶端腋芽发育期和幼苗期八个时期研究了抗氧化酶（SOD）的变化。王鹏等[7]以马铃薯脱毒试管薯为试验材料,研究块茎休眠和块茎顶芽萌发生长过程中几种相关酶活性变化。有关老鸦瓣的少量研究主要集中于物种鉴定、药材鉴定和栽培引种等方面[811]，对于老鸦瓣鳞茎中的芽茎这特殊一结构的研究却鲜有报道。因此本实验通过测定老鸦瓣芽茎形成前、中、后3个时期淀粉代写的相关酶以及可溶性蛋白含量, 以期初步阐明老鸦瓣芽茎的形成机理，为进一步调控老鸦瓣芽茎的生长发育提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 试剂
测定AMY活性的试剂盒，来自南京建成公司。测定AGPase、SSS、GBSS酶活性的试剂盒，来自苏州科铭生物技术有限公司。
可溶性蛋白测定所用材料与试剂：牛血清白蛋白，考马斯亮蓝G250，90%乙醇，85g/100mL的磷酸。实验中其他所用试剂均为分析纯。
1.3 酶活性以及可溶性蛋白含量的测定方法
1.3.1 AMY活性的测定 称取样品0.25g，加少许石英砂及2ml蒸馏水冰浴研磨成匀浆后，转入10ml离心管中，再用6ml蒸馏水分两次洗涤研钵，洗液都转入离心管中，在常温下4000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液待测。取0.05ml样液，加入0.05ml水，按照试剂盒进行实验，取3次平均值作为各样品的实测数据,淀粉酶活性计算公式为：
淀粉酶活性（μ/dL）= *40*稀释倍数
1.3.2 AGPase活性的测定 称取样品约0.1g，加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000 r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液待测。按照试剂盒进行实验， 葡萄糖焦磷酸化酶活性计算公式为：
AGPase活性（μmol/gmin）= 5627*△A/样本鲜重/1000
单位意义：每克组织在反应体系中每分钟催化的1μmolNADPH定义为一个活性单位（U）
1.3.3 SSS活性的测定 称取样品约0.1g，加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000 r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液待测。按照试剂盒进行实验，可溶性淀粉合成酶活性计算公式为：
SSS活性（umol/gmin）= 1045*△A/样本鲜重/1000
1.3.4 GBSS活性的测定 称取样品约0.1g，加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000 r/min离心10min，弃上清液，取沉淀用1ml提取液重新悬浮以备GBSS测定，其余步骤同SSS。可溶性淀粉合成酶活性计算公式为：
GBSS活性（μmol/gmin）= 1045*△A/样本鲜重/1000
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